崔婷婷++++++張莉++++++吳琦瑋++++++陸玓++++++曹建彪

[摘要] 目的 分析血清胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242在胰腺癌診斷中的應(yīng)用價值。 方法 選取解放軍北京軍區(qū)總醫(yī)院、石景山醫(yī)院診為胰腺癌未經(jīng)治療的患者25例，隨機選取體檢中心健康體檢者35例為對照組。入組者均留取血清標本，采用ELISA法半定量檢測血清胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242的含量。 結(jié)果 血清胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242診斷胰腺癌ROC曲線下面積均>0.5（P<0.05），其中胰蛋白酶原-2曲線下面積最大，其次為CA199，CA50與CA242相仿。 結(jié)論 4種血清腫瘤標志物胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242對胰腺癌均有一定的診斷價值，但因各自具有局限性，均非單一理想診斷胰腺癌的腫瘤標志物。

[關(guān)鍵詞] 胰腺癌；血清胰蛋白酶原-2；CA199；CA50；CA242

[中圖分類號] R735.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）11（a）-0054-04

胰腺癌是一種起病隱匿、進展速度快、預(yù)后極差的消化系惡性腫瘤，5年生存率在所有惡性腫瘤中最低，在美國僅為6%左右，即使已行早期根治性手術(shù)切除的患者5年生存率也只有24%，但因其起病隱匿，53%的患者發(fā)現(xiàn)時已有遠處轉(zhuǎn)移，5年生存率僅為0～2%[1]。在胰腺癌早期診斷方法中，腫瘤標志物檢測方法簡便、費用低廉，已被廣泛應(yīng)用于臨床。目前比較普遍應(yīng)用于胰腺癌診斷的血清學(xué)腫瘤標志物有CA199、CA50、CA242等。胰蛋白酶原-2，絲氨酸蛋白酶，絕大部分由胰腺腺泡分泌，以酶原的形式分泌到胰液中，Hedstr？觟m等[2]的研究提示，胰蛋白酶原-2可能與胰腺癌相關(guān)，本研究采用ELISA法定量檢測胰腺癌、正常對照者血清中胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242含量，應(yīng)用ROC曲線探討其在檢測胰腺癌中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2009年12月～2011年6月解放軍北京軍區(qū)總醫(yī)院、2011年6月～2012年2月北京市石景山醫(yī)院就診內(nèi)、外科未經(jīng)治療的胰腺癌住院患者25例為胰腺癌組，其中男14例，女11例，平均年齡（66.36±12.98）歲，入組前均未行手術(shù)及放化療治療，均由術(shù)后病理或影像學(xué)資料+長期隨訪證實。隨機選取同期于解放軍北京軍區(qū)總醫(yī)院及石景山醫(yī)院體檢中心進行健康體檢的35例為健康對照組，其中男20例，女15例，平均年齡（43.54±11.28）歲，均無明顯上消化道癥狀及胰腺疾病病史；并排除其他腫瘤患者及孕婦、酗酒者、藥癮者。本研究獲得上述兩家醫(yī)院倫理委員會倫理審查批準。

1.2 標本采集與檢測

留取清晨空腹靜脈全血4 ml，標本經(jīng)1000×g離心后去上層血清分裝至Eppendorf（EP）管凍存于-70℃，檢測前1天將凍存標本于4℃冷藏室解凍，檢測前取出放置室溫（20℃）1 h，應(yīng)用標準ELISA操作流程（雙抗體夾心法）檢測，采用全自動多功能酶標儀及相應(yīng)檢測統(tǒng)計軟件進行分析，胰蛋白酶原-2及CA199、CA242、CA50檢測試劑盒由北京永瀚星港生物技術(shù)有限公司惠贈，酶標儀為全自動多功能酶標儀（OLY- MPUS5421全自動生化分析儀）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC曲線），找出最佳截斷點（ROC曲線上最左上方的點，此時靈敏度及特異度均較高，或根據(jù)文獻設(shè)定的臨界值選取臨界點），因數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，采用中位數(shù)、四分位數(shù)間距描述各組結(jié)果。

2 結(jié)果

各腫瘤標志物ROC曲線如圖1。

圖1 各腫瘤標志物ROC曲線

胰蛋白酶原-2：AUC=0.988，P<0.01，拒絕無效假設(shè)（AUC=0.5）；CA199：AUC=0.906，P<0.01，拒絕無效假設(shè)（AUC=0.5）；CA50：AUC=0.833，P<0.01，拒絕無效假設(shè)（AUC=0.5）；CA242：AUC=0.834，P<0.01，拒絕無效假設(shè)（AUC=0.5）

