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循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)及臨床應(yīng)用

曹雅楠，莊文芳，盛慧明*

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院 檢驗(yàn)科，上海200336)

循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulatin tumorcells,CTC)計(jì)數(shù)有助于早期診斷腫瘤轉(zhuǎn)移，反映患者的治療效果及腫瘤預(yù)后。近年來循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的廣泛應(yīng)用大力推進(jìn)了相關(guān)技術(shù)的發(fā)展。本文對(duì)近年來外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，臨床及研究領(lǐng)域的應(yīng)用情況及未來展望做一簡(jiǎn)要綜述。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，就得到了廣泛重視，CTC被認(rèn)為是腫瘤播散轉(zhuǎn)移的標(biāo)志。研究表明，腫瘤組織每天會(huì)釋放大量腫瘤細(xì)胞入血，但在循環(huán)中的存活率極低，大多會(huì)發(fā)生凋亡，只有少量具有強(qiáng)侵襲力的腫瘤細(xì)胞可表達(dá)凋亡抑制因子得以存活[1]，這些存活下來的腫瘤細(xì)胞即CTC。CTC在外周血中含量極少，一般每106-107個(gè)白細(xì)胞中僅含有1個(gè)。所以，CTC檢測(cè)首先要進(jìn)行細(xì)胞富集，以提高檢測(cè)靈敏度，再對(duì)富集的細(xì)胞進(jìn)行CTC檢測(cè)。

1CTC富集技術(shù)

1.1　以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)的富集

CTC細(xì)胞體積大，直徑超過25 μm,胞核形狀不規(guī)則，核漿比異常。腫瘤細(xì)胞體積分離法和核孔分析技術(shù)通過濾網(wǎng)可將直徑大于8 μm的腫瘤細(xì)胞分離，但此類方法敏感性較低[2]?；诿芏忍荻确蛛x原則的Oncoquick，利用單個(gè)核細(xì)胞較其它血液成分相比密度低，采用1.077 g/ml的密度梯度將單個(gè)核細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞與血液其它成分分離，同時(shí)增加設(shè)置多孔屏障，進(jìn)而分離得到更加純化的目的細(xì)胞[3]。

1.2　以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的富集

免疫磁珠法將磁性微珠包被單抗形成免疫磁珠，再結(jié)合靶細(xì)胞上的對(duì)應(yīng)抗原形成抗原-抗體-磁珠復(fù)合物，在外加磁場(chǎng)作用下定向移動(dòng)、吸附，進(jìn)而與其它細(xì)胞分離。該分離技術(shù)的方法有兩種：(1)陽性分離法是直接從細(xì)胞混合液中分離出靶細(xì)胞；(2)陰性分離法則是利用免疫磁珠去除無關(guān)細(xì)胞，利用抗CD45抗體或抗CD61抗體去除血液中的巨核細(xì)胞和血小板，使靶細(xì)胞得以純化[4]。廣泛的陰性分選可選用抗CD2、CD16、CD19、CD36、CD38及血型糖蛋白A抗體等。兩種方法相比較，陽性分離法對(duì)腫瘤細(xì)胞的富集率較高。免疫學(xué)方法與形態(tài)學(xué)方法相比，具有操作簡(jiǎn)便快速，保持細(xì)胞活性，高選擇性等優(yōu)點(diǎn)，而且外加磁場(chǎng)也不會(huì)影響分離液中的帶電溶質(zhì)的運(yùn)動(dòng)。

如磁性活化細(xì)胞分選系統(tǒng)(magnetic activated cell sorting system,MACS)，細(xì)胞首先采用胞膜或胞內(nèi)染色，然后通

過免疫磁性標(biāo)記的微球來捕獲靶細(xì)胞。EpCAM是腫瘤相關(guān)鈣傳導(dǎo)信號(hào)1(CD326)，屬于參與細(xì)胞間粘附的細(xì)胞表面分子，在多數(shù)上皮腫瘤細(xì)胞高表達(dá)。磁性微球連接EpCAM可富集上皮來源的CTC，此方法在進(jìn)行高劑量化療的乳腺癌患者中陽性選擇率較高[5]。

