黃蓮芬， 謝永強(qiáng)， 鄧秋連， 劉海英， 鐘華敏， 陳艷文， 周 帥， 陳吟霜， 周珍文

·論著·

647株金黃色葡萄球菌兒童分離株的分布和耐藥性分析

黃蓮芬1， 謝永強(qiáng)1， 鄧秋連2， 劉海英1， 鐘華敏1， 陳艷文1， 周 帥1， 陳吟霜1， 周珍文1

目的了解兒童金黃色葡萄球菌（金葡菌）分離株耐藥情況，為臨床治療用藥提供依據(jù)。方法采用微生物檢驗(yàn)報(bào)告系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)分析金葡菌分離株中耐甲氧西林金葡菌（MRSA）比率，并分析MRSA和甲氧西林敏感金葡菌（MSSA）對主要抗菌藥物的耐藥性差異。結(jié)果 共分離到647株金葡菌，其中MRSA 194株，占29.98%。MRSA和MSSA對萬古霉素、替加環(huán)素、替考拉寧、利奈唑胺、奎奴普丁-達(dá)福普汀和呋喃妥因均100%敏感，對甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑、阿米卡星、青霉素的耐藥率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MRSA對大多β內(nèi)酰胺類藥物及其含酶抑制劑、紅霉素、四環(huán)素、利福平、慶大霉素、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星的耐藥率較MSSA高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 金葡菌兒童臨床感染形勢嚴(yán)峻，MRSA和MSSA對多種抗菌藥物耐藥率差異明顯，兒童金葡菌相關(guān)性感染可根據(jù)病情及參考藥敏結(jié)果選用敏感的抗菌藥物治療。

金黃色葡萄球菌； 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌； 感染； 耐藥性

金黃色葡萄球菌（金葡菌），是人類化膿性感染中最常見的病原菌，可引起皮膚、軟組織、泌尿道、骨、關(guān)節(jié)、呼吸道、眼部及中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎、心內(nèi)膜炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、骨髓炎，甚至敗血癥、膿毒癥等全身性感染。致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶。金葡菌的外毒素如腸毒素可引起食物中毒，溶血毒素、殺白細(xì)胞毒素、休克毒素TSST-1、表皮剝脫毒素等多種毒素與其致病力有關(guān)，產(chǎn)生的血漿凝固酶與其感染易局部化有關(guān)。金葡菌已成為醫(yī)院感染的重要病原菌之一。耐甲氧西林金葡菌（MRSA）的不斷出現(xiàn)，更給臨床預(yù)防和治療金葡菌感染性疾病帶來了極大挑戰(zhàn)，而部分金葡菌菌株可形成生物膜，容易使感染局部化和慢性化，導(dǎo)致疾病遷延不愈。目前，兒童金葡菌感染率居高不下，相關(guān)感染性疾病致死、致殘率高，耐藥形勢亦不斷加劇，因此，迫切需要對之采取行之有效的防治措施。本研究旨在了解兒童金葡菌分離株分布特征及其對主要抗菌藥物的耐藥情況，為其感染預(yù)防和臨床治療提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 臨床資料 2011年1月1日—2012年12月31日，我中心兒童院區(qū)共分離647株金葡菌?；純耗挲g最小4 d，最大12歲，其中男376例，女263例。

1.1.2 培養(yǎng)基和試劑 血瓊脂平皿、萬古霉素巧克力瓊脂平皿、MH藥敏平皿均為英國OXOID公司產(chǎn)品，血培養(yǎng)瓶為美國BD公司產(chǎn)品，GP67藥敏卡、藥敏用生理鹽水、比濁儀均為法國生物梅里埃公司產(chǎn)品。

1.1.3 儀器 BD9120型全自動血液培養(yǎng)儀為美國BD公司產(chǎn)品，VITEC-2 compact鑒定系統(tǒng)為法國生物梅里埃公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 金葡菌的分離培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗(yàn) 各種標(biāo)本金葡菌分離培養(yǎng)按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）進(jìn)行［1］，根據(jù)菌落形態(tài)特征，溶血情況，涂片染色觀察鏡下形態(tài)，血漿凝固酶試驗(yàn)和甘露醇產(chǎn)酸試驗(yàn)或VITEC-2 compact分析儀進(jìn)行鑒定，K-B法或VITEC-2 compact分析儀進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，采用CLSI 2010標(biāo)準(zhǔn)判讀藥敏結(jié)果，抑菌圈的邊緣以肉眼看不到細(xì)菌生長為限。K-B試驗(yàn)時，30μg頭孢西丁藥敏紙片抑菌圈直徑≤21 mm定為MRSA，或用VITEC-2 compact分析儀GP67藥敏卡頭孢西丁篩選試驗(yàn)陽性定為 MRSA。質(zhì)控菌株為金葡菌ATCC 25923。

