李文芳，陳佰鴻，毛 娟，馬宗桓，楊世茂

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，蘭州730070）

doi：10.3969/j.issn.1672－5565.2015.03.03

葡萄BRX基因家族生物信息學(xué)分析

李文芳，陳佰鴻?，毛 娟，馬宗桓，楊世茂

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，蘭州730070）

BRX基因家族是一類植物特有的轉(zhuǎn)錄因子家族，在擬南芥中參與調(diào)節(jié)根細(xì)胞的增殖與伸長(zhǎng)。利用生物信息學(xué)方法對(duì)葡萄基因組中存在的BRX基因家族進(jìn)行了電子克隆，并對(duì)其進(jìn)行了基因組的定位、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、二級(jí)結(jié)構(gòu)及亞細(xì)胞定位的預(yù)測(cè)與分析，并對(duì)其與其它植物進(jìn)化的親緣關(guān)系進(jìn)行了研究。基因組定位結(jié)果發(fā)現(xiàn)：葡萄基因組中6個(gè)BRX基因集中分布在3條染色體上，其中VvBRX1和VvBRX2分布在第2條染色體上，VvBRX3和VvBRX4分布在第9條染色體上，VvBRX5 和VvBRX6分布在第11條染色體上；編碼蛋白的氨基酸數(shù)目為360～560個(gè)，VvBRX5的相對(duì)分子量（61 884.4）和理論等電點(diǎn)（9.38）均最大，而VvBRX1的相對(duì)分子量（40 239.1）和理論等電點(diǎn)（6.23）均最小。研究顯示，不同成員間氨基酸數(shù)目、氨基酸序列間存在一定的差異，但都為疏水性蛋白；α－螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲為6個(gè)BRX氨基酸序列的主要組成部分；均不存在跨膜域及信號(hào)肽?；蚪Y(jié)構(gòu)分析表明，6個(gè)BRX基因都含有外顯子和內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。亞細(xì)胞定位分析表明：6個(gè)VvBRX基因均定位于細(xì)胞核。系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果表明，VvBRX1、VvBRX2基因與胡楊的親緣關(guān)系最近，相似性達(dá)96％；VvBRX3、VvBRX4與蓖麻、麻瘋樹(shù)、柑橘、可可、大豆聚為一類，說(shuō)明其進(jìn)化關(guān)系較近；VvBRX5與其它VvBRX基因明顯分開(kāi)；VvBRX6基因與蓮的親緣關(guān)系最近。試驗(yàn)結(jié)果為葡萄BRX基因家族的克隆和功能分析奠定了一定的研究基礎(chǔ)。

葡萄；BRX基因家族；生物信息學(xué)分析

轉(zhuǎn)錄因子（Transcription factor，TF）又稱反式作用因子（Trans?acting factor），是一組能夠與順式作用元件（啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、調(diào)控序列和可誘導(dǎo)元件等）發(fā)生特異性結(jié)合，通過(guò)它們之間以及其它相關(guān)蛋白之間的相互作用，參與調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄，并使之以特定的強(qiáng)度在特定的時(shí)間和空間表達(dá)的結(jié)合蛋白［1］。該蛋白的作用與細(xì)胞分化、多細(xì)胞生物的形態(tài)發(fā)育、器官的建成以及對(duì)外界刺激的反應(yīng)密切相關(guān)。所有轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)均含有兩個(gè)結(jié)構(gòu)域——一個(gè)是DNA結(jié)合域（DNA binding domain），用于識(shí)別和結(jié)合順式作用元件的目標(biāo)位點(diǎn)，另一個(gè)是轉(zhuǎn)錄激活域（Activatingdomain），用來(lái)組織其它參與激活轉(zhuǎn)錄的附加蛋白［2］。

