夏婷 朱筧青 鄭智國 楊悅

上皮性卵巢癌患者 ERCC1 N118N基因型與鉑類藥物化療敏感性關(guān)系的研究

夏婷 朱筧青 鄭智國 楊悅

目的 探討不同核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因組1（ERCC1）N118N基因型與接受鉑類藥物化療的上皮性卵巢癌患者化療敏感性的關(guān)系。方法 采用Taqman探針基因分型技術(shù)檢測92例上皮性卵巢癌患者外周血ERCC1 N118N單核苷酸多態(tài)性。所有患者均接受以鉑類藥物為主的方案化療（紫杉醇+順鉑或環(huán)磷酰胺+順鉑），比較不同基因型與患者化療敏感性的關(guān)系。結(jié)果 92例患者中第118位密碼子基因型的分布是CT+TT型為42.4%，CC型57.6%；CT+TT型者對鉑類化療藥物的敏感性顯著高于CC型者（P=0.029）。結(jié)論 ERCC1第118位密碼子的基因多態(tài)性與卵巢癌患者鉑類藥物化療敏感性有關(guān)。

卵巢癌 核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1 基因多態(tài)性 藥物敏感性

【 Abstract】 Objective To investigate the association of ERCC1 N118 N gene polymorphism with chemotherapy sensitivity in epithelial ovarian cancer patients treated with platinum-based chemotherapy(taxol+cisplatin,cyclophosphamide+ cisplatin). Methods Ninety two patients with epithelial ovarian cancer treated with platinum-based chemotherapy were included in the study.Pre-treatment anticoagulated blood samples were collected for extraction of genomic DNA.The TaqMan method was used to genotype single nucleotide polymorphisms(SNPs)in ERCC1 N118N gene. Results The genotype distribution at codon 118 was 57.6%with C/C and 42.4%with C/T+TT.Platinum-resistance was less frequently in patients with the C/T+T/T genotype(P=0.029).Conclusion ERCC1 N118 N gene polymorphism may be associated with chemotherapy sensitivity in epithelial ovarian cancer patients treated with platinum-based chemotherapy.

【 Key words】 Ovarian cancer Excision repair cross-complementation gene 1 Polymorphism drug sensitivity Chemotherapy sensitivity

上皮性卵巢癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，由于早期癥狀不明顯，往往確診時(shí)已屬晚期，其5年生存率僅10%～30%[1]。以鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療是其重要治療手段，但耐藥的產(chǎn)生嚴(yán)重影響了化療療效和患者預(yù)后。因此如何克服耐藥，提高患者生存率一直是卵巢癌研究的熱點(diǎn)。眾所周知，鉑類藥物主要作用靶點(diǎn)是DNA，藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)形成鏈內(nèi)加合物（Pt-DNA）及鏈間交聯(lián)而損傷DNA，阻止DNA復(fù)制。因此，DNA修復(fù)能力增強(qiáng)是耐藥產(chǎn)生的重要機(jī)制之一，其中核苷酸切除修復(fù)（nucleotide excision repair，NER）是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中一種主要的DNA修復(fù)系統(tǒng)，而核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因組1（excision repair cross-complementation gene group 1，ERCC1）是NER途徑的關(guān)鍵酶。近年來，ERCC1與腫瘤化療耐藥的相關(guān)性研究成為熱點(diǎn)。據(jù)報(bào)道，在卵巢癌患者中，化療耐藥組的ERCC1表達(dá)率明顯高于化療敏感組[2]。在晚期頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的患者中，ERCC1低表達(dá)組3年生存率明顯高于高表達(dá)組，ERCC1低表達(dá)是預(yù)測預(yù)后的獨(dú)立因素[3]。筆者通過Taqman探針基因分型技術(shù)檢測上皮性卵巢癌患者的ERCC1 N118N單核苷酸多態(tài)性（第118位密碼子上堿基C被T替代，導(dǎo)致精氨酸被色氨酸替代），旨在了解ERCC1多態(tài)性與上皮性卵巢癌患者鉑類化療敏感性的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。后-80℃保存待用。WizardR基因組DNA純化試劑盒（美國Promega公司）用于分離DNA，提取過程按試劑盒說明操作。ERCC1 N118N單核苷酸多態(tài)性檢測采用Taqman探針基因分型技術(shù)，在ABI 7500熒光定量PCR擴(kuò)增儀上完成（美國Applied Biosystems公司）。探針、引物和Taqman通用PCR混合液均購自美國ABI公司。PCR總反應(yīng)體系為5μl，混合有0.25μl的引物和探針，2.5μl PCR反應(yīng)液和5ng DNA。PCR反應(yīng)條件如下：95℃預(yù)變性10min；92℃變性15s，60℃延伸1min，40個(gè)循環(huán)。每塊板上加有2個(gè)無DNA空白標(biāo)本，6個(gè)已知基因組DNA標(biāo)本，2個(gè)隨機(jī)重復(fù)的標(biāo)本分別作為陰性對照，陽性對照和質(zhì)量控制。7500擴(kuò)增儀附帶的隨機(jī)軟件SDS等位基因分型軟件分析結(jié)果。

