嚴(yán)赟+羅佚

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜法測(cè)定血栓通注射液中5-羥甲基糠醛的含量。方法：色譜柱為CAPCELLPAK C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液（10∶90）；流速為0.8ml/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)284nm。結(jié)果：5-羥甲基糠醛進(jìn)樣量在0.0677～270.8ng內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=1.0000），平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)。

【關(guān)鍵詞】 血栓通注射液；5-羥甲基糠醛；高效液相色譜法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2014）06-0031-02

血栓通注射液中主要成分為三七的塊根提取物，三七藥材中含有的部分皂苷類(lèi)成分都是苷元與葡萄糖結(jié)合，在提取、純化過(guò)程中有可能發(fā)生水解，產(chǎn)生部分葡萄糖。5-羥甲基糠醛（5-HMF）是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個(gè)醛類(lèi)化合物，有報(bào)道稱(chēng)該化合物有可能引發(fā)并促進(jìn)結(jié)腸小囊異常生長(zhǎng)[1]及具有一定程度的基因毒性[2]。因此，醫(yī)藥、食品等工業(yè)中往往對(duì)其產(chǎn)品進(jìn)行5-HMF含量的控制。本文采用高效液相色譜法對(duì)血栓通注射液中的5-HMF進(jìn)行測(cè)定，為該制劑的安全性評(píng)價(jià)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agjlent 1100高效液相色譜儀；色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）。

1.2 藥品與試劑 5-羥甲基糠醛（5-HMF）對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)：111626-200301）；血栓通注射液為隨機(jī)抽取國(guó)內(nèi)各生產(chǎn)企業(yè)的樣品。甲醇為色譜純，水為二次重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）；以甲醇-0.1%磷酸溶液（10：90）為流動(dòng)相；流速：0.8ml/min，柱溫：25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm。

2.2 溶液的配制 對(duì)照品溶液的配制：取5-HMF對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加水制成每1ml含1μg的溶液，即得。供試品溶液直接取樣品進(jìn)樣。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取5-HMF對(duì)照品7 mg，精密稱(chēng)定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取上述貯備液0.5、1.0、1.0、10ml分別置50、20、5、10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線2、3、4、5，再精密量取曲線2溶液0.5ml置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線1。將上述對(duì)照品溶液按上述色譜條件分別進(jìn)樣10μl，以進(jìn)樣量（ng）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出線性方程Y=1.1804×10X+1.2421，r=1.0000。結(jié)果表明5-HMF對(duì)照品進(jìn)樣量在0.0677～270.8ng范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 取同一份血栓通注射液供試品按上述色譜條件，連續(xù)測(cè)定5次。記錄5-HMF峰面積，RSD為1.7%，表明本法的精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批血栓通注射液供試品溶液按上述方法平行測(cè)定6份，計(jì)算5-HMF含量， RSD為2.9%，結(jié)果表明，本法的重現(xiàn)性較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份血栓通注射液供試品溶液按上述色譜條件，每隔一定時(shí)間測(cè)定一次，共考察13小時(shí)，計(jì)算5-HMF峰面積，RSD為1.4%。結(jié)果表明，供試品溶液至少在13小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的血栓通注射液1ml共6份，置2ml量瓶中，分別精密加入2.3項(xiàng)下2號(hào)曲線對(duì)照品溶液0.1ml，加水至刻度，測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果5-HMF平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。

2.8 樣品含量測(cè)定 按擬訂的含量測(cè)定方法，測(cè)定了34批市售血栓通注射液樣品，5-HMF的含量在0.009μg/ml～1.375μg/ml之間。

3 討論

根據(jù)藥典會(huì)公示品種冠心寧注射液每日允許5-HMF的注射量為4～8mg及本品靜脈滴注1次用量2～5ml、一日1～2次進(jìn)行折算，擬定血栓通注射液中5-HMF的含量限度為：每1ml所含5-HMF不得大于0.80mg。因此，按以上限度進(jìn)行判斷，所測(cè)定的34批樣品中5-HMF的含量均遠(yuǎn)低于此限度，說(shuō)明血栓通注射液樣品的安全性有保障。

參考文獻(xiàn)

[1] Zhang XM，Chan CC，Stamp D，et a1.Initiation and promotion of colonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose[J].Carcinogenesis，1993，14（4）：773-775.

[2]Surh YJ，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-（hydroxymethyl）furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination[J].Chem Res Toxicol，1994，7（3）：313-318.