2.1 血清胰蛋白酶原-2鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

以點SEN 0.960（1-SPE 0.086）為最佳臨界點，其對應(yīng)的臨界值為1.85 ng/ml，ROC曲線下面積為0.988（P<0.01），此時血清胰蛋白酶原-2用于鑒別胰腺癌患者與正常人的靈敏度為96%、特異度為91.4%（圖1D），兩組血清胰蛋白酶原-2含量見表1。

表1 兩組血清胰蛋白酶原-2含量的檢測值（ng/ml）

M：中位數(shù)；QL-QU：四分位數(shù)間距；Min-Max：最小值-最大值

2.2 CA199鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

當前通常以37 U/ml作為胰腺癌診斷臨界值，本試驗選取最接近點SEN 0.88（1-SPE 0.171），相應(yīng)臨界值為37.20 U/ml，ROC曲線下面積為0.906（P<0.01），此時CA199鑒別胰腺癌與正常人的靈敏度為88%、特異度為82.9%（圖1B），兩組血清CA199含量的檢測值見表2。

表2 兩組血清CA199含量的檢測值（U/ml）

M：中位數(shù)；QL-QU：四分位數(shù)間距；Min-Max：最小值-最大值

2.3 CA50鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

當前通常以20 U/ml作為胰腺癌診斷臨界值，本試驗選取最接近點SEN 0.72（1-SPE 0.200），相應(yīng)臨界值為19.68 U/ml，ROC曲線下面積為0.833（P<0.01），此時CA50鑒別胰腺癌與正常人的靈敏度為72%、特異度為80%（圖1A），兩組血清CA50含量的檢測值見表3。

表3 兩組血清CA50含量的檢測值（U/ml）

M：中位數(shù)；QL-QU：四分位數(shù)間距；Min-Max：最小值-最大值

2.4 CA242鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

當前通常以20 U/ml作為胰腺癌診斷臨界值，本試驗選取最接近點SEN 0.68（1-SPE 0.143），相應(yīng)臨界值為20.45 U/ml，ROC曲線下面積為0.834（P<0.01），此時CA242鑒別胰腺癌與正常人的靈敏度為68%、特異度為85.7%（圖1C），兩組血清CA242含量的檢測值見表4。

表4 兩組血清CA242含量的檢測值（U/ml）

M：中位數(shù)；QL-QU：四分位數(shù)間距；Min-Max：最小值-最大值

3 討論

胰腺癌是預(yù)后極差的惡性腫瘤，近年我國胰腺癌發(fā)病率明顯上升，且多數(shù)胰腺癌確診時已屬中晚期，失去了最佳治療時機，預(yù)后差[3]。Pelaez-Luna等[4]回顧性分析45例胰腺癌患者114次CT掃描（胰腺癌診斷時或診斷前），發(fā)現(xiàn)在臨床診斷胰腺癌前6個月做CT掃描，部分未檢測到病變，部分為可切除性病變，但有臨床癥狀患者幾乎均屬于不可切除性胰腺癌，提示在胰腺癌臨床診斷前，僅有6個月的時間窗，此時病灶多數(shù)可切除。但多數(shù)無癥狀者，一般不會就診，故“因癥就診”者是不太可能檢測到真正意義上的早期可治愈的胰腺癌的，必須對無癥狀者進行篩查才有可能發(fā)現(xiàn)早期胰腺癌[5]。腫瘤標志物是指在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞所產(chǎn)生或分泌并釋放到血液、細胞及體液中，反映腫瘤存在和生長的一類物質(zhì)，已被廣泛應(yīng)用于臨床，在腫瘤的診斷和預(yù)后判斷中發(fā)揮了巨大作用。糖類抗原CA199是一種非特異性的腫瘤相關(guān)抗原，在胰腺癌患者血清中升高最為顯著[6]，是當前國內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的胰腺癌腫瘤標志物[7]。CA50是一種缺少巖藻糖殘基碳水化合物的糖蛋白，其構(gòu)型與CA199有相似的抗原決定簇，Lewis抗原陽性或陰性的人種均能檢測出，故認為CA50對腫瘤的識別譜較CA199更為廣泛[8]。CA242主要存在于胰腺和結(jié)腸惡性腫瘤細胞中，是不同于CA199和CA50的唾液酸化糖酯類抗原，它的單克隆抗體與Lewis-a血型物質(zhì)及唾液酸化的半乳糖苷均不發(fā)生反應(yīng)，在胰腺癌中有較高的特異度、靈敏度。胰蛋白酶原-2，絕大部分以胰腺腺泡酶原的形式分泌到胰液中，并在腸內(nèi)被腸激酶激活。近年來發(fā)現(xiàn)，胰蛋白酶原-2在一些腫瘤細胞中呈高表達[9-12]。本試驗胰腺癌組胰蛋白酶原-2含量明顯高于正常組，提示血清胰蛋白酶原-2與胰腺癌關(guān)系密切。本文采用ROC曲線對胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242在診斷胰腺癌中進行分析，結(jié)果顯示，胰蛋白酶原-2鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.988，以1.85 ng/ml為臨界點，靈敏度為96%，特異度為91.4%。CA199鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.906，以37.2 U/ml為臨界點，靈敏度為88%，特異度為82.9%。CA50鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.833，以19.68 U/ml為臨界點，靈敏度為72%，特異度為80%。CA724鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.834 U/ml，以20.45 U/ml為臨界點，靈敏度為68%，特異度為85.7%。