1.3　形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)和免疫學(xué)基礎(chǔ)相結(jié)合的富集

還有兼顧上述兩種原理的結(jié)合性富集方法，如Rosettesep-applied imaging rare event(RARE)，該方法結(jié)合了密度梯度分離和抗體介導(dǎo)分離兩個(gè)步驟。首先在陰性分選過程中，CD45陽性細(xì)胞與多種紅細(xì)胞交聯(lián)結(jié)合形成雙特異性四聚抗體復(fù)合物，再利用密度梯度離心法將這些復(fù)合物去除，CD45陰性的單核細(xì)胞即可得以分離[6]。

2CTC檢測(cè)技術(shù)

2.1　細(xì)胞計(jì)數(shù)法

最早應(yīng)用于檢測(cè)外周血CTC的方法，基于細(xì)胞膜表面的特異分子標(biāo)志物來分離和計(jì)數(shù)CTC。較核酸分離方法，其優(yōu)點(diǎn)在于細(xì)胞未被破壞，保持完整，可在形態(tài)學(xué)上鑒別惡性表型和在單個(gè)細(xì)胞水平進(jìn)行分子特性分析。免疫細(xì)胞化學(xué)法(immunocytochemistry，ICC)是指以顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和細(xì)胞化學(xué)呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定位、定性和定量的技術(shù)。但此方法敏感性低、檢測(cè)繁瑣、易誤診。目前較常用的細(xì)胞角蛋白(Cytokeratin，CK)抗體能與巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞及有核造血細(xì)胞前體特異或非特異結(jié)合[7]，MUC-1可與紅系祖細(xì)胞結(jié)合。使用CD45的對(duì)比染色使得這種情況有所改善。在乳腺癌中，常使用已有的乳腺癌特異性抗體進(jìn)行CTC篩選，如HER2、抗乳球蛋白等，但并非所有乳腺癌細(xì)胞均表達(dá)這些標(biāo)示物，因此會(huì)產(chǎn)生假陰性結(jié)果，而多種標(biāo)志物聯(lián)合使用，能有效提高此方法檢測(cè)的敏感性和特異性[8]。近年來，在此方法基礎(chǔ)上發(fā)展出了許多改良技術(shù)。其中，光纖陣列掃描術(shù)(Fiber-optic Arry Scanning Technology， FAST)配置了擴(kuò)大視野的光學(xué)收集系統(tǒng)，能夠進(jìn)行連續(xù)掃描，有效避免了純化和富集步驟造成的CTC丟失，能從大量免疫熒光染色的單核細(xì)胞中找出CTC。據(jù)報(bào)道，利用FAST對(duì)三份混入10-21個(gè)人結(jié)直腸癌HT-29細(xì)胞的外周血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，平均敏感性達(dá)到98%[9]。鐳射掃描細(xì)胞技術(shù)器(laser scanning cytometer LSC)則是在聯(lián)合使用抗人上皮抗體和抗CD45抗體標(biāo)記細(xì)胞后，采用前向散射作為其門限參數(shù)分析熒光，使背景熒光改變的修正得以提高，進(jìn)而提高了其檢測(cè)精度，并能在眾多陽性細(xì)胞中重新定位CTC，通過顯微鏡進(jìn)行視覺確認(rèn)，有效提高了掃描熒光染色細(xì)胞的有效率[10]。自動(dòng)細(xì)胞顯像系統(tǒng)(antomated cellular imaging system,ACIS)是一種能更快檢測(cè)載玻片的自動(dòng)掃描顯微鏡，聯(lián)合應(yīng)用了免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)與其他自動(dòng)掃描系統(tǒng)，使檢測(cè)系統(tǒng)具有很好的協(xié)同性，且能在初步掃描和分析結(jié)束后進(jìn)行影像回顧和形態(tài)學(xué)分類。

