劉超 景贊

（樂山市食品藥品檢驗檢測中心，四川樂山614000）

HPLC檢測食品中偶氮玉紅

劉超 景贊

（樂山市食品藥品檢驗檢測中心，四川樂山614000）

采用高效液相色譜對食品中偶氮玉紅進(jìn)行檢測。建立了以Inertsil ODS-3為液相色譜柱，以甲醇、10mmol/L乙酸銨為流動相的檢測方法。結(jié)果表明：該方法所測得的偶氮玉紅在0～100.0μg/mL內(nèi)具有良好的線性，檢出限為0.15mg/kg，加標(biāo)回收率為89.2%～97.5%。該方法具有分析速度快、操作方便、重現(xiàn)性好、靈敏度高等特點。該方法適合食品中偶氮玉紅的分析檢測。

食品；偶氮玉紅；高效液相色譜

偶氮玉紅（Azorubine），又名酸性紅，為人工合成色素，通過重氮化4-氨基萘磺酸和4-羥基萘磺酸之間的偶合反應(yīng)合成，大量食用合成色素后，對人身體健康會造成潛在危害。食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)（《GB2760-2014》）[1]規(guī)定偶氮玉紅可用于冷凍飲品，如可可制品、巧克力和巧克力制品（包括代可可脂巧克力及制品）以及糖果，還有焙烤食品餡料及表面用掛漿（僅限餅干夾心），然而某些不法分子為增加產(chǎn)品色澤，在食品中超范圍或非法添加偶氮玉紅，對人們的健康造成危害。目前國家尚未發(fā)布食品中偶氮玉紅的檢測方法，國內(nèi)對食品中偶氮玉紅的檢測也是鮮有報道；喻凌寒等[2]使用高效液相色譜檢測食品中偶氮玉紅，但前處理較為繁瑣。因此研究能夠準(zhǔn)確、快速的檢測食品中偶氮玉紅的檢測方法是十分必要且具有現(xiàn)實意義的。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

辣椒粉，二荊條辣椒面，四川省青川縣川珍實業(yè)有限公司；

西瓜汁，樂山麥尚飲品店；

辣椒醬，香辣豆豉醬，李錦記集團(tuán)；

以上產(chǎn)品均購買于2015年7月14號。

偶氮玉紅標(biāo)準(zhǔn)品，Sigma-Aldrich；甲醇，色譜純；

乙醇、氨水、乙酸、乙酸鋅、亞鐵氰化鉀，均為分析純；水，GB/T6682規(guī)定的一級水。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀，島津DGU-20A；

分析天平（精確度0.01mg），德國賽多利斯集團(tuán)，CP225D；

水浴恒溫振蕩器，常州冠軍儀器制造有限公司，SHA-B；

自動旋渦混合器，天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠，ZH-2；低速離心機(jī)，四川蜀科儀器有限公司，TD420。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

1.3.1 偶氮玉紅標(biāo)準(zhǔn)儲備液

稱取0.01g偶氮玉紅標(biāo)準(zhǔn)品，加水溶解并定容至10mL，此溶液濃度為1mg/mL。

1.3.2 偶氮玉紅標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

根據(jù)試驗需要將偶氮玉紅儲備液，用水分別稀釋成濃度為0、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 試樣提取與凈化

1.4.1 辣椒粉

稱取粉碎樣品5.0g于50mL離心管中，用15mL乙醇：氨水（75∶25）振蕩提取兩次，合并提取液，提取液在氮吹儀上吹至5mL左右，用乙酸調(diào)至pH=5，待Oasis Wax前處理小柱（6cc/150mg）凈化。

1.4.2 西瓜汁

準(zhǔn)確量取5.0mL樣品于50mL離心管中，乙酸調(diào)至pH=5后，待OasisWax前處理小柱（6cc/150mg）凈化。

1.4.3 辣椒醬

準(zhǔn)確稱取試樣5.0g于50mL離心管中，加入5mL水溶解，搖勻，加入2mL 0.106g/mL亞鐵氰化鉀溶液，2mL 0.22g/mL乙酸鋅溶液，4000r/min離心10min，取上清液，再用15mL乙醇∶氨水（75∶25）振蕩提取1次，4000r/min離心10min，合并上清液。提取液在氮吹儀上吹至5mL左右，用乙酸調(diào)至 pH=5，待 Oasis Wax前處理小柱（6cc/150mg）凈化。

1.4.4 凈化

將Oasis Wax柱（6cc/150mg）依次用6mL甲醇、6mL水活化，將上述提取液移入已活化好的Oasis Wax柱（6cc/150mg）待樣液完全流出后，依次用6mL 0.5%甲酸甲醇溶液，6mL水淋洗，棄去全部淋洗液，最后用6mL 25%氨化甲醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液氮?dú)獯蹈桑?5℃），用水定容至10mL。