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜法測(cè)定血栓通注射液中5-羥甲基糠醛的含量。方法：色譜柱為CAPCELLPAK C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液（10∶90）；流速為0.8ml/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)284nm。結(jié)果：5-羥甲基糠醛進(jìn)樣量在0.0677～270.8ng內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=1.0000），平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)。

【關(guān)鍵詞】 血栓通注射液；5-羥甲基糠醛；高效液相色譜法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2014）06-0031-02

血栓通注射液中主要成分為三七的塊根提取物，三七藥材中含有的部分皂苷類(lèi)成分都是苷元與葡萄糖結(jié)合，在提取、純化過(guò)程中有可能發(fā)生水解，產(chǎn)生部分葡萄糖。5-羥甲基糠醛（5-HMF）是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個(gè)醛類(lèi)化合物，有報(bào)道稱(chēng)該化合物有可能引發(fā)并促進(jìn)結(jié)腸小囊異常生長(zhǎng)[1]及具有一定程度的基因毒性[2]。因此，醫(yī)藥、食品等工業(yè)中往往對(duì)其產(chǎn)品進(jìn)行5-HMF含量的控制。本文采用高效液相色譜法對(duì)血栓通注射液中的5-HMF進(jìn)行測(cè)定，為該制劑的安全性評(píng)價(jià)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agjlent 1100高效液相色譜儀；色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）。

1.2 藥品與試劑 5-羥甲基糠醛（5-HMF）對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)：111626-200301）；血栓通注射液為隨機(jī)抽取國(guó)內(nèi)各生產(chǎn)企業(yè)的樣品。甲醇為色譜純，水為二次重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）；以甲醇-0.1%磷酸溶液（10：90）為流動(dòng)相；流速：0.8ml/min，柱溫：25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm。

2.2 溶液的配制 對(duì)照品溶液的配制：取5-HMF對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加水制成每1ml含1μg的溶液，即得。供試品溶液直接取樣品進(jìn)樣。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取5-HMF對(duì)照品7 mg，精密稱(chēng)定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取上述貯備液0.5、1.0、1.0、10ml分別置50、20、5、10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線2、3、4、5，再精密量取曲線2溶液0.5ml置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線1。將上述對(duì)照品溶液按上述色譜條件分別進(jìn)樣10μl，以進(jìn)樣量（ng）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出線性方程Y=1.1804×10X+1.2421，r=1.0000。結(jié)果表明5-HMF對(duì)照品進(jìn)樣量在0.0677～270.8ng范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 取同一份血栓通注射液供試品按上述色譜條件，連續(xù)測(cè)定5次。記錄5-HMF峰面積，RSD為1.7%，表明本法的精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批血栓通注射液供試品溶液按上述方法平行測(cè)定6份，計(jì)算5-HMF含量， RSD為2.9%，結(jié)果表明，本法的重現(xiàn)性較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份血栓通注射液供試品溶液按上述色譜條件，每隔一定時(shí)間測(cè)定一次，共考察13小時(shí)，計(jì)算5-HMF峰面積，RSD為1.4%。結(jié)果表明，供試品溶液至少在13小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的血栓通注射液1ml共6份，置2ml量瓶中，分別精密加入2.3項(xiàng)下2號(hào)曲線對(duì)照品溶液0.1ml，加水至刻度，測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果5-HMF平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。

2.8 樣品含量測(cè)定 按擬訂的含量測(cè)定方法，測(cè)定了34批市售血栓通注射液樣品，5-HMF的含量在0.009μg/ml～1.375μg/ml之間。

3 討論

根據(jù)藥典會(huì)公示品種冠心寧注射液每日允許5-HMF的注射量為4～8mg及本品靜脈滴注1次用量2～5ml、一日1～2次進(jìn)行折算，擬定血栓通注射液中5-HMF的含量限度為：每1ml所含5-HMF不得大于0.80mg。因此，按以上限度進(jìn)行判斷，所測(cè)定的34批樣品中5-HMF的含量均遠(yuǎn)低于此限度，說(shuō)明血栓通注射液樣品的安全性有保障。

參考文獻(xiàn)

[1] Zhang XM，Chan CC，Stamp D，et a1.Initiation and promotion of colonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose[J].Carcinogenesis，1993，14（4）：773-775.

[2]Surh YJ，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-（hydroxymethyl）furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination[J].Chem Res Toxicol，1994，7（3）：313-318.

