張 玥張秋華*楊楚楓楊 洋王維寧

(1 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)藥理教研室，沈陽 110032；

2 遼寧省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院中藥室，沈陽 110023)

豆茶決明中木犀草苷的提取及含量測(cè)定

張 玥1張秋華1*楊楚楓1楊 洋1王維寧2△

(1 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)藥理教研室，沈陽 110032；

2 遼寧省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院中藥室，沈陽 110023)

目的探討不同提取方法對(duì)豆茶決明中木犀草苷的影響，為高效提取木犀草苷的含量提供可靠方法。方法以木犀草苷含量為考察指標(biāo)，采用L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選最佳提取工藝，用高效液相色譜法測(cè)定提取物中木犀草苷的含量。結(jié)果正交試驗(yàn)各因素對(duì)結(jié)果影響大小為乙醇濃度＞料液比＞回流時(shí)間＞回流次數(shù)。結(jié)論最佳提取工藝為10倍量80%乙醇回流1 h，提取2次。

豆茶決明；木犀草苷；正交試驗(yàn)；提取工藝；高效液相色譜法

豆茶決明Cassia nomame Sieb.Kitag系豆科決明屬(Casia L.)一年生草本植物，在我國民間用藥歷史悠久[1]。有許多別名，常用的有山扁豆、山茶葉、田皂角、豆茶決明、含羞草決明等。豆茶決明分布廣，產(chǎn)量大[2]，其主要化學(xué)成分包括蒽醌及其苷類，黃酮及其苷類，黃烷醇及其苷類等[3]。近年來的研究表明，黃酮類化合物具有許多藥理作用，其對(duì)心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)疾病均有不同程度的治療作用[4]。豆茶決明中黃酮成分的提取及含量測(cè)定研究較少，本文采用正交法提取豆茶決明中的黃酮，以木犀草苷含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用高效液相色譜法對(duì)不同方法提取的豆茶決明中的木犀草苷含量進(jìn)行分析。

1 材料和方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀：島津LC-20A（紫外檢測(cè)器，四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱）、美國丹佛分析天平TB-114、上海精宏鼓風(fēng)干燥箱。

1.2藥物與試劑 豆茶決明采摘于遼寧省寬甸等地經(jīng)遼寧省食品藥品檢驗(yàn)所王維寧教授鑒定為豆茶決明，Cassia nomame Sieb.Kitag；木犀草苷對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)111720-201307）；D101大孔樹脂（天津市瑞金特化學(xué)品有限公司，批號(hào)2014年6月9日）；乙腈為色譜純；乙醇、磷酸為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.3 提取條件 采用乙醇回流法提取豆茶決明中的黃酮成分，在乙醇回流過程中黃酮提取量受乙醇濃度、料液比、回流時(shí)間、回流次數(shù)等因素的影響，故采用L9（34）正交表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，見表 1。取豆茶決明，按照正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行提取，得到提取液，過濾，回收濾液至稠膏狀，烘干，研成粉末，得成品。

表1 豆茶決明提取因素水平表 （%）

1.4 木犀草苷的含量測(cè)定

1.4.1 色譜條件的確定 參考《中國藥典》2010年版一部金銀花含量測(cè)定項(xiàng)下木犀草苷的含量測(cè)定方法[5]，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整確定本品的色譜條件。色譜柱為Phenomenex C18（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脫，A相為乙腈，B相為0.2%磷酸溶液，0～10min時(shí)A相濃度為20%，10～20min時(shí)為20%～40%，20～35min時(shí)為40%～70%；流速：1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量20μl。

1.4.2 溶液制備 對(duì)照品溶液制備：精密稱取木犀草苷對(duì)照品5.6mg，加70%乙醇溶解，稀釋至每1ml約含木犀草苷50μg的溶液，搖勻。

供試品溶液制備：精密稱取豆茶決明提取物干粉0.5g，置100ml容量瓶中，加70%乙醇，超聲使其溶解，并用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液。

1.4.3 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密稱取木犀草苷對(duì)照品，用70%乙醇溶解并稀釋成一系列濃度的對(duì)照品溶液，照2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：y=893.8x+53.78，r=0.9999，木犀草苷在5.6～168μg/ml濃度范圍內(nèi)，與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

1.4.4 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，照2.2.1項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算木犀草苷色譜峰峰面積的RSD，結(jié)果木犀草苷峰面積RSD值為0.74%，表明本方法精密度良好。

