蔡麗梅 李嘉慧 肖青

·實(shí)驗(yàn)研究·

番茄紅素對(duì)慢性酒精中毒肝損傷的保護(hù)作用研究

蔡麗梅 李嘉慧 肖青

目的 研究番茄紅素對(duì)慢性酒精中毒小鼠肝損傷的保護(hù)作用, 探索其發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制。方法 建立小鼠慢性酒精中毒模型, 以番茄紅素灌胃治療, 并建立對(duì)照組。通過比較各組小鼠整體外觀、組織形態(tài)變化以及各組小鼠肝臟勻漿中谷草轉(zhuǎn)氨酶( AST )、谷丙轉(zhuǎn)氨酶( ALT )等指標(biāo)的變化情況,分析番茄紅素對(duì)慢性酒精中毒肝臟的治療作用。結(jié)果 番茄紅素對(duì)小鼠營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、應(yīng)激能力等有所提升,可以降低肝組織AST、ALT活力, 并減少肝臟脂肪變性。結(jié)論 番茄紅素對(duì)慢性酒精中毒肝損傷有保護(hù)作用。

番茄紅素；慢性酒精中毒；肝損傷

番茄紅素是成熟番茄的主要色素, 是一種不含氧的類胡蘿卜素。在類胡蘿卜素中, 它具有最強(qiáng)的抗氧化活性, 是迄今為止自然界中被發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)抗氧化劑之一。有研究表明［1］,醉酒后服用番茄紅素, 可以減輕頭痛、嘔吐等醉酒癥狀。盡管番茄紅素有解酒功能, 但其對(duì)慢性酒精中毒肝臟的預(yù)防性保護(hù)作用的研究目前仍尚未見報(bào)道, 因此, 本課題通過研究番茄紅素能對(duì)慢性酒精中毒導(dǎo)致的肝損傷的保護(hù)作用, 可提供一種新的治療慢性酒精中毒的保肝方法, 為后續(xù)對(duì)番茄紅素的研究和治療慢性酒精中毒患者提供參考, 具有一定的現(xiàn)實(shí)意義和價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 主要藥品及試劑 瀘州老白干, 酒精度52%vol；番茄紅素, 用食用調(diào)和油稀釋；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測(cè)試盒；谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)測(cè)試盒。

1.2 動(dòng)物 小白鼠, 雌雄隨機(jī), 28～35 g。

1.3 方法 將小鼠隨機(jī)分成五組, 正常組：無白酒灌胃；酒精組：前2周, 每天52%白酒以8 ml/kg劑量灌胃1次,第3周調(diào)整白酒劑量以12 ml/kg灌胃1次, 建立模型［2］；番茄紅素保護(hù)組：每天白酒灌胃, 5 h后, 番茄紅素分別以5、10、20 mg/kg灌胃, 并根據(jù)番茄紅素灌胃劑量分為5 mg/kg番茄紅素組、10 mg/kg番茄紅素組和20 mg/kg番茄紅素組。8周后處死所有小鼠, 分別取各組小鼠肝臟用于檢測(cè)。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 小鼠整體情況觀察 觀察各組小鼠毛色, 精神狀態(tài),應(yīng)激能力以及營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)等。

1.4.2 肝組織觀察 取小塊肝組織, 制取肝細(xì)胞切片, HE染色觀察肝組織的形態(tài)變化。

1.4.3 肝臟功能評(píng)價(jià) 制備肝勻漿, 按測(cè)試盒說明書對(duì)ALT、AST進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用統(tǒng)計(jì)軟件Graphpad進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況比較 對(duì)照組小鼠毛色有光澤, 反應(yīng)敏捷,營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)好；酒精組小鼠毛色晦暗, 精神萎靡, 瘦弱；低劑量(5 mg/kg)番茄紅素保護(hù)組毛色與酒精組比較, 反應(yīng)敏捷程度有所提高, 營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)好轉(zhuǎn), 但是番茄紅素濃度越高(10、20 mg/kg),則小鼠狀態(tài)越不好, 甚至與酒精組無別。

2.2 肝組織病理學(xué)變化 光鏡下可見, 酒精組肝小葉界限不清, 肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性, 同時(shí)散在淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞；5 mg/kg番茄紅素組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰, 肝組織極少量空泡；10 mg/kg番茄紅素組肝小葉結(jié)構(gòu)出現(xiàn)疏松；20 mg/kg番茄紅素組肝小葉結(jié)構(gòu)界限開始不清且呈現(xiàn)明顯疏松狀態(tài)。