BRX（Brevis Radix）基因家族屬于一類新的植物特有的轉(zhuǎn)錄因子家族。劉佳（2008）對(duì)水稻BRX基因家族的研究發(fā)現(xiàn)，這個(gè)家族的基因不僅僅參與調(diào)控多個(gè)激素途徑和根的發(fā)育，同時(shí)也很有可能是一類新的與植物非生物脅迫相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子。擬南芥中BRX是由自然變異形成的終止突變產(chǎn)生的新基因家族，主要通過(guò)控制油菜素內(nèi)酯和生長(zhǎng)素途徑來(lái)調(diào)節(jié)根細(xì)胞的增殖與伸長(zhǎng)［3］。擬南芥中包含5個(gè)BRX基因家族的同源基因，它們的蛋白序列均含有兩個(gè)非常保守的BRX結(jié)構(gòu)域，單個(gè)的BRX結(jié)構(gòu)域是一個(gè)蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)構(gòu)域，同時(shí)它也能在PRAF（PH，RCC1 and FYVE）家族找到。該BRX結(jié)構(gòu)域行使著介導(dǎo)BRX和PRAF蛋白質(zhì)家族在酵母（釀酒酵母）中的同型和異型相互作用的生物學(xué)功能，但是只有當(dāng)兩個(gè)BRX結(jié)構(gòu)域同時(shí)存在時(shí)BRX功能才能正常運(yùn)作［4］。擬南芥BRX家族的5個(gè)基因的同源性雖然非常高，但是，他們并沒(méi)有冗余的生物學(xué)功能［4］。前人研究揭示，BRX基因的功能與細(xì)胞分裂素（Cytokinin，CTK）具有緊密的聯(lián)系，BRX基因突變會(huì)導(dǎo)致主根的縮短，降低CTK對(duì)側(cè)根抑制的敏感性［5］。BRX基因缺陷會(huì)導(dǎo)致油菜素內(nèi)酯水平的下降，對(duì)主根的生長(zhǎng)有很大影響，并且會(huì)間接影響到CTK條件下中柱鞘細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)素的積累和響應(yīng)，從而表現(xiàn)出側(cè)根受抑不敏感的現(xiàn)象［6］。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，中柱鞘細(xì)胞在側(cè)根起始的第一次不均等分裂前就具有了局部生長(zhǎng)素的積累和響應(yīng)［5］。

葡萄（Vitis vinifera L.）歸于葡萄科葡萄屬，是起源最古老且是世界性重要果樹(shù)之一，同時(shí)，也是繼擬南芥、水稻和楊樹(shù)后完成全基因測(cè)序的第4種開(kāi)花植物，其基因組大小約為擬南芥基因組的3到4倍（約為500Mbp）［7］，具有較高的營(yíng)養(yǎng)、食療和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，因此葡萄分子生物學(xué)的進(jìn)一步研究將逐漸成為學(xué)術(shù)界研究的重點(diǎn)代表對(duì)象之一［8］。本研究擬采用生物信息學(xué)工具與分析方法，對(duì)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中已注冊(cè)的，來(lái)自蓖麻、大豆、葡萄、高粱、黃瓜、擬南芥、楊樹(shù)的BRX家族中各基因編碼的氨基酸序列進(jìn)行基因組信息的挖掘與分析，進(jìn)一步推測(cè)該基因家族的分子生物學(xué)功能，對(duì)于植物的遺傳改良及非生物逆境脅迫方面具有深遠(yuǎn)的意義。

1 材料和方法

1.1 葡萄BRX基因家族成員的檢索

在NCBI（National center for biotechnology information）（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）中通過(guò)blastp在線檢索葡萄無(wú)冗余蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，再利用Translate tool（http://web.expasy.org/translate/）和ScanProsite tool（http://prosite.expasy.org/scanprosite/）進(jìn)行基因序列的翻譯和預(yù)測(cè)候選蛋白的BRX結(jié)構(gòu)域，若該蛋白上同時(shí)存在兩個(gè)BRX結(jié)構(gòu)域，則認(rèn)為該候選蛋白屬于BRX蛋白家族，若未能檢測(cè)出同時(shí)存在的兩個(gè)BRX結(jié)構(gòu)域或只有一個(gè)BRX結(jié)構(gòu)域，則認(rèn)為其不屬于該家族。在此基礎(chǔ)上通過(guò) BLAST Server（http://www.genoscope.cns.fr/cgi?bin/blast＿server/projet＿M(jìn)L/blast?result.pl？ref＝dc34a3dd6f19ccaa693ad3f1b935f228）尋找其對(duì)應(yīng)的cDNA登錄號(hào)和 DNA序列，并將其定位于染色體上［9］。