本試驗中可見4種標志物ROC曲線下面積，胰蛋白酶原-2最高，其次為C199，CA242和CA50接近，均>0.5，提示以上腫瘤標志物用于診斷胰腺癌均有一定的臨床意義。據(jù)文獻報道及臨床試驗觀察，提示各自有其局限性：CA50無器官特異度，多種腫瘤中均可增高，尤其是胃腸癌，在肝膽疾病患者，尤其是黃疸中也升高[7]，因此單獨測定CA50對胰腺癌的診斷意義較小。Kawa等[13]認為，CA242比CA199和CA50更特異，在胰腺炎、慢性肝炎和肝硬化等良性疾病中也很少升高，并且不受肝實質(zhì)損害、膽汁淤積的影響，但也有文獻報道CA242、CA50的靈敏度和特異度均不優(yōu)于CA199[14]。盡管CA199是目前對胰腺癌靈敏度最好的標志物[7]，但在Lewisa陰性基因人群中無法表達，因此此血清型的腫瘤患者表現(xiàn)為CA199陰性。此外，急慢性胰腺炎、膽囊炎、膽管阻塞、肝炎、肝硬化等疾病中，CA199也有不同程度的升高，且在分化差的腫瘤中表達也較低[15-16]。目前鮮有關(guān)于胰蛋白酶原-2與胰腺腫瘤大小、病情嚴重程度、病理分期相關(guān)性，及是否能預(yù)測胰腺癌預(yù)后、評價治療效果的研究報道，且有文獻報道[17]胰蛋白酶原-2在急性胰腺炎患者血清中呈現(xiàn)高表達，因此，胰蛋白酶原-2也非胰腺癌絕對理想指標。目前尚未發(fā)現(xiàn)單一理想診斷胰腺癌的腫瘤標志物，近年傾向于將靈敏度、特異度較高的腫瘤標志物聯(lián)合檢測。

[參考文獻]

[1] Siegel R，Ma J，Zou Z，et al.Cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，2014，64（1）：9-29.

[2] Hedstr？觟m J，Kemppainen E，Andersen J，et al.A comparison of serum trypsinogen-2 and trypsin-2-alpha1-antitrypsin complex with lipase and amylase in the diagnosis and assessment of severity in the early phase of acute pancreatitis[J].Am J Gastroenterol，2001，96（2）：424-430.

[3] Long H，Li Q，Wang Y，et al.Effective combination gene therapy using Ceacam6 -shRNA and the fusion suicide gene yCDgly TK for pancreatic carcinoma in vitro[J].Exp Ther Med，2013，5（1）：155-161.

[4] Pelaez-Luna M，Takahashi N，F(xiàn)letcher JG，et al.Resectability of presymptomatic pancreatic cancer and its relationship to onset of diabetes：a retrospective review of CT scans and fasting glucose values prior to diagnosis[J].Am J Gastroenterol，2007，102（10）：2157-2163.

[5] 李兆申.胰腺癌早期診斷研究現(xiàn)狀及展望[J].臨床肝膽疾病雜志，2010，5（26）：451-458.