1.2.2 數(shù)據(jù)處理 采用微生物檢驗(yàn)報(bào)告系統(tǒng)的數(shù)據(jù)分析功能進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析金葡菌標(biāo)本來源情況、病區(qū)分布特征，檢測分離菌株對萬古霉素、替加環(huán)素、替考拉寧、利奈唑胺、奎奴普丁-達(dá)福普汀、呋喃妥因、紅霉素、克林霉素、青霉素、苯唑西林、頭孢他啶、四環(huán)素、頭孢唑林、頭孢西丁、利福平、甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑、氨芐西林-舒巴坦、頭孢呋辛、阿米卡星、慶大霉素、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星的耐藥情況，根據(jù)藥敏結(jié)果判斷菌株是MRSA或MSSA，計(jì)算所有分離菌株總的MRSA比率，分別計(jì)算主要標(biāo)本MRSA比率，分析MRSA和MSSA菌株對以上抗菌藥物的耐藥率。

2 結(jié)果

2.1 金葡菌標(biāo)本來源

在我院門診和住院患兒各種標(biāo)本中共分離到647株金葡菌，主要標(biāo)本來源情況及其MRSA比率見表1。

2.2 金葡菌在臨床科室的分布

647株金葡菌中，門診分離196株，占總分離株數(shù)的30.29%，其中皮膚科137株，耳鼻喉科45株，其他科室14株；住院分離451株，占總分離菌株數(shù)的69.71%，其中耳鼻喉科129株，新生兒科50株，普通重癥監(jiān)護(hù)病房（ICU）43株，新生兒神經(jīng)科重癥監(jiān)護(hù)病房（NICU）22株，外科78株，呼吸科43株，消化科30株，急診留觀室13株，其他內(nèi)科43株。

2.3 金葡菌對主要抗菌藥物的耐藥分析

647株金葡菌對萬古霉素、替加環(huán)素、替考拉寧、利奈唑胺、奎奴普丁-達(dá)福普汀、呋喃妥因均為100%敏感，對其他16種抗菌藥物的耐藥率見表2。紅霉素誘導(dǎo)克林霉素耐藥試驗(yàn)即 D試驗(yàn)陽性率23.42%。MRSA共檢出194株，占總分離菌株數(shù)的29.98%，其中門診29株，住院165株。

表1 647株金葡菌標(biāo)本來源分布及其MRSA比率Table1 The specimen distribution of 647 S.aureus strains and the corresponding prevalence of methicillin-resistant strains

表2 647株金葡菌對16種抗菌藥物耐藥率Table2 Antimicrobial resistance of 647 S.aureus isolates to 16 antimicrobial agents （%）

3 討論

金葡菌是臨床上常見的毒力較強(qiáng)的細(xì)菌。自從上世紀(jì)40年代青霉素問世后，金葡菌引起的感染性疾病曾得到一定程度的控制，但隨著青霉素的廣泛使用，及頭孢菌素類等抗生素的不合理應(yīng)用，目前已經(jīng)出現(xiàn)耐多種抗菌藥物的金葡菌。

本研究針對647株兒童金葡菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，主要標(biāo)本MRSA分離率從高到低排列為體液、胸腹水、膿液、痰、扁桃體腺樣體組織、咽拭子、耳分泌物、陰道分泌物、血液、創(chuàng)面拭子。兒童不同標(biāo)本MRSA比率差異明顯，尤其腦脊液和胸腹水的MRSA分離率明顯高于其他來源標(biāo)本，軟組織和呼吸道MRSA分離率稍高于陳江華等［2］的報(bào)道，痰和分泌物MRSA分離率顯著低于趙永靜等［3］的報(bào)道。這可能與患者疾病類型以及嚴(yán)重程度有一定關(guān)系，可作為藥敏結(jié)果出來前臨床醫(yī)師進(jìn)行金葡菌感染經(jīng)驗(yàn)性治療的參考。