1.2 葡萄BRX基因家族結(jié)構(gòu)分析

根據(jù)檢索得到的cDNA和 DNA序列，利用GSDS 2.0（Gene Structure Display Server）（http://gsds.cbi.pku.edu.cn/）在線預(yù)測(cè)葡萄BRX蛋白的內(nèi)含子和外顯子的組成［10］。

1.3 葡萄BRX基因家族的理化性質(zhì)分析

使用 ProtParam［11］（http://expasy.org/tools/protparam.html）在線預(yù)測(cè)該蛋白家族的氨基酸理化性質(zhì)（包括氨基酸數(shù)目、分子量、理論等電點(diǎn)、脂溶指數(shù)和不穩(wěn)定指數(shù)）；蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)利用 HNN SECONDARY STRUCTURE PREDICTION METHOD［12］程 序 （http://npsa?pbil.ibcp.fr/cgi?bin/npsa＿automat.pl？page＝/NPSA/npsa＿h(yuǎn)nn.html）完成；TMHMM（http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM－2.0/）進(jìn)行蛋白質(zhì)跨膜域分析；SignalP 4.1 server （http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/）完成信號(hào)肽的分析［13］；WoLF PSORT（http://www.genscript. com/psort/wolf＿psort.html）進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析［14］。

1.4 葡萄BRX基因家族系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建

把VvBRX1、VvBRX2、VvBRX3、VvBRX4、VvBRX5、VvBRX6基因的 CDS區(qū)以 FASTA格式分別提交NCBI在線比對(duì)，選擇與其同源性較高的物種：川桑（Morus notabilis）：XM＿010112136.1、胡楊（Populus euphratica）：XM＿011029755.1、桃（Prunuspersica）：XM＿007210759.1、蓖麻（Ricinus communis）：XM＿002521302.1、柑橘（Citrus sinensis）：KK784904.1、可可（Theobroma cacao）：XM＿007024521.1、白梨（Bretschneideri）：XM＿009374097.1、蓮（Nelumbo nucifera）：XM＿010263665.1、麻瘋樹(shù) （Jatropha curcas）：XM＿012213513.1、大豆（Glycine max）：XM＿003528399.2，然后利用MEGA5.0和Clustalx軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)［15］。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄BRX挖掘和基因定位及蛋白理化性質(zhì)分析

經(jīng)葡萄基因 Blast?search（http://www. genoscope.cns.fr/cgi?bin/blast＿server/projetML/blast.pl）對(duì)比檢索，共得到6個(gè)候選的葡萄BRX氨基酸序列（見(jiàn)表1）。同時(shí)在 GenBank中搜索相應(yīng)的cDNA登錄號(hào)和DNA序列［16］，并進(jìn)行染色體定位，結(jié)果表明6個(gè)葡萄BRX基因分布在3條（第2、9、11條）染色體上，分布的數(shù)量都為2個(gè)（見(jiàn)表1）。

葡萄BRX蛋白家族的氨基酸數(shù)目分析結(jié)果顯示：它們的長(zhǎng)度在360～560個(gè)氨基酸之間，其中VvBRX5所含氨基酸數(shù)目最多（560個(gè)），而VvBRX1最少（360個(gè)）；蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)：VvBRX5的相對(duì)分子質(zhì)量最大（61 884.4），而VvBRX1最小（40 239.1）；等電點(diǎn)的分析顯示：VvBRX1預(yù)測(cè)的等電點(diǎn)最低（6.23），而VvBRX5最高（9.38）；脂溶指數(shù)（Aliphatic index）分析結(jié)果表明：6個(gè)葡萄BRX翻譯蛋白的脂溶指數(shù)均小于100，說(shuō)明它們都為疏水性蛋白，不穩(wěn)定指數(shù)（Instability index）分析表明：6個(gè)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定指數(shù)在45.52～57.66，歸為穩(wěn)定蛋白（見(jiàn)表1）。

表1 葡萄BRX挖掘和基因定位及蛋白理化性質(zhì)分析Table 1 Grape BRX m ining and genemapping and analysis of protein physicochem ical properties

