法醫(yī)毒物分析教學(xué)探索：感冒藥中阿片類檢測實(shí)驗(yàn)

吳爭明， 葉永紅， 林澤彬， 姜 宴， 饒渝蘭

(復(fù)旦大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 法醫(yī)學(xué)系，上海 200032)

?

法醫(yī)毒物分析教學(xué)探索：感冒藥中阿片類檢測實(shí)驗(yàn)

吳爭明， 葉永紅， 林澤彬， 姜 宴， 饒渝蘭

(復(fù)旦大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 法醫(yī)學(xué)系，上海 200032)

對感冒藥中阿片類毒品的檢測用于法醫(yī)毒物分析實(shí)驗(yàn)課教學(xué)進(jìn)行了探索，在藥品的取樣量、液液萃取溶劑的選取等方面作了考察和比較。結(jié)果表明，采用強(qiáng)力枇杷露等感冒藥作為檢材、低毒的乙酸乙酯作為萃取劑可以降低毒品檢測實(shí)驗(yàn)的開展難度，提高學(xué)生實(shí)驗(yàn)的安全性；與此同時(shí)，在保證實(shí)驗(yàn)效果的前提下可以提升實(shí)驗(yàn)的趣味性，激發(fā)學(xué)生的興趣。該方法操作簡便、快捷、涉及的有機(jī)溶劑毒性低，可以作為法醫(yī)毒物分析或藥物分析教學(xué)中檢測阿片類毒品的實(shí)驗(yàn)方案。

感冒藥； 阿片類毒品； 法醫(yī)毒物分析； 學(xué)生實(shí)驗(yàn)

0 引 言

法醫(yī)毒物分析是法醫(yī)學(xué)的重要分支學(xué)科，也是法醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生必修的一門主干專業(yè)課程。法醫(yī)毒物分析實(shí)驗(yàn)課是法醫(yī)毒物分析教學(xué)的重要組成部分，學(xué)生通過法醫(yī)毒物分析實(shí)驗(yàn)課的學(xué)習(xí)，將驗(yàn)證、鞏固和擴(kuò)展課堂講授的理論知識，加深對法醫(yī)毒物分析理論知識和實(shí)踐技能的理解，并增強(qiáng)對法醫(yī)毒物分析在法醫(yī)學(xué)科中作用的認(rèn)識。

我國開設(shè)有法醫(yī)學(xué)專業(yè)的院校均將毒品檢測列為法醫(yī)毒物分析實(shí)驗(yàn)課的重點(diǎn)內(nèi)容之一。而阿片類毒品(包括嗎啡、海洛因、可待因等)作為我國濫用情況較為嚴(yán)重的一類毒品，且是引發(fā)吸毒死亡的主要一類毒品[1-2]，其檢測方法更需要每一位法醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生掌握。但在實(shí)際教學(xué)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，涉及阿片類毒品分析的內(nèi)容尚存在一些需要改進(jìn)的地方。①學(xué)生實(shí)驗(yàn)的檢材一般是通過往尿液里添加阿片類毒品的純品來制備?？紤]到學(xué)生提取操作的差異，需要添加毒品的量往往比較大，而國家對毒品管制非常嚴(yán)格[3]，院校購買阿片類毒品有一定難度并需要一定的周期。②以往學(xué)生實(shí)驗(yàn)中涉及阿片類檢測時(shí)通常采用的提取溶劑為氯仿-異丙醇的混合溶劑(9∶1)，其中氯仿具有較大的毒性[4]，學(xué)生使用起來有一定的危險(xiǎn)性。但如果換用其他毒性低的溶劑，如乙酸乙酯，則可能提取效率會受到較大的影響，并直接影響到學(xué)生實(shí)驗(yàn)的成功率。

為解決以上問題，本研究將以易于獲得的含有阿片類毒品的感冒藥作為檢材。一方面，針對網(wǎng)絡(luò)傳某人服用某感冒藥被判吸毒、癮君子在無法獲得毒品的情況下轉(zhuǎn)而大量服用某類感冒藥以滿足吸毒的需要等現(xiàn)實(shí)生活中熱門話題，本研究采用以實(shí)際生活中的常見感冒藥作為檢材，讓學(xué)生用實(shí)驗(yàn)來親自驗(yàn)證這些話題的真實(shí)性，相信可以提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)興趣。另一方面，對于實(shí)驗(yàn)課的準(zhǔn)備老師而言，也可解決毒品購買困難的問題。同時(shí)，本研究將嘗試用低毒性的有機(jī)溶劑替代高毒性的氯仿，即使?fàn)奚恍┨崛』厥章?，但因感冒藥中阿片類毒品濃度較高[5]，仍然可以保證檢出的陽性率，從而保證學(xué)生實(shí)驗(yàn)的順利開展。