流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry，F(xiàn)CM)有機(jī)的整和了計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、電子技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)和單克隆抗體技術(shù)等多種高新技術(shù)方法，不僅能鑒定特定標(biāo)本中細(xì)胞抗原性和形態(tài)學(xué)特征，還能通過分選富集目的細(xì)胞，保持細(xì)胞形態(tài)和活力，進(jìn)而對(duì)其進(jìn)行功能學(xué)研究。但FCM檢測(cè)靶細(xì)胞的敏感度約為1/1-10萬，而外周血中CTC數(shù)量常少于1/100萬，因此，CTC的細(xì)胞數(shù)量在一定程度上限制了FCM在此領(lǐng)域的應(yīng)用[11]。

2.2　核酸檢測(cè)法

通過檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的特異遺傳學(xué)改變來確認(rèn)CTC的存在，如原癌基因、抑癌基因突變或染色體異常重排，微衛(wèi)星不穩(wěn)定性、致瘤病毒序列等，均可用于檢測(cè)。

聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)，是檢測(cè)CTC敏感度較高的一種方法，檢出率可達(dá)1/(1-10)×106個(gè)正常細(xì)胞。但是，除了少數(shù)實(shí)體腫瘤的染色體突變或基因突變，絕大多數(shù)實(shí)體腫瘤的DNA變化沒有明顯的特異性，很少能用于CTC檢測(cè)。此外，DNA改變的出現(xiàn)僅存在于混合型損傷以及成熟的腫瘤中，外周血中CTC和核酸的半衰期也不穩(wěn)定，檢測(cè)到游離DNA僅能反映核酸的存在，而不能證明是否存在真正的腫瘤細(xì)胞，因此應(yīng)用PCR技術(shù)檢測(cè)CTC的特異性還有待進(jìn)一步研究。

逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,rt-PCR)是在PCR基礎(chǔ)上擴(kuò)增由腫瘤特異性mRNA序列逆轉(zhuǎn)錄的DNA片段，能檢測(cè)到組織或腫瘤的特異性mRNA的表達(dá)或突變基因的RNA水平異常。這些RNA通常不表達(dá)于正常外周血細(xì)胞，且半衰期較短，細(xì)胞死亡后，RNA可迅速從血中降解，因此檢測(cè)到RNA可間接代表完整腫瘤細(xì)胞的特性[12]。研究表明，RT-PCR的敏感性要比免疫細(xì)胞化學(xué)的方法敏感性高很多，可從107-108個(gè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中檢測(cè)到單個(gè)CTC[13]。然而，RT-PCR是以某個(gè)腫瘤標(biāo)志物的mRNA為標(biāo)志物，目的基因在正常細(xì)胞表達(dá)以及樣品污染等因素都易使RT-PCR產(chǎn)生假陽性。研究顯示，一些單純炎癥反應(yīng)也可以引起腫瘤抗原mRNA的升高，所以癌癥患者伴隨炎癥反應(yīng)也可能會(huì)增加RT-PCR方法測(cè)定CTC的假陽性率[14]。此外，游離RNA和雜交DNA也可能導(dǎo)致假陽性，影響CTC檢測(cè)的特異性[15]。

CTC核酸檢測(cè)方法具有高敏感度，但是，由于缺乏真正的腫瘤特異性標(biāo)志物使得該方法特異性較低，易產(chǎn)生假陽性。近年來，實(shí)時(shí)定量探針-PCR、實(shí)時(shí)定量熒光-PCR，巢式定量-PCR等新方法，采用特異探針和實(shí)時(shí)定量雙重特性，提高了擴(kuò)增效率和檢測(cè)敏感度，目前應(yīng)用較廣泛，被認(rèn)為是檢測(cè)CTC有效的方法。

3富集和檢測(cè)相結(jié)合的技術(shù)