1.4.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液于室溫放置，分別于0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算木犀草苷色譜峰峰面積的RSD，結(jié)果其峰面積的RSD值為0.91%，表明供試品溶液室溫放置在24h內(nèi)穩(wěn)定。

1.4.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取豆茶決明提取物，按供試品溶液制備方法制備6份溶液，照2.2.1項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)，記錄木犀草苷色譜峰的峰面積，計(jì)算供試品中木犀草苷的含量及6份供試品中木犀草苷含量的RSD。結(jié)果木犀草苷的平均含量為8.62%，RSD為1.24%表明，該方法重復(fù)性好。

1.4.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定已測(cè)定含量的豆茶決明提取物0.5g，共9份，分別準(zhǔn)確加入木犀草苷對(duì)照品溶液適量，測(cè)定含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果木犀草苷平均回收率為98.53%，RSD為1.67%(n=9)，表明該方法回收率良好，準(zhǔn)確可行?；厥章式Y(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果 （mg，%）

2 結(jié)果

以提取物中木犀草苷含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，本試驗(yàn)中對(duì)樣品提取時(shí)乙醇濃度、料液比、回流時(shí)間、回流次數(shù)進(jìn)行了考察，結(jié)果表明：對(duì)提取工藝影響因素是主次關(guān)系為乙醇濃度＞料液比＞回流時(shí)間＞回流次數(shù)，其最佳提取工藝是A3B2C3D2，正交試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果 （%）

3 討論

參考《中國藥典》2010年版一部金銀花含量測(cè)定項(xiàng)下木犀草苷測(cè)定的色譜條件，建立豆茶決明提取物中木犀草苷的含量測(cè)定方法。線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果表明木犀草苷在5.6～168μg/ml濃度范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系；精密度試驗(yàn)中峰面積的RSD值為0.74%，表明本方法精密度良好；溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)中峰面積的RSD為0.91%，表明供試品溶液室溫放置在24h內(nèi)穩(wěn)定；重復(fù)性試驗(yàn)中6份供試品中木犀草苷的平均含量為8.62%，RSD為1.24%，表明該方法重復(fù)性好；回收率試驗(yàn)中木犀草苷平均回收率為98.53%，RSD為1.67%(n=9)，表明本方法回收率良好。本研究建立的檢測(cè)方法具有較高的可行性，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

通過對(duì)各提取物含量測(cè)定結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn)，回流時(shí)間及回流次數(shù)對(duì)提取物中木犀草苷含量影響很小，考慮經(jīng)濟(jì)、時(shí)間等因素選擇80%乙醇為提取溶劑，料液比1∶10，回流時(shí)間1小時(shí)，回流2次，為最佳提取方案。

[1]張鐵軍.決明子的研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1995，7(3)：69-74.

[2]連文琰.中國決明屬藥用植物簡(jiǎn)報(bào)[J].中草藥，1986，17(7)：27.

[3]劉碩謙，劉仲華，黃建安，等.水皂角植物資源研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2005，26（1）：245-249.

[4]郭菁菁，楊秀芬.黃酮類化合物對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性肝損傷保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2008，24(1)：5-10.

[5]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（2010年版一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，205-206.

Extraction and Content Determ ination of Luteoloside in Cassia Nomame

ZHANG Yue1，YANG Chufeng1，YANG Yang1，WANG Weining2*,ZHANG Qiuhua1*
(1 Basicmedicine college，Liaoning university of traditional Chinese,Shenyang 110032,China；
2 Mesothecium department,Liaoning institute for drugcontrol，Shenyang 110023,China)

Abstraet：Objectives To explore the different extraction methods of Luteoloside from Cassia nomame for providing an effective way to efficiently extract Luteoloside.Methods With the contents of Luteoloside as the index,L9 (34)orthogonal design was adopted to screen the best extraction process.And the content of Luteoloside in the extraction wasmeasured by HPLC.Results The effects of the various factors of the orthogonal test were the ethanol concentration ＞the extraction liquid volume＞the circumfluence time＞the circumfluence times.Conclusion The best extraction technology was adding 10-fold times of 80%ethanol for 1 h，2 times of extraction.

Cassia nomame;luteoloside;orthogonal test;extraction process;HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.02.076

1672-2779（2015）-02-0142-03

*通訊作者：zqhjxy@163.com

△指導(dǎo)老師

楊 杰 本文校對(duì)：畢秀麗

2014-11-24）