[6] Banfi G，Bravi S，Ardemagni A，et al.CA199，CA242 and CEA in the diagnosis and follow-up of pancreatic cancer[J].Int J Biol Markers，2006，11（2）：77-81.

[7] Szajda SD，Waszkiewicz N，Chojnowska S，et al.Carbohydrate markers of pancreatic cancer[J].Biochem Soc Trans， 2011，39（1）：340-343.

[8] 賴建平，孔令山，鄔愛珍，等.CA50、CA199、CEA聯(lián)檢在胰腺疾病診斷中的價值[J].放射免疫學(xué)雜志，2004，17（3）：168-169.

[9] Miyata S，Miyagi Y，Miyagi E，et al.Stimulation of cellular growth and adhesion to fibronectin and vitronectin in culture and tumorigenicity in nude mice by overexpression of trypsinogen in human gastric cancer cells[J].Clin Exp Metastases，1998，16（7）：613-622.

[10] Miyata S，Koshikawa N.Expression of trypsin in human cancer cell lines and cancer tissues and its tight binding to soluble form of Alzheimer amyloid precursor protein in culture[J].J Biochem，1999，125（6）：1067-1076.

[11] Hirahara F，Miyagi Y.Trypsinogen expression in human ovarian carcinomas[J].Int J Cancer，1995，63（2）：176-181.

[12] Kawano N，Osawa H，Ito T，et al.Expression of gelatinase A，tissue inhibitor of metalloproteinases-2，matrilysin，and trypsin（ogen） in lung neoplasms：an immunohistochemical study[J].Hum Pathol，1997，28（5）：613-622.

[13] Kawa S，Tomoo M，Hasebe O，et al.Comparative study of CA242 and CA199 for the diagnosis of pancreatic cancer[J].Br J Cancer，1994，70（3）：481-486.

[14] Goonetilleke KS，Siriwardena AK.Systematic review of carbohy-drateantigen（CA199）as a biochemical marker in the diagnosis of pancreatic cancer[J].Eur J Surg Oncol，2007，33（3）：266-270.

[15] 王繼恒，高革，李浩然，等.血清CA199水平在膽總管結(jié)石中的臨床意義[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2010， 19（7）：659-660.

[16] 陳達，樊艷華.CA199在胰腺癌中的應(yīng)用價值及局限性[J].臨床肝膽病雜志，2013，29（3）：239-241.

[17] Itkonen，Outi.Human trypsinogens in the pancreas and in cancer[J].Scand J Clin Lab invest，2010，70（2）：136-143.

（收稿日期：2014-09-29 本文編輯：郭靜娟）

[4] Pelaez-Luna M，Takahashi N，F(xiàn)letcher JG，et al.Resectability of presymptomatic pancreatic cancer and its relationship to onset of diabetes：a retrospective review of CT scans and fasting glucose values prior to diagnosis[J].Am J Gastroenterol，2007，102（10）：2157-2163.

[5] 李兆申.胰腺癌早期診斷研究現(xiàn)狀及展望[J].臨床肝膽疾病雜志，2010，5（26）：451-458.

[6] Banfi G，Bravi S，Ardemagni A，et al.CA199，CA242 and CEA in the diagnosis and follow-up of pancreatic cancer[J].Int J Biol Markers，2006，11（2）：77-81.

[7] Szajda SD，Waszkiewicz N，Chojnowska S，et al.Carbohydrate markers of pancreatic cancer[J].Biochem Soc Trans， 2011，39（1）：340-343.

[8] 賴建平，孔令山，鄔愛珍，等.CA50、CA199、CEA聯(lián)檢在胰腺疾病診斷中的價值[J].放射免疫學(xué)雜志，2004，17（3）：168-169.

[9] Miyata S，Miyagi Y，Miyagi E，et al.Stimulation of cellular growth and adhesion to fibronectin and vitronectin in culture and tumorigenicity in nude mice by overexpression of trypsinogen in human gastric cancer cells[J].Clin Exp Metastases，1998，16（7）：613-622.

[10] Miyata S，Koshikawa N.Expression of trypsin in human cancer cell lines and cancer tissues and its tight binding to soluble form of Alzheimer amyloid precursor protein in culture[J].J Biochem，1999，125（6）：1067-1076.

[11] Hirahara F，Miyagi Y.Trypsinogen expression in human ovarian carcinomas[J].Int J Cancer，1995，63（2）：176-181.