3.1　CellSearch

是目前美國FDA批準(zhǔn)的的唯一一項(xiàng)應(yīng)用于臨床的CTC檢測(cè)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌，肺癌，結(jié)直腸癌，肺癌，胃癌，胰腺癌，卵巢癌，膀胱癌等癌癥病人的臨床監(jiān)測(cè)。CellSearch 通過載有抗EpCAM抗體的鐵磁流體對(duì)CTC進(jìn)行富集，用DNA染料固定核酸，將CK和DAPI對(duì)CTC進(jìn)行熒光抗體染色，并用CD45，角蛋白8，18和19對(duì)其余血細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比染色。使用自動(dòng)熒光顯微鏡對(duì)CK+/DAPI+/CD45-細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。使用7.5ml的血液樣本可從400多億血細(xì)胞中檢測(cè)到單個(gè)CTC，對(duì)轉(zhuǎn)移癌的診斷具有很高特異性，并適用于所有類型的腫瘤細(xì)胞。作為一種半自動(dòng)化檢測(cè)工具，此系統(tǒng)既減少了人為因素的誤差，也實(shí)現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化[16]。受限于缺乏腫瘤特異性抗原，此方法也會(huì)存在漏診。此外，使用CellSearch設(shè)備，用CD105代替細(xì)胞角蛋白抗體能夠計(jì)數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞，研究顯示在轉(zhuǎn)移性腫瘤患者和心血管疾病患者中內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)增加[17]。用高分子量黑色素瘤抗體代替細(xì)胞角蛋白抗體能夠計(jì)數(shù)黑色素瘤細(xì)胞[18]，此類細(xì)胞出現(xiàn)常意味著臨床預(yù)后差。

3.2　上皮免疫斑點(diǎn)法(Epithelia immunospot,EPISPOT)

是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定原理發(fā)展的免疫學(xué)分析方法。通過免疫磁珠去除CD45+細(xì)胞，再用CXCR4(腫瘤細(xì)胞歸巢過程中的趨化因子受體)陽性細(xì)胞富集CTC[19]。EPISPOT檢測(cè)如cathepsin-D(一種半胱氨酸蛋白酶)、Mucirr1等腫瘤患者外周血CTC釋放的特異性蛋白，來計(jì)數(shù)分泌這些蛋白的存活的CTC，這些CTC是具有轉(zhuǎn)移潛能的活細(xì)胞，較凋亡細(xì)胞而言更具臨床相關(guān)性[20]。

3.3　CTC芯片(CTC-Chip)

是一種能檢測(cè)出血液中極微量癌細(xì)胞的微流體硅芯片，在芯片表層排布了78000個(gè)包被EpCAM抗體的微位點(diǎn)，當(dāng)血液標(biāo)本流過芯片時(shí)，該抗體通過抗原-抗體反應(yīng)捕獲CTC，使得CTC粘附在芯片上。該檢測(cè)系統(tǒng)選用CKs和DAPI作為陽性分析指標(biāo)，CD45作為陰性分析指標(biāo)。可在10億以上血細(xì)胞檢測(cè)出單個(gè)癌細(xì)胞，敏感性非常高，并適用于所有類型腫瘤患者的外周血樣本[21]。第二代CTC-Chip稱為HB-Chip(herringbone-chip)，通過改進(jìn)該芯片構(gòu)造，使血液標(biāo)本流經(jīng)芯片時(shí)形成微漩渦，增加了芯片表面包被抗體捕獲CTC的機(jī)會(huì)，更加有效捕獲數(shù)量極少的CTC，可捕獲血液中90%以上的癌細(xì)胞，還能捕捉到其它CTC分離設(shè)備未發(fā)現(xiàn)過的腫瘤細(xì)胞團(tuán)塊[22]。此芯片還安裝了一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)載玻片，使用傳統(tǒng)病理檢查方法鑒別癌細(xì)胞，為腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究提供了新型平臺(tái)。

