北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的含量分析

譚曉虹，田嘉銘，王志寶，馬寧，楊曉媛，張丹參

（1.河北北方學(xué)院藥學(xué)系，河北張家口075000；2.河北北方學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河北張家口075000；3.河北科技大學(xué)，河北石家莊050000）

北五味子（Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.）為木蘭科五味子屬植物的干燥成熟果實(shí)。具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心的功效。北五味子在我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中使用有悠久歷史，主要用于久咳虛喘，夢(mèng)遺滑精，久瀉不止，內(nèi)熱消渴，心悸失眠等癥的治療[1]，北五味子主要含有木脂素、萜類、有機(jī)酸、揮發(fā)油及多糖等有效成分[2]?，F(xiàn)代研究表明北五味子有效成分具有減輕肝損害和防治肝纖維化的作用[3]、對(duì)高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用[4]，還可抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化[5]。而且，北五味子作為藥食兼用的植物，除在臨床上廣泛應(yīng)用外，由于其果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，在食品領(lǐng)域也被備受矚目，如可用于釀酒、制作飲料等。本實(shí)驗(yàn)以甲醇作為提取溶劑采用超聲提取法，利用高效液相色譜對(duì)北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的含量進(jìn)行測(cè)定，為北五味子的質(zhì)量控制及科學(xué)使用提供實(shí)驗(yàn)參考。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀：美國(guó)Agilent1100；SZ-97A自動(dòng)三重水蒸餾器：上海亞榮生化儀器廠；JN-5200DT型超聲儀：寧波江南儀器廠；756MC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海精密科學(xué)儀器廠；BT224s電子天平：北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；DHG-9070AS型新型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。

1.2 材料

五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)品（110857-200709）、五味子酯甲標(biāo)準(zhǔn)品（111529-200503）：中國(guó)生物制品檢定所，北五味子：張家口市藥材公司，經(jīng)鑒定為遼寧產(chǎn)北五味子，甲醇（分析純）：天津市化學(xué)試劑三廠；甲醇（色譜純）：天津市贏達(dá)稀貴試劑化工廠；實(shí)驗(yàn)用水均為三重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HypersinBDSC8柱（150mm×4.6mm，5μm）；柱溫 30℃；流動(dòng)相：甲醇-0.1%醋酸（70∶30）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)品0. 0099 g，五味子酯甲標(biāo)準(zhǔn)品0. 0099 g，分別用甲醇溶解并定容至10 mL，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液的制備

將北五味子用蒸餾水漂洗3次后置50℃的干燥箱中干燥至恒重，取出粉碎成粉末狀。準(zhǔn)確稱取北五味子粉末1 g各5份，置于50 mL比色管中，用甲醇定容至刻度，超聲功率220 W，超聲提取30 min后，常壓過(guò)濾，在濾渣中加入甲醇50 mL，再進(jìn)行超聲提取30 min[6]，常壓過(guò)濾，合并兩次濾液定容至50 mL，濾液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，所得濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

取一定體積的五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和五味子酯甲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，將二者進(jìn)行混合，用甲醇將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成五味子醇甲質(zhì)量濃度為10.00、14.00、18.00、22.00和26.00 ng/μL，五味子酯甲質(zhì)量濃度為2.500、5.000、7.500、10.00和 12.50 ng/μL 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照2.1項(xiàng)下色譜條件，對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析，分別以質(zhì)量濃度x（ng/μL）為橫坐標(biāo)，峰面積y（μV·s）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得到五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)y1=40.407x1-8.538，r=0. 9994及五味子酯甲的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)y2=24.532x2-3.690，r=0. 9995。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

吸取同一五味子醇甲和五味子酯甲混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在“2.1”色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，考察精密度，結(jié)果表明五味子醇甲的RSD為0.910%（n=5），五味子酯甲的RSD為1.26%（n=5）。

2.6 重復(fù)性考察

精密稱取同一批次北五味子粉末，按供試品溶液的制備方法平行制備5份，在“2.1”色譜條件下進(jìn)行HPLC分析測(cè)定，結(jié)果表明北五味子中五味子醇甲、五味子酯甲的RSD分別為1.40%和1.43%。

2.7 穩(wěn)定性考察

取同一供試品溶液，在室溫下分別放置0、2、4、8、12、24 h后進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明：北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲均在24 h內(nèi)穩(wěn)定。北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的RSD為2.98%和2.19%。

2.8 回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取已知含量的北五味子粉末5份，分別定量加入五味子醇甲對(duì)照品20.0 ng/μL，五味子酯甲對(duì)照品5.00 ng/μL，按方法“2.2”制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算回收率，結(jié)果表明北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的平均回收率分別為100.9%、101.4%，RSD分別為1.11%、1.24%（n=5）。

2.9 樣品測(cè)定

精密吸取上述供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣20 μL分析測(cè)定，記錄色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出樣品中五味子醇甲和五味子酯甲的含量。結(jié)果見(jiàn)表1；色譜圖見(jiàn)圖1～圖2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用甲醇作溶劑超聲提取北五味子中五味子酯甲和五味子醇甲，提取時(shí)間短，所需溶劑量少，方法簡(jiǎn)便易行且提取效果良好。利用HPLC法測(cè)定北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲含量，實(shí)驗(yàn)表明以甲醇-0.1%醋酸（70∶30）作為流動(dòng)相，北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲峰形良好，保留時(shí)間短，分離度高。方法精密度高，重復(fù)性及穩(wěn)定性良好，回收率符合要求，具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。可用于北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的定量分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)表明，北五味子中五味子醇甲的含量明顯高于五味子酯甲，這與文獻(xiàn)報(bào)道的北五味子中的五味子醇甲的含量相對(duì)高相一致[7]。并且在2005版藥典中，是以五味子中所含的五味子醇甲作為藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)，因此本實(shí)驗(yàn)可以為五味子的質(zhì)量監(jiān)控提供一定的參考。

表1 北五味子中五味子醇甲、五味子酯甲的含量（n=5）Table 1 The schisandrin and schisantherin A content in Schisandra chinensis（Turcz.）Baill（n=5）

圖1 五味子醇甲、五味子酯甲標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖Fig.1 HPLC chromatograms of reference substance of schisandrin and schisantherin A

圖2 北五味子樣品HPLC圖Fig.2 HPLC chromatograms of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill

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