2.2 BRX基因家族的基因結(jié)構(gòu)

葡萄BRX基因的結(jié)構(gòu)分析表明，6個(gè)BRX基因均有內(nèi)含子和外顯子，在第2條染色體上的VvBRX1 和VvBRX2基因均有6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子；同在葡萄第9條染色體上的 VvBRX3和VvBRX4中有5個(gè)外顯子，分別被4個(gè)內(nèi)含子分開(kāi)；同在第11條染色體上的VvBRX5和VvBRX6基因中均有4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子。且VvBRX1和VvBRX2、VvBRX3和VvBRX4、VvBRX5和VvBRX6基因有著非常一致的結(jié)構(gòu)，相同位置的外顯子和內(nèi)含子的大小都相差無(wú)幾，說(shuō)明這些基因具有高度保守的結(jié)構(gòu)域。（見(jiàn)圖1）。

圖1 BRX基因外顯子/內(nèi)含子組成分析Fig.1 Composition analysis of BRX gene exon/intron

2.3 葡萄BRX基因家族蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析及亞細(xì)胞定位

跨膜域的預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，葡萄6個(gè)BRX基因均不存在跨膜域，且無(wú)信號(hào)肽，因而可以推測(cè)為膜內(nèi)蛋白。亞細(xì)胞定位分析顯示：葡萄6個(gè)BRX基因均定位于細(xì)胞核（見(jiàn)表2）。

表2 葡萄BRX基因蛋白的亞細(xì)胞定位Table 2 Subcellular localization of grape BRX gene protein

2.4 BRX基因家族蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)比分析

葡萄6個(gè)BRX蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要由α－螺旋、無(wú)規(guī)則卷曲和擴(kuò)展鏈結(jié)構(gòu)3種形式構(gòu)成，其中，無(wú)規(guī)則卷曲＞α－螺旋＞擴(kuò)展鏈結(jié)構(gòu)（見(jiàn)表3）。

2.5 葡萄BRX基因家族氨基酸序列的同源性比較

葡萄BRX氨基酸序列的同源性比較結(jié)果發(fā)現(xiàn)（見(jiàn)圖 2），所有 BRX氨基酸序列的同源性是60.35％，說(shuō)明BRX基因家族的氨基酸序列同源性較高。所有BRX氨基酸序列兩兩比對(duì)發(fā)現(xiàn)，VvBRX3與VvBRX4的氨基酸序列同源性最高，高達(dá)97.84％。VvBRX1與VvBRX5的氨基酸序列同源性最低，低至49.91％。同在葡萄第2條染色體上的VvBRX1與VvBRX2的氨基酸序列同源性是81.22％，同在葡萄第9條染色體上的VvBRX3與VvBRX4的氨基酸序列同源性是 97.84％，同在葡萄第 11條染色體上的VvBRX5與VvBRX6的氨基酸序列同源性是64.64％。

表3 BRX基因蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)比分析Table 3 Com parative analysis of BRX gene protein secondary structure

2.6 BRX基因保守結(jié)構(gòu)域的對(duì)比分析

保守結(jié)構(gòu)域是蛋白質(zhì)中能夠折疊成特定三維結(jié)構(gòu)的、在生物進(jìn)化或者一個(gè)蛋白家族中具有不變或相同的一段局部保守區(qū)域，其結(jié)構(gòu)亞單位稱為模體（Motif），又稱基序，組成這些模體（或基序）的氨基酸區(qū)段行使著特異的生物學(xué)功能，且不能被改變，并蘊(yùn)含各自的遺傳進(jìn)化信息，通常決定一個(gè)基因家族［17］。葡萄6個(gè)BRX基因的中間段和末尾段都含有非常保守的兩個(gè)長(zhǎng)56 aa的 BRX結(jié)構(gòu)域（見(jiàn)圖3），從而構(gòu)成了一個(gè)植物特異性轉(zhuǎn)錄因子大家族。這兩個(gè)高度保守區(qū)應(yīng)該是BRX基因主要功能的信息區(qū)，也是不同物種以及同一物種基因家族的同源性所在。