4CTC檢測(cè)臨床應(yīng)用

4.1　乳腺癌

近年來，在乳腺癌患者骨髓中檢測(cè)播散腫瘤細(xì)胞(disseminated tumor cells DTC)和外周血中檢測(cè)CTC已是腫瘤擴(kuò)展的研究要點(diǎn)。約30%-40%的初期乳腺癌患者中可檢測(cè)到DTC，且檢測(cè)結(jié)果與臨床預(yù)后呈臨床相關(guān)性，但由于骨髓穿刺屬于創(chuàng)傷性檢查，外周血CTC檢測(cè)成為一種理想的方式。臨床試驗(yàn)顯示，CTC檢測(cè)成為了初發(fā)和轉(zhuǎn)移性腫瘤預(yù)后的良好評(píng)估指標(biāo)，且對(duì)治療監(jiān)測(cè)和腫瘤轉(zhuǎn)移早期生物靶向治療提供了良好指征[23]。在CTC研究領(lǐng)域，乳腺癌的CTC檢測(cè)是研究最具體，檢測(cè)手段最多的，其臨床價(jià)值也得到了廣泛認(rèn)可。對(duì)42例N~O期的乳腺癌患者檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CTC總陽性率為48.6%，長期隨訪結(jié)果顯示，CTC陽性患者的無病生存期(disease free survival,DFS)、總生存期(overall survival,OS)均較CTC陰性患者短[24]。使用RT-PCR方法對(duì)214例術(shù)后輔助化療完成的臨床Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌患者進(jìn)行CTC檢測(cè)，總陽性率為21%，隨訪發(fā)現(xiàn)，CTC陽性組發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的概率明顯高于CTC陰性組，且陽性組的無病間隔(disease free interval,DFS)也明顯較陰性組短[25]。對(duì)98例轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者進(jìn)行外周血標(biāo)本的CEA和CA15-3檢測(cè)，采用CellSearch進(jìn)行CTC檢測(cè)，結(jié)果顯示，45例(45.9%)為CTC陽性，CTC陽性組較陰性組存活率明顯差。71例(72.4%)存在腫瘤標(biāo)志物(TM)水平增高。在正常TM組中，CTC陽性群體較CTC陰性群體存活率也顯著縮短。因此CTC成為轉(zhuǎn)移性或發(fā)展性乳腺癌患者有力輔助診斷指標(biāo)。在多因素分析中，CTC檢測(cè)可作為唯一的顯著總生存率預(yù)測(cè)因素[26]。對(duì)1944例轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人進(jìn)行CTC檢測(cè)研究，其中，911例(46.9%)CTC計(jì)數(shù)≥5個(gè)/7.5 ml血液組與CTC計(jì)數(shù)<5個(gè)/7.5 ml血液病人相比較，無惡化生存率和總生存率均有顯著差異。臨床病理預(yù)測(cè)模型加入CTC計(jì)數(shù)因素對(duì)生存率預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率顯著提高。模型加入治療后3-5周和6-8周的CTC計(jì)數(shù)后，準(zhǔn)確率進(jìn)一步提高。而癌胚抗原和CA15-3抗原水平對(duì)預(yù)測(cè)模型無明顯幫助[27]。