[12] Kawano N，Osawa H，Ito T，et al.Expression of gelatinase A，tissue inhibitor of metalloproteinases-2，matrilysin，and trypsin（ogen） in lung neoplasms：an immunohistochemical study[J].Hum Pathol，1997，28（5）：613-622.

[13] Kawa S，Tomoo M，Hasebe O，et al.Comparative study of CA242 and CA199 for the diagnosis of pancreatic cancer[J].Br J Cancer，1994，70（3）：481-486.

[14] Goonetilleke KS，Siriwardena AK.Systematic review of carbohy-drateantigen（CA199）as a biochemical marker in the diagnosis of pancreatic cancer[J].Eur J Surg Oncol，2007，33（3）：266-270.

[15] 王繼恒，高革，李浩然，等.血清CA199水平在膽總管結(jié)石中的臨床意義[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2010， 19（7）：659-660.

[16] 陳達，樊艷華.CA199在胰腺癌中的應(yīng)用價值及局限性[J].臨床肝膽病雜志，2013，29（3）：239-241.

[17] Itkonen，Outi.Human trypsinogens in the pancreas and in cancer[J].Scand J Clin Lab invest，2010，70（2）：136-143.

（收稿日期：2014-09-29 本文編輯：郭靜娟）

[4] Pelaez-Luna M，Takahashi N，F(xiàn)letcher JG，et al.Resectability of presymptomatic pancreatic cancer and its relationship to onset of diabetes：a retrospective review of CT scans and fasting glucose values prior to diagnosis[J].Am J Gastroenterol，2007，102（10）：2157-2163.

[5] 李兆申.胰腺癌早期診斷研究現(xiàn)狀及展望[J].臨床肝膽疾病雜志，2010，5（26）：451-458.

[6] Banfi G，Bravi S，Ardemagni A，et al.CA199，CA242 and CEA in the diagnosis and follow-up of pancreatic cancer[J].Int J Biol Markers，2006，11（2）：77-81.

[7] Szajda SD，Waszkiewicz N，Chojnowska S，et al.Carbohydrate markers of pancreatic cancer[J].Biochem Soc Trans， 2011，39（1）：340-343.

[8] 賴建平，孔令山，鄔愛珍，等.CA50、CA199、CEA聯(lián)檢在胰腺疾病診斷中的價值[J].放射免疫學(xué)雜志，2004，17（3）：168-169.

[9] Miyata S，Miyagi Y，Miyagi E，et al.Stimulation of cellular growth and adhesion to fibronectin and vitronectin in culture and tumorigenicity in nude mice by overexpression of trypsinogen in human gastric cancer cells[J].Clin Exp Metastases，1998，16（7）：613-622.

[10] Miyata S，Koshikawa N.Expression of trypsin in human cancer cell lines and cancer tissues and its tight binding to soluble form of Alzheimer amyloid precursor protein in culture[J].J Biochem，1999，125（6）：1067-1076.

[11] Hirahara F，Miyagi Y.Trypsinogen expression in human ovarian carcinomas[J].Int J Cancer，1995，63（2）：176-181.

[12] Kawano N，Osawa H，Ito T，et al.Expression of gelatinase A，tissue inhibitor of metalloproteinases-2，matrilysin，and trypsin（ogen） in lung neoplasms：an immunohistochemical study[J].Hum Pathol，1997，28（5）：613-622.

[13] Kawa S，Tomoo M，Hasebe O，et al.Comparative study of CA242 and CA199 for the diagnosis of pancreatic cancer[J].Br J Cancer，1994，70（3）：481-486.

[14] Goonetilleke KS，Siriwardena AK.Systematic review of carbohy-drateantigen（CA199）as a biochemical marker in the diagnosis of pancreatic cancer[J].Eur J Surg Oncol，2007，33（3）：266-270.

[15] 王繼恒，高革，李浩然，等.血清CA199水平在膽總管結(jié)石中的臨床意義[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2010， 19（7）：659-660.

[16] 陳達，樊艷華.CA199在胰腺癌中的應(yīng)用價值及局限性[J].臨床肝膽病雜志，2013，29（3）：239-241.

[17] Itkonen，Outi.Human trypsinogens in the pancreas and in cancer[J].Scand J Clin Lab invest，2010，70（2）：136-143.

（收稿日期：2014-09-29 本文編輯：郭靜娟）