2.7 葡萄BRX基因的系統(tǒng)發(fā)生分析

系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析表明，葡萄的6個(gè)BRX基因可以明顯分為兩組，第11條染色體上的VvBRX5明顯分開(kāi)，說(shuō)明其可能有其它功能；第9條染色體上的VvBRX3、VvBRX4與蓖麻、麻瘋樹(shù)、柑橘、可可、大豆聚為一類，說(shuō)明其進(jìn)化關(guān)系較近；第11條染色體上的VvBRX6基因與蓮聚為一類；第2條染色體上的VvBRX1、VvBRX2基因與胡楊、川桑、桃聚為一類，其中與胡楊的親緣關(guān)系最近，相似性達(dá)96％（見(jiàn)圖4）。

圖3 利用Scan Prosite對(duì)VvBRX進(jìn)行保守域搜索的結(jié)果Fig.3 Scan Prosite use for VvBRX conservative domain search results

圖4 植物來(lái)源的BRX基因序列系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)Fig.4 Phylogenetic tree based on the BRX gene sequence from plant

3 結(jié)論與討論

植物轉(zhuǎn)錄因子的研究是功能基因組學(xué)研究的熱點(diǎn)中的重點(diǎn)，也是生物科學(xué)的前沿領(lǐng)域之一。近年來(lái)，相繼從高等植物中分離出一系列調(diào)控非生物逆境脅迫（干旱、低溫及高鹽）、激素、病原等因子應(yīng)答反應(yīng)及與生長(zhǎng)發(fā)育、代謝相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子基因，這些轉(zhuǎn)錄因子可以減少這些非生物逆境對(duì)植物造成的傷害，提高植物對(duì)多種逆境的適應(yīng)和抗逆能力［18］。因此，對(duì)相關(guān)基因的研究不僅可以闡明植物對(duì)環(huán)境脅迫信號(hào)的應(yīng)答機(jī)制，還能為作物抗逆性分子育種提供基因資源和一定的理論基礎(chǔ)，并有望進(jìn)一步通過(guò)基因克隆技術(shù)來(lái)獲得抗逆性強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因材料［19］。

葡萄是世界四大水果之一，它的根系在抗非生物逆境脅迫和提高產(chǎn)量等方面起著非常重要的作用。對(duì)葡萄中BRX基因家族進(jìn)行多方面的分析鑒定，發(fā)現(xiàn)葡萄的BRX基因家族在根生長(zhǎng)發(fā)育中起著非常重要的作用［20］，可能在葡萄的生長(zhǎng)發(fā)育和抗逆中起著一定的調(diào)控作用?；蚴侨旧w上具有控制生物性狀的DNA片段［21］。6個(gè)蛋白都為疏水性蛋白，且6個(gè)基因之間有很高的相似性，都含有外顯子和內(nèi)含子，功能域分析發(fā)現(xiàn)每條基因所翻譯的蛋白結(jié)構(gòu)中都同時(shí)有兩個(gè)BRX結(jié)構(gòu)域，說(shuō)明它們都能夠表達(dá)，這與劉佳（2008）對(duì)水稻BRX基因家族的研究結(jié)果一致。

總的來(lái)說(shuō)，轉(zhuǎn)錄因子的數(shù)量龐大，種類繁多，一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子可參與調(diào)控多個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，而一個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)又可受多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的的組合調(diào)控，從而形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。對(duì)生根相關(guān)BRX基因家族的研究任重而道遠(yuǎn)，相信隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)和生物信息學(xué)的不斷發(fā)展，以及對(duì)植物生根轉(zhuǎn)錄表達(dá)譜及相關(guān)BRX候選基因的深入了解，葡萄BRX基因家族與根生長(zhǎng)的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)將會(huì)越來(lái)越清晰。此外，BRX基因家族除了與CTK作用于植物根系的生長(zhǎng)外，對(duì)這個(gè)基因家族在應(yīng)答非生物脅迫研究領(lǐng)域的生理與分子機(jī)制的進(jìn)一步研究有助于我們更好地全面認(rèn)識(shí)并完善植物逆境調(diào)控下的遺傳網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。

［1］ AALTO M K，HELENIUS E，KARIOLA T.，et al. ERD15?An attenuator of plant ABA responses and stoma?tal aperture［J］.Plant Science，2012，182：19－28.