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜法測(cè)定血栓通注射液中5-羥甲基糠醛的含量。方法：色譜柱為CAPCELLPAK C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液（10∶90）；流速為0.8ml/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)284nm。結(jié)果：5-羥甲基糠醛進(jìn)樣量在0.0677～270.8ng內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=1.0000），平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)。

【關(guān)鍵詞】 血栓通注射液；5-羥甲基糠醛；高效液相色譜法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2014）06-0031-02

血栓通注射液中主要成分為三七的塊根提取物，三七藥材中含有的部分皂苷類(lèi)成分都是苷元與葡萄糖結(jié)合，在提取、純化過(guò)程中有可能發(fā)生水解，產(chǎn)生部分葡萄糖。5-羥甲基糠醛（5-HMF）是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個(gè)醛類(lèi)化合物，有報(bào)道稱(chēng)該化合物有可能引發(fā)并促進(jìn)結(jié)腸小囊異常生長(zhǎng)[1]及具有一定程度的基因毒性[2]。因此，醫(yī)藥、食品等工業(yè)中往往對(duì)其產(chǎn)品進(jìn)行5-HMF含量的控制。本文采用高效液相色譜法對(duì)血栓通注射液中的5-HMF進(jìn)行測(cè)定，為該制劑的安全性評(píng)價(jià)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agjlent 1100高效液相色譜儀；色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）。

1.2 藥品與試劑 5-羥甲基糠醛（5-HMF）對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)：111626-200301）；血栓通注射液為隨機(jī)抽取國(guó)內(nèi)各生產(chǎn)企業(yè)的樣品。甲醇為色譜純，水為二次重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為CAPCELLPAK C18（4.6×250mm 5μm）；以甲醇-0.1%磷酸溶液（10：90）為流動(dòng)相；流速：0.8ml/min，柱溫：25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm。

2.2 溶液的配制 對(duì)照品溶液的配制：取5-HMF對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加水制成每1ml含1μg的溶液，即得。供試品溶液直接取樣品進(jìn)樣。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取5-HMF對(duì)照品7 mg，精密稱(chēng)定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取上述貯備液0.5、1.0、1.0、10ml分別置50、20、5、10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線2、3、4、5，再精密量取曲線2溶液0.5ml置20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得曲線1。將上述對(duì)照品溶液按上述色譜條件分別進(jìn)樣10μl，以進(jìn)樣量（ng）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出線性方程Y=1.1804×10X+1.2421，r=1.0000。結(jié)果表明5-HMF對(duì)照品進(jìn)樣量在0.0677～270.8ng范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 取同一份血栓通注射液供試品按上述色譜條件，連續(xù)測(cè)定5次。記錄5-HMF峰面積，RSD為1.7%，表明本法的精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批血栓通注射液供試品溶液按上述方法平行測(cè)定6份，計(jì)算5-HMF含量， RSD為2.9%，結(jié)果表明，本法的重現(xiàn)性較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份血栓通注射液供試品溶液按上述色譜條件，每隔一定時(shí)間測(cè)定一次，共考察13小時(shí)，計(jì)算5-HMF峰面積，RSD為1.4%。結(jié)果表明，供試品溶液至少在13小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的血栓通注射液1ml共6份，置2ml量瓶中，分別精密加入2.3項(xiàng)下2號(hào)曲線對(duì)照品溶液0.1ml，加水至刻度，測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果5-HMF平均回收率為103.07%，RSD為2.8%。

2.8 樣品含量測(cè)定 按擬訂的含量測(cè)定方法，測(cè)定了34批市售血栓通注射液樣品，5-HMF的含量在0.009μg/ml～1.375μg/ml之間。

3 討論

根據(jù)藥典會(huì)公示品種冠心寧注射液每日允許5-HMF的注射量為4～8mg及本品靜脈滴注1次用量2～5ml、一日1～2次進(jìn)行折算，擬定血栓通注射液中5-HMF的含量限度為：每1ml所含5-HMF不得大于0.80mg。因此，按以上限度進(jìn)行判斷，所測(cè)定的34批樣品中5-HMF的含量均遠(yuǎn)低于此限度，說(shuō)明血栓通注射液樣品的安全性有保障。

參考文獻(xiàn)

[1] Zhang XM，Chan CC，Stamp D，et a1.Initiation and promotion of colonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose[J].Carcinogenesis，1993，14（4）：773-775.

[2]Surh YJ，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-（hydroxymethyl）furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination[J].Chem Res Toxicol，1994，7（3）：313-318.