1 資料和方法

1.1 一般資料 2001年6月至2007年5月在本院治療的上皮性卵巢癌患者92例，年齡22～67歲，中位年齡51歲。按FIGO分期法：Ⅰ期7例，Ⅱ期13例，Ⅲ期62例，Ⅳ期10例。按WHO組織學(xué)分類法：漿液性囊腺癌65例，黏液性囊腺癌5例，子宮內(nèi)膜樣腺癌10例，其他類型上皮性癌12例。

1.2 治療方法 所有患者均接受首次卵巢腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，并術(shù)后予6～8個(gè)療程的含鉑類藥物的聯(lián)合化療，具體方案為紫杉醇+順鉑（TP）或環(huán)磷酰胺+順鉑（CP）。TP：紫杉醇每次175mg/m2，順鉑每次60mg/m2；CP：環(huán)磷酰胺（CTX）每次1 000mg/m2，順鉑每次60mg/m2，3～4周后重復(fù)，至少化療6個(gè)療程。疾病進(jìn)展或復(fù)發(fā)后退出試驗(yàn)組，進(jìn)入生存隨訪。

1.3 檢測方法 每例患者首次治療前清晨空腹抽取外周血1ml，采用含有EDTA抗凝劑的真空管收集的比較采用χ2檢驗(yàn)。

1.4 療效觀察 92例上皮性卵巢癌患者均隨訪，直至疾病復(fù)發(fā)退出試驗(yàn)組，進(jìn)入生存隨訪。第3次化療結(jié)束開始進(jìn)行療效評(píng)價(jià)，每個(gè)療程化療后行婦科檢查以及影像學(xué)檢查，測定CA125，評(píng)價(jià)化療療效。化療反應(yīng)的評(píng)定方法按1978年抗腫瘤療效通用標(biāo)準(zhǔn)：（1）完全緩解（CR）：可見腫瘤完全消失超過1個(gè)月；（2）部分緩解（PR）：病灶最大直徑及其最大直徑乘積縮小達(dá)50%，其它病灶無增大，超過1個(gè)月；（3）穩(wěn)定（SD）：病灶縮小不足50%，增大不超過25%，持續(xù)1個(gè)月；（4）進(jìn)展（PD）：病灶乘積增加25%或出現(xiàn)新病灶?；熀筮_(dá)到CR、PR的患者6個(gè)月內(nèi)疾病進(jìn)展或復(fù)發(fā)定義為耐藥，即無進(jìn)展生存期（PFS）≤6個(gè)月，PFS＞6個(gè)月的定義為化療敏感[4]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料

2 結(jié)果

2.1 92例卵巢癌患者ERCC1 N118N基因型檢測結(jié)果 ERCC1 N118N基因型檢測結(jié)果，CT+TT型39例（42.4%），CC型53例（57.6%）。38例患者對鉑類為主的化療方案不敏感（41.3%），54例患者敏感（58.7%）。

2.2 ERCC1 N118N基因多態(tài)性對化療療效的影響 39例CT+TT型攜帶者中對化療敏感28例（占71.8%），53例CC型攜帶者中對化療敏感26例（占49.1%），兩者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.029），說明CC型攜帶者容易對鉑類藥物耐藥。