大量研究證實(shí)，CTC檢測(cè)也能反映患者對(duì)于治療方案的敏感程度。CellSearch檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)300例中國乳腺癌患者分別在治療前，治療后3-4周，治療后6-8周進(jìn)行外周血CTC檢測(cè)，并繪制無惡化生存曲線PFS，分析CTC動(dòng)態(tài)變化對(duì)PFS改善的關(guān)系，結(jié)果提示CTC動(dòng)態(tài)變化能夠預(yù)測(cè)患者疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的改善，并在治療監(jiān)測(cè)中具有重要意義[28]。對(duì)118例乳腺癌患者進(jìn)行治療前后CTC水平的聯(lián)合監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，CTC計(jì)數(shù)情況與原發(fā)腫瘤情況無直接相關(guān)，但可作為早期腫瘤復(fù)發(fā)的獨(dú)立預(yù)后因素[29]。將179例乳腺癌患者分為新輔助療法組(38)，輔助療法組(100)和腫瘤擴(kuò)散組(41)，采用RT-PCR方法進(jìn)行檢測(cè)，新輔助療法組35%未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的早期乳腺癌患者檢測(cè)到CTC陽性，輔助療法組CTC陽性率為26%，腫瘤擴(kuò)散病人中有43%陽性。在治療后，新輔助療法組陽性率減為5%，輔助療法組減為13%，腫瘤擴(kuò)散組減為12%。治療后CTC陽性率可以辨別具有高轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的病人組，即使對(duì)化療前CTC陰性的病人也適用。多元素分析顯示，CTC陽性和臨床病理特征，如腫瘤大小，受體激素狀態(tài)，轉(zhuǎn)移性節(jié)點(diǎn)等無明顯關(guān)系。CTC狀態(tài)對(duì)于早期乳腺癌管理治療等有顯著意義。另一方面，對(duì)乳腺癌病人來說，膜蛋白Her-2的狀態(tài)對(duì)于個(gè)體化治療意義非凡，臨床常通過手術(shù)取出腫瘤進(jìn)行Her-2狀態(tài)分析，但這并不能代表轉(zhuǎn)移的腫瘤。CTC已經(jīng)被證實(shí)在靶向治療中其蛋白和基因水平具有多樣性。而通過對(duì)檢測(cè)到的CTC進(jìn)行相關(guān)蛋白表達(dá)水平的分析，能夠有力指導(dǎo)制定患者個(gè)體化治療方案。將來，CTC也將逐步替代一些治療效果監(jiān)測(cè)指標(biāo)，如Bcl-2，Her-2，AR，IGFRI等，成為治療效果評(píng)估的重要因素。

4.2　肺癌

微芯片技術(shù)在肺癌病人的CTC檢測(cè)中研究最深入。與其它實(shí)體腫瘤相比，非小細(xì)胞性肺癌(NSCLC)患者外周血中CTC相對(duì)較少，但由于缺少其它特異性腫瘤標(biāo)志物，CTC評(píng)估對(duì)NSCLC的預(yù)后評(píng)估具有重要意義。據(jù)研究報(bào)道，CTC對(duì)于轉(zhuǎn)移較快，急需早期診斷的小細(xì)胞癌意義更明顯[30]。對(duì)50例小細(xì)胞肺癌患者檢測(cè)CTC計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示其中位數(shù)為28個(gè)(每7.5ml)，高于其它類型的肺癌，且CTC計(jì)數(shù)越多預(yù)后越差[31]。對(duì)60例SCLC癌患者進(jìn)行治療前，第一輪化療后和化療后的CTC檢測(cè)，結(jié)果顯示，治療前90%(54/60)患者CTC計(jì)數(shù)陽性，且CTC計(jì)數(shù)與擴(kuò)散器官數(shù)呈明顯正相關(guān)。化療后，高于89%的病人CTC減少，且化療后CTC計(jì)數(shù)與臨床預(yù)后和死亡風(fēng)險(xiǎn)呈顯著相關(guān)，證明CTC計(jì)數(shù)對(duì)擴(kuò)散性小細(xì)胞癌患者預(yù)后有顯著意義[32]。對(duì)67例骨轉(zhuǎn)移的肺癌患者和30例無轉(zhuǎn)移的肺癌患者進(jìn)行CTC檢測(cè)，及其它臨床資料進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，骨轉(zhuǎn)移組與無轉(zhuǎn)移組相比，CTC陽性率顯著增高。CTC技術(shù)與其它臨床因素，如年齡，性別，腫瘤類型，肺內(nèi)轉(zhuǎn)移，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無明顯關(guān)聯(lián)，但CTC陽性組肺內(nèi)轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率高于CTC陰性組[33]。有報(bào)道用微芯片技術(shù)分離轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌患者外周血中的CTC，并對(duì)其進(jìn)行EGFR突變和酪氨酸激酶抑制劑耐藥相關(guān)基因檢測(cè)，檢出率可高達(dá)92%，且對(duì)分子靶向藥物使用具有良好指導(dǎo)作用[34]。CTC計(jì)數(shù)也廣泛應(yīng)用于肺癌患者療效評(píng)估的研究中，例如Martin[35]等就用CTC計(jì)數(shù)來監(jiān)測(cè)27例非小細(xì)胞性肺癌患者對(duì)放射治療的敏感情況，從而對(duì)患者治療方案進(jìn)行調(diào)整。