2.3 肝組織ALT與AST比較 與正常對(duì)照組比較, 酒精組小鼠肝組織ALT、AST明顯升高(19.53±5.66)U/L, (10.14± 2.09)U/L。與酒精組比較, 番茄紅素(5 mg/kg)能顯著降低肝組織ALT、AST(2.56±0.91)U/L、(2.05±0.98)U/L；番茄紅素給藥劑量增加(10、20 mg/kg), ALT、AST明顯回升10 mg/kg：(7.13±3.78)U/L、(6.67±0.83) U/L；20 mg/kg：(19.3±2.56)U/L、(7.02±2.64)U/L。

3 討論

過量飲酒及酗酒對(duì)人體健康的危害正成為日益嚴(yán)重的社會(huì)問題, 長(zhǎng)期大量飲酒可導(dǎo)致慢性的酒精中毒, 對(duì)肝臟的損傷非常大。其中, 酒精代謝產(chǎn)生的氧化應(yīng)激損傷是肝損傷的重要機(jī)制之一［3］。

本研究結(jié)果顯示, 持續(xù)用白酒灌胃小鼠8周后, 酒精組小鼠精神狀態(tài)及應(yīng)激能力等明顯下降, 肝臟組織邊緣界限模糊, 肝細(xì)胞脂肪變性明顯增加, 肝組織AST、ALT水平明顯增加, 證明小鼠肝臟嚴(yán)重?fù)p傷, 模型建立成功。ALT主要存在于肝細(xì)胞漿中, 當(dāng)肝細(xì)胞損傷時(shí), 細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶可進(jìn)入組織中, 導(dǎo)致組織中ALT的水平升高。AST也存在于肝細(xì)胞漿內(nèi), 并分布于線粒體內(nèi), 當(dāng)肝細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷時(shí), AST從線粒體內(nèi)釋放到組織中, 使得組織中AST水平升高［4］。而本實(shí)驗(yàn)中適量的番茄紅素(5 mg/kg)降低肝組織中AST、ALT水平, 肝臟脂肪變性等明顯減少, 表明番茄紅素能一定程度上保護(hù)肝細(xì)胞不受酒精損害。有研究表明, 番茄紅素可以增加超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力及總抗氧化能力(T-AOC)升高, 降低丙二醛(MDA)含量［5］, 說明番茄紅素具有良好的抗氧化能力。故本實(shí)驗(yàn)室下一步將繼續(xù)研究番茄紅素對(duì)慢性酒精中毒肝損傷的可能保護(hù)機(jī)制。

在研究中還發(fā)現(xiàn)番茄紅素低劑量(5 mg/kg)的效果最好,能明顯減少空泡的出現(xiàn), 并能顯著改善肝組織結(jié)構(gòu), 降低AST和ALT水平；而增加劑量(10、20 mg/kg)導(dǎo)致肝臟組織重新出現(xiàn)疏松, 特別是20 mg/kg時(shí)肝臟組織又出現(xiàn)明顯的結(jié)構(gòu)界限不清和顯著的組織疏松, 且AST和ALT水平又明顯回升, 表明肝臟損傷加重。此結(jié)果可能與長(zhǎng)時(shí)間給予高劑量番茄紅素會(huì)超出小鼠肝臟的代謝承載能力或?qū)е掠嘘P(guān)組織細(xì)胞發(fā)生病理變化有關(guān)。關(guān)于番茄紅素最佳劑量的確定, 還可以擴(kuò)大樣本、增設(shè)劑量組進(jìn)行更深入的研究。

綜上所述, 長(zhǎng)期服用番茄紅素對(duì)慢性酒精中毒小鼠肝損傷有一定的預(yù)防性保護(hù)作用, 在臨床上為慢性酒精中毒患者提供一種新型廉價(jià)的保肝藥物提供新的基礎(chǔ)證據(jù)。

［1］ 金麗芬, 張曉燕, 夏文明.番茄紅素的研究進(jìn)展.海軍醫(yī)學(xué)雜志, 2010, 31(1):91-92.

［2］ 劉坤, 倉(cāng)懷芹, 高華,等.硫酸軟骨素對(duì)慢性酒精中毒模型大鼠腦組織神經(jīng)遞質(zhì)的影響研究.中國(guó)藥房, 2011, 22(9):798-800.

［3］ 楊萬枝, 呂雄文.酒精性肝病發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 47(1):97-99.

［4］ 呂圭源, 陳素紅, 張麗丹,等.鐵皮石斛對(duì)小鼠慢性酒精性肝損傷模型血清2種轉(zhuǎn)氨酶及膽固醇的影響.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2010, 16(6):192-193.

［5］ 潘洪志, 萬麗葵, 胡萬勝,等.番茄紅素對(duì)CCl4致大鼠肝腎抗氧化功能改變的保護(hù)作用.衛(wèi)生研究, 2006, 35(3):329-330.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.11.205

2014-12-11］

廣州醫(yī)科大學(xué)學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技項(xiàng)目, (項(xiàng)目編號(hào)：2013A025)

510182 廣州醫(yī)科大學(xué)藥理教研室

肖青