［2］ 張艷馥，沙偉.轉(zhuǎn)錄因子概述［J］.生物學(xué)教學(xué)，2009，34（10）：7－8. ZHANG Yanfu，SHA Wei.Overview of transcription fac?tors［J］.Biology Teaching，2009，34（10）：7－8.

［3］ 劉佳.水稻BRX家族的鑒定及OsBRX4基因功能初探［D］.武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008. LIU Jia.Identification of Rice BRX Family and Prelimi?nary Function Analysis of Gene OsBRX4［D］.Wuhan：Huazhong Agricultural University，2008.

［4］ LIU J，LIANG D C，SONG Y L，etal.Systematic identi?fication and expression analysis of BREVIS RADIX?like homologous genes in rice［J］.Plant Science，2010，178 （2）：183－191.

［5］ 李靜.擬南芥BRX基因在細(xì)胞分裂素介導(dǎo)的側(cè)根發(fā)生抑制中作用的研究［D］.杭州：浙江大學(xué)，2008. LI Jing.Functional Analysis of AtBRX in Regulation of Cytokinin?mediated Inhibition of Lateral Root Initiation ［D］.Hangzhou：Zhejiang University，2008.

［6］ LIX，MO X，SHOU H，et al.Cytokinin?mediated cell cycling arrest of pericycle founder cells in lateral root ini?tiation of arabidopsis［J］.Plant＆Cell Physiology，2006，47：1112－1123.

［7］ JAILLON O，AURY JM，NOEL B，et al.The grapevine genome sequence suggests ancestral hexaploidization in major angiosperm phyla［J］.Nature，2007，449：463－467.

［8］ 叢郁，楊順瑛，宋志忠，等.葡萄AMT基因家族生物信息學(xué)分析［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27（25）：193－199. CONG Yu，YANG Shunying，SONG Zhizhong，et al. Bioinformatics analysis of AMT protein family in grape ［J］.Chinese Agricultural Science Bulletin，2011，27 （25）：193－199.

［9］ DENG W，NICKLE D C，LEARN G H，et al.Viro?BLAST：a stand?alone BLAST web server for flexible queries of multiple databases and user′s datasets［J］. Bioinformatics，2007，23（17）：2334－2336.

［10］HU B，JIN JP，GUO A Y，et al.GSDS 2.0：an upgra?ded gene feature visualization server［J］.Bioinformatics，2015，31（8）：1296－1297.

［11］BICKMORE W A，SUTHERLAND H G E.Addressing protein localization within the nucleus［J］.The EMBO Journal，2002，21（6）：1248－1254.

［12］MANN S，LIJ，CHEN Y PP.A pHMM?ANN based dis?criminative approach to promoter identification in pro?karyote genomic contexts［J］.Nucleic Acids Research，2007，35（2）：e12－e12.

［13］顏培玲，潘學(xué)軍，張文娥.野生毛葡萄水通道蛋白基因VhPIP1的克隆及其在干旱脅迫下的表達(dá)分析［J］.園藝學(xué)報(bào)，2015，42（2）：221－232. YAN Peiling，PAN Xuejun，ZHANGWen'e.Cloning of aquaporion gene VhPIP1 in vitis heyneana and its expres?sion under drought stress［J］.Acta Horticulturae Sinica，2015，42（2）：221－232.

［14］王明樂(lè)，王偉東，趙真，等.茶樹(shù)NADPH氧化酶基因的克隆、亞細(xì)胞定位與表達(dá)分析［J］.園藝學(xué)報(bào)，2015，42（1）：95－103. WANGMingle，WANGWeidong，ZHAO Zhen，et al.Mo?lecular cloning，subcellular localization and expression a?nalysis of NADPH oxidase gene from tea plant［J］.Acta Horticulturae Sinica，2015，42（1）：95－103.

［15］WANG M，VANNOZZIA，WANG G T，et al.Genome and transcriptome analysis of the grapevine（Vitis vinifera L.）WRKY gene family［J］.Citation：Horticulture Research，2014，1：1－16.