無論在SCLC還是NSCLC中，均證實(shí)了CTC計(jì)數(shù)是重要的預(yù)后因素，且治療前后CTC水平很好的反映了病人對(duì)治療的反應(yīng)情況。而且，CTC的分子水平檢測(cè)結(jié)果與非小細(xì)胞性肺癌的各分子亞型具有良好相關(guān)性。例如對(duì)8例EGFR突變的肺癌患者研究顯示，無EGFR突變的CTC出現(xiàn)與治療反應(yīng)相關(guān)[36]。在分子水平定義的非小細(xì)胞性肺癌亞型中，對(duì)CTC的分子水平的檢測(cè)也證實(shí)了不同亞型間腫瘤細(xì)胞的分子水平存在差異。

4.3　其他

近年來，CTC計(jì)數(shù)快速發(fā)展，并廣泛應(yīng)用于各類腫瘤中。雖然許多血清腫瘤標(biāo)志物如前列腺特異抗原(PSA)、癌胚抗原(CEA)等已經(jīng)廣泛應(yīng)用于人群的腫瘤篩查，但是普遍存在特異性不高，甚至導(dǎo)致假陽性結(jié)果。CTC檢測(cè)技術(shù)為實(shí)體腫瘤的診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)提供了新的有力手段。Blumke K[37]等對(duì)來自兩個(gè)研究中心的214名腎癌患者進(jìn)行腎臟切除前或后，以及化療前后的CTC監(jiān)測(cè)和隨訪，結(jié)果顯示，62%檢測(cè)出CTC的病人兩年內(nèi)發(fā)生了癌細(xì)胞擴(kuò)散或病人死亡。而CTC的出現(xiàn)不僅與腫瘤分期有一定相關(guān)性，與腫瘤侵襲力也相關(guān)。129例上皮卵巢癌患者進(jìn)行術(shù)前侵略性CTC(iCTC)檢測(cè)，結(jié)果顯示，對(duì)I期和II期的上皮卵巢癌患者而言，iCTC敏感性為41.2%，特異性為95.1%，陽性預(yù)測(cè)率為77.8%。CA125對(duì)I期和II期的上皮卵巢癌患者陽性預(yù)測(cè)率為61.1%，總預(yù)測(cè)率為92.1%，特異性為76.2%。且iCTC與血清CA125相比，與總生存率和無惡化生存率相關(guān)性更強(qiáng)[38]。另據(jù)報(bào)道，在泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤，包括前列腺癌，腎癌，膀胱癌，腎上皮細(xì)胞癌，尤其對(duì)于切除抵抗的前列腺癌患者是有力的預(yù)后工具[39]。CTC能協(xié)助早期診斷腫瘤，小創(chuàng)傷的檢測(cè)腫瘤病理變化，并作為治療反應(yīng)標(biāo)志物有效幫助臨床調(diào)整治療方案。

此外在胰腺癌、腦癌中，CTC檢測(cè)也在逐步應(yīng)用。對(duì)一例轉(zhuǎn)移性腦癌患者腦脊液進(jìn)行CTC的檢測(cè)，證實(shí)了此患者轉(zhuǎn)移的腦部腫瘤為乳腺起源，腦脊液的CTC檢測(cè)也可作為特殊的標(biāo)志物用于診斷和治療反應(yīng)評(píng)估[40]。對(duì)一例轉(zhuǎn)移性食道癌患者使用CellSearch進(jìn)行外周血和腹水的CTC檢測(cè)，證實(shí)了循環(huán)腫瘤細(xì)胞的食道癌來源，以及CellSearch 也可應(yīng)用于腹水的CTC檢測(cè)。

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(收稿日期：2014-10-13)

文章編號(hào)：1007-4287(2015)07-1223-05

*通訊作者

基金項(xiàng)目:上海市科委自然基金項(xiàng)目(15ZR1437900)資助