本次MRSA檢出率為29.98%，低于綜合性醫(yī)院水 平［4-5］，但 高 于 往 年 報(bào)道的其他 地 區(qū) 兒 童 醫(yī)院［5-8］。MRSA占多的科室主要有皮膚科、耳鼻喉科、門診和患者。門診患兒常有皮膚、眼、陰道炎或化膿性中耳炎等感染；耳鼻喉科住院患者主要有扁桃體腺樣體肥大或呼吸暫停綜合征；新生兒科的肺炎患者可伴有新生兒呼吸綜合征表現(xiàn)，這可能與新生兒免疫力低，呼吸道先天免疫防御機(jī)能發(fā)育不完善有關(guān)。值得注意的是，急診室金葡菌分離率雖僅2%，但是患兒往往可能患有金葡菌敗血癥，病情兇險，病死率高。

本研究分析發(fā)現(xiàn)，所有分離菌株對萬古霉素、替加環(huán)素、替考拉寧、利奈唑胺、奎奴普丁-達(dá)福普汀、呋喃妥因6種藥物均100%敏感，并且MRSA和MSSA分離菌株對該6種藥物及磺胺類、阿米卡星的耐藥性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對磺胺類和阿米卡星耐藥率均較低。臨床上可根據(jù)病情需要作為優(yōu)先治療選擇藥物。本研究兒童患者分離的 MRSA和MSSA對喹諾酮類和氨基糖苷類抗菌藥物耐藥率均很低，MRSA對環(huán)丙沙星和慶大霉素耐藥率均為10.14%，對左氧氟沙星耐藥率僅4.79%，遠(yuǎn)低于趙永 靜 等［3］、曾 釗寧等［9］的 報(bào) 道，這可 能 與 小 兒MRSA患者中極少使用這兩類藥有關(guān)。另外，本研究發(fā)現(xiàn)的7株（2.5%）對苯唑西林敏感菌株，對頭孢西丁呈現(xiàn)耐藥，說明以往的苯唑西林耐藥判斷MRSA標(biāo)準(zhǔn)會存在漏檢。

由于MRSA具多重耐藥特征，目前已成為醫(yī)院感染的主要病原菌之一，臨床上檢測并分析其對β內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、氟喹喏酮類和磺胺類等多種抗菌藥物多藥耐藥的情況和變化趨勢，可為臨床上進(jìn)一步預(yù)防MRSA多重耐藥的發(fā)生提供參考。

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Analysis of antimicrobial resistance in 647 strains of Staphylococcus aureus isolated from pediatric patients

HUANG Lianfen，XIE Yongqiang，DENG Qiulian，LIU Haiying，ZHONG Huamin，CHEN Yanwen，ZHOU Shuai，CHEN Yinshuang，ZHOU Zhenwen.（Department of Laboratory Medicine，Guangzhou Children's Hospital，Guangzhou Women and Children Medical Center，Guangzhou 510120，China）

；ObjectiveTo explore the antibiotic resistance inStaphylococcus aureusstrains isolated from pediatric patients and the associated infections.MethodsThe prevalence of methicillin-resistantS.aureus（MRSA）was calculated and antimicrobial resistance was compared between MRSA and methicillin-susceptibleS.aureus（MSSA）strains.ResultsA total of 647 strains ofS.aureuswere isolated，of which 29.98%were MRSA.All MRSA and MSSA strains were sensitive to vancomycin，tigecycline，teicoplanin，linezolid，quinupristin-dlfopristin，and nitrofurantoin.No significant difference was found in the resistance to trimethoprim-sulfamethoxazole，amikacin，or penicillin between MRSA and MSSA.Significant difference was identified between MRSA and MSSA in the resistance to most beta-lactams and their inhibitors，erythromycin，tetracycline，rifampicin，gentamycin，ciprofloxacin and levofloxacin.ConclusionsS.aureusinfection is a serious issue in pediatric patients.Clinical antimicrobial therapy should be selected cautiously in terms of MRSA or MSSA infection.Highly active antimicrobial agents againstS.aureusshould be used while considering the specific clinical conditions.

；Staphylococcus aureus； methicillin-resistant；infection； antimicrobial resistance

R446.5

A

1009-7708（2015）02-0163-04

2014-01-08

2014-09-05

廣州市衛(wèi)生局課題（201102A212013，2013A011040022）。

1.廣州市婦女兒童醫(yī)療中心，廣州市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物室，廣州 510120。2.廣州市婦女兒童醫(yī)療中心珠江新城院區(qū)。

黃蓮芬（1982—），女，碩士，主管技師，主要從事臨床微生物檢驗(yàn)與研究。

黃蓮芬，E-mail；hlfen2008?163.com。