1.5 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3，4.6×150mm，5μm；

進(jìn)樣體積：10μL；

流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；

檢測波長：516nm[3]；

流動相：A-甲醇，B-10mmol/L乙酸銨，梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫條件Table 1 Mobile phase condition

2 結(jié)果討論

2.1 液相色譜柱的選擇

Inertsil ODS-3代表了當(dāng)今世界上新一代C18反相填料，它的基質(zhì)是一種新型的高純硅膠，這種硅膠不僅純度高達(dá)99.999%，而且顆粒球形對稱度好，表面均勻光滑，從而使硅膠的理化性質(zhì)更加均一，載體機(jī)械強(qiáng)度大，鍵合度及柱效更高，更由于GL Sciences公司高超的化學(xué)鍵和技術(shù)，使得Inertsil ODS-3成為世界上最好的C18反相填料之一。

鑒于此，在本試驗中使用Inertsil ODS-3（4.6×150mm，5μm）作為分析柱。

2.2 線性范圍

根據(jù)偶氮玉紅的靈敏度，用空白樣品提取液分別配成 濃 度 為 0μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，4℃保存，現(xiàn)用現(xiàn)配；以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程見圖1。

圖1 偶氮玉紅標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Fig.1 Standard curve regression equation of azorubine

圖1顯示，偶氮玉紅的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：

可見，偶氮玉紅在0～100.0μg/mL范圍內(nèi)，線性良好。

2.3 檢出限

由自動進(jìn)樣器吸取20μg/mL的偶氮玉紅標(biāo)準(zhǔn)工作溶液10μL，注入色譜儀中，平行進(jìn)樣3次，求出儀器檢出限的平均值，而后求出方法檢出限，結(jié)果見表2。

表2 偶氮玉紅檢出限Table 2 Detection limit of azorubine

由表2可知，儀器平均檢出限為0.763×10-2μg，方法檢出限為1.5mg/kg，可見，儀器和方法靈敏度很高。

2.4 回收率

準(zhǔn)確稱取9份混勻的試樣各5g或5mL（精確至0.01g）置于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入偶氮玉紅儲備液，使偶氮玉紅含量分別為0.05μg/mL、0.2μg/mL、0.8μg/mL，其他步驟同1.3、1.4。

由表3可知，偶氮玉紅方法回收率為89.2%～97.5%。符合GB/T27404-2008實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測中的規(guī)定（80%～110%）。

表3 偶氮玉紅加標(biāo)回收率Table 3 Adding standard recovery of azorubine

2.5 重復(fù)性

偶氮玉紅中間液稀釋成3μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，由自動進(jìn)樣器吸取凈化后的樣品溶液10μL，注入色譜儀中，記錄色譜圖，測定峰面積。計算出RSD值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，RSD 為1.20%，說明該方法重復(fù)性良好。

3 實際樣品分析

用上述方法對市場上的辣椒醬、辣椒粉進(jìn)行測定，結(jié)果表明：偶氮玉紅在所測樣品中未檢出?？赡苁撬鶛z測的辣椒醬或者辣椒粉廠家在產(chǎn)品中并沒有使用偶氮玉紅。

4 結(jié)論

建立了高效液相色譜儀檢測食品中的偶氮玉紅的方法，此方法檢出限為1.5mg/kg，在0～100.0μg/mL取得良好線性范圍，方法回收率為89.2%～97.5%，方法重復(fù)性為1.20%。所建方法能夠滿足實際檢測的需要。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB2760-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)·食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中華人民共和國衛(wèi)生部,2014.

[2]喻凌寒,牟德海,蘇流坤,等.高效液相色譜-二極管陣列檢測器聯(lián)用檢測食品中的偶氮玉紅 [J].分析實驗室,2006,23(2)∶216-219.

[3]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T28309-2012食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)·食品添加劑酸性紅（偶氮玉紅）[S].北京∶中華人民共和國衛(wèi)生部,2012.

Detection of Azorubine in Food Using HPLC

LIU Chao JING Zan
(Leshan Food and Drug Inspection and Testing Center，Leshan 614000，China)

In the paper,the author tested azorubine in food with HPLC method.The method was developed with novel HPLC column Inertsil ODS-3.Mobile phase was methyl alcohol,10mmol/L ammonium acetate.There was a good linear in 0～100.0μg/mL,its detection limit was 0.15mg/kg.And adding standard recovery was 89.2%～97.5%in azorubine using method.There were advantages in the method,such as fast,easy,reproducible and relatively sensitive.Therefore,the method was suitable for the detection of azorubine in food.

Food;azorubine;HPLC

TS2073

A

1008-1038(2015)10-0041-03

2015-07-13

劉超（1984—），男，助理工程師，研究方向為食品安全