3 討論

首次化療的成敗對卵巢癌患者的預(yù)后至關(guān)重要，但不同個(gè)體的卵巢癌患者即使接受相同化療方案、相同藥物劑量治療，治療療效和耐受性方面仍存在較大的個(gè)體差異。這種個(gè)體差異主要取決于DNA損傷修復(fù)、藥物代謝和解毒等基因多態(tài)性影響?；蚨鄳B(tài)性主要是指在基因組水平上由單個(gè)堿基的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種，占所有已知多態(tài)性的90%以上，基因多態(tài)性在人類基因組中廣泛存在。

ERCC1是NER修復(fù)途徑中的關(guān)鍵酶之一，其編碼基因位于染色體19q13.2－19q13.3，基因全長15kb，含10個(gè)外顯子,它編碼含297個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，分子量為32.5KDa[5]。目前，研究已發(fā)現(xiàn)ERCC1基因的3個(gè)外顯子多態(tài)性，其中最常見的是C8092A和T19007位點(diǎn)的多態(tài)性。T19007多態(tài)性是第118位密碼子上堿基的變異，即密碼子AAC和AAT均編碼天冬酰胺，這種突變可能影響了ERCC1 mRNA表達(dá)水平。在Sokbom等[4]研究中，對60例應(yīng)用鉑類+紫杉醇聯(lián)合化療的卵巢癌患者進(jìn)行了ERCC1第118位密碼子的多態(tài)性分析，發(fā)現(xiàn)CC基因型患者對化療敏感性差于變異型CT和TT；多因素分析表明CT和TT基因表型是減少鉑類耐藥風(fēng)險(xiǎn)的獨(dú)立預(yù)測因素。該結(jié)論與本研究發(fā)現(xiàn)CT+TT型攜帶者對鉑類化療藥物的敏感性顯著高于CC型攜帶者的結(jié)果相一致。

相反，Kim等[6]對118例卵巢癌患者的NER途徑多個(gè)基因多態(tài)性進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)患者對鉑類藥物的敏感性與ERCC1 N118N的基因多態(tài)性無關(guān)，而與ERCC1 8092C＞A有關(guān)；甚至還有些實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出相反結(jié)論，認(rèn)為CC型攜帶者對化療反應(yīng)更敏感[7]。這些研究結(jié)果與本研究結(jié)論相矛盾，可能與本研究對象使用的聯(lián)合化療方案相關(guān)，另外筆者認(rèn)為本研究只考慮了ERCC1基因多態(tài)性單一一種因素，也影響了研究結(jié)果。因?yàn)樵赟mith等[8]研究中，對178例單一應(yīng)用鉑類化療及75例應(yīng)用鉑類+紫杉醇聯(lián)合化療的患者進(jìn)行了ERCC1第118位密碼子的多態(tài)性分析，發(fā)現(xiàn)單一化療方案組具有CC基因型患者腫瘤復(fù)發(fā)及死亡的風(fēng)險(xiǎn)明顯高于變異型CC和TT；而在聯(lián)合化療組，CC基因并沒有增加復(fù)發(fā)及死亡的風(fēng)險(xiǎn)。而本研究中所有患者術(shù)后均為聯(lián)合化療，且化療方案不盡相同，是否是鉑類以外的化療藥物改變了ERCC1引起的耐藥，有待更進(jìn)一步研究。

總之，ERCC1與卵巢癌療效及預(yù)后方面相關(guān)研究結(jié)論，可能為攻克卵巢癌鉑類耐藥這一臨床難題提供重要的理論基礎(chǔ)。如何為臨床治療帶來新的方法和途徑還有待大樣本及多因素的研究分析。

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Association of ERCC1 N118 N gene polymorphism with chemotherapy sensitivity in ovarian cancer patients with platinum-based chemotherapy

XIA Ting,ZHU Jianqing,ZHENG Zhiguo,et al.
Department of Gynecologic Oncology,Zhejiang Cancer Hospital, Hangzhou 310022,China

2014-11-26）

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（Y2100593）

310022 杭州，浙江省腫瘤醫(yī)院婦科（夏婷、朱筧青、楊悅），腫瘤研究所（鄭智國）

楊悅，E-mail：yangyue85170208@163.com