［16］AOKIY，TAKAHASHIS，TAKAYAMA D，etal.Identi?fication of laticifer?specific genes and their promoter regions from a natural rubber producing plant hevea bra?siliensis［J］.Plant Science，2014，225：1－8.

［17］CHEN JQ，YIN H，GU JP，et al.Genomic character?ization，phylogenetic comparison and differential expres?sion of the cyclic nucleotide?gated channels gene family in pear（Pyrus bretchneideri Rehd.）［J］.Genomics，2015，105（1）：39－52.

［18］LIU C F，ZOU J，CHEN X B.Advances in DREB tran?scription factors and plantabiotic stress tolerance［J］.Bi?otechnology Bulletin，2010，10：006.

［19］ZHAO Y X，LIU P，XU Z S，et al.Analysis of specific binding and subcellular localization of wheat ERF tran?scription factor W17［J］.Agricultural Sciences in China，2008，7（6）：647－655.

［20］SCACCHIE，SALINASP，GUJASB，et al.Spatio?tem?poral sequence of cross?regulatory events in rootmeristem growth［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences，2010，107（52）：22734－22739.

［21］LóPEZ?KLEINE L，PINZóN A，CHAVES D，et al. Chromosome 10 in the tomato plant carries clusters of genes responsible for field resistance/defence to phytoph?thora infestans［J］.Genomics，2013，101（4）：249－255.

Bioinformatics analysis of the BRX gene family in grape

LIWenfang，CHEN Baihong?，MAO Juan，MA Zonghuan，YANG Shimao
（College ofHorticulture，Gansu Agricultural University，Lanzhou 730070，China）

BRX gene family is a class of transcriptional factors that present only in plant，and it plays an important role in the regulation of cell proliferation and root elongation in Arabidopsis.With the approaches of bioinformatics，BRX gene family present in the grape genome was performed in silico cloning，genome localization，protein structure，physical and chemical characteristics，secondary structure as well as subcellular localization prediction and analysis.Moreover，the evolutionary relationships of BRX gene family derived from other plantswere predicted. Genomemapping results showed that：6 BRX genes in grape genome were located on 3 chromosomes，VvBRX1 and VvBRX2 in chromosome 2，VvBRX4 and VvBRX3 in chromosome 9，VvBRX6 and VvBRX5 in chromosome 11.The encoded proteins contain 360－560 amino acids，the relativemolecularweight（61 884.4）and the p Ivalue（9.38）of VvBRX5 were the maximum，while the relative molecular weight（40 239.1）and the pI value（6.23）of VvBRX1 were the minimum.The study suggested that there were some differences between the amino acid sequences of differentmembers，while they allwere hydrophobic proteins.The 6 BRX amino acid sequencesmainly contain alpha helix and random coil and did not have transmembrane domains and signal peptide.Gene structure analysis showed that the 6 BRX genes contained exons and introns structure.Subcellular localization analysis showed that six VvBRX genes are located in nucleus.Phylogenetic analysis showed that VvBRX1 and VvBRX2 had the closest relationship with populus euphratica，the homology was 96％.VvBRX3 and VvBRX4 were clustered a classwith Ricinus communis，Jatropha curcas，Citrus sinensis，Theobroma cacao and Glycine max，indicating that the evolutionary relationshipswere very closer.VvBRX5 was significantly separated from other VvBRX genes.VvBRX6 had the closest relationship with Nelumbo nucifera.These experimental results provide a significant foundation for further research on function analysis of the BRX gene family in grape genome.

Grapevine；BRX gene family；Bioinformatics analysis

S663.1；Q343.1

A

1672－5565（2015）03－158－07

2015－03－15；

2015－06－05.

甘肅省農(nóng)牧廳農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項(xiàng)目（GNCX－2013－38）；甘肅省自然基金（1308RJYA062）；國(guó)家自然科學(xué)基金（31460500）。

李文芳，女，本科生，研究方向：果樹(shù)生理與生物技術(shù)；E?mail：1304784689＠qq.com.

?

陳佰鴻，男，教授，研究方向：果樹(shù)生理與生物技術(shù)；E?mail：bhch＠gsau.edu.cn.