1 基本原理

利用阿片類藥物在弱堿性條件下以游離態(tài)存在而能被有機(jī)溶劑提取的特點(diǎn)，在pH 9.0～9.2下采用有機(jī)溶劑乙酸乙酯提取，轉(zhuǎn)移有機(jī)相，吹干后采用丙酸酐衍生化后進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GS-MS)檢測[5-6]。

2 儀器設(shè)備與主要化學(xué)試劑

(1) 儀器設(shè)備。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Agilent Technologies 7890A 5975C)、離心機(jī)(Eppendorf MiniSpin)、渦旋振蕩器(Scientific industries Vortex-Genie)。

(2) 藥品。奧亭(香港奧美制藥)、復(fù)方甘草片(南京白敬宇制藥)、神奇枇杷止咳顆粒(貴州神奇藥業(yè))、強(qiáng)力枇杷露(安徽先求藥業(yè))、克咳膠囊(貴州益佰制藥)。

(3) 試劑。乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、氯丁烷、甲醇、異丙醇、正丁烷、丙酸酐均為分析純，其中甲醇為天津四友精細(xì)化工生產(chǎn)，氯丁烷為Sigma-Aldrich Co., Ltd.公司生產(chǎn)，其余均為國藥集團(tuán)生產(chǎn)。

3 感冒藥中阿片類毒品的檢測步驟

(1) 取樣和溶解。本項(xiàng)目研究的感冒藥包括口服液、藥片、顆粒、膠囊多種劑型，我們根據(jù)藥品劑型的不同采取了不同的取樣和溶解方法。① 奧亭、強(qiáng)力枇杷露：分別取2種液體藥物0.5 mL至2 mL塑料離心管中。② 復(fù)方甘草片：取藥片一片，置于研缽中，研磨至粉狀。稱取約20 mg至2 mL塑料離心管中，加入0.5 mL蒸餾水，渦旋震蕩使之溶解。③ 神奇枇杷止咳顆粒：稱取約20 mg至2 mL塑料離心管中，加入0.5 mL蒸餾水，渦旋震蕩使之溶解。④ 克咳膠囊：將膠囊中粉末倒出，稱取約20 mg粉末至2 mL塑料離心管中，加0.5 mL蒸餾水，渦旋震蕩使之溶解。

(2) pH調(diào)節(jié)。用10%NaoH溶液調(diào)節(jié)樣品溶液pH至9.0～9.2；

(3) 萃取。在離心管中加入乙酸乙酯1.5 mL，渦旋2 min。

(4) 離心。4 000 r/min下離心3 min。

(5) 轉(zhuǎn)移有機(jī)層。緩慢移取上層有機(jī)溶劑(約1 mL)轉(zhuǎn)移至2 mL離心管內(nèi)。此步應(yīng)非常小心，注意不要吸得過快、過多，以免將水相混入有機(jī)相中引入較多的雜質(zhì)并延長吹干時(shí)間。

(6) 吹干。將轉(zhuǎn)移的有機(jī)層60 ℃下空氣吹干。

(7) 衍生化。加入30 μL丙酸酐和50 μL吡啶，渦旋混勻，用封口膜密封后微波爐中高火加熱3 min[8-10]，再次60 ℃下空氣吹干。

(8) 復(fù)溶。加入50 μL甲醇，渦旋振蕩1 min，4 000 r/min下離心3 min，轉(zhuǎn)移上清液至帶有內(nèi)插管的進(jìn)樣小瓶中。

(9) 進(jìn)樣并分析。取樣1 μL，進(jìn)行GC-MS分析。色譜柱為HP-5MS毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；載氣為高純氦氣，流速1.0 mL/min；程序升溫：柱初溫為100 ℃，保持2 min，然后以25 ℃/min 的溫度梯度升至280 ℃，保持15 min，進(jìn)樣口溫度為250 ℃；質(zhì)譜電子轟擊電源70 eV；離子源溫度230 ℃，四級桿溫度150 ℃，傳輸線溫度280 ℃；檢測方式：選擇離子監(jiān)測(SIM)，駐留時(shí)間為50 ms。

4 結(jié)果和討論

4.1 感冒藥中阿片類毒品的檢測情況

本研究考察的5種感冒藥均可檢測到嗎啡與可待因，該2種阿片類毒品均在SIM圖的對應(yīng)保留時(shí)間中顯示出相應(yīng)的峰(見圖1)，并經(jīng)質(zhì)譜碎片離子豐度確認(rèn)。碎片離子信息如表1所示。

圖1 神奇枇杷止咳顆粒中嗎啡和可待因的GC-MS色譜圖(可待因丙酰化物的保留時(shí)間：11.2 min，嗎啡丙酰化物的保留時(shí)間：13.0 min)

表1 感冒藥中嗎啡和可待因的色譜保留時(shí)間和特征離子碎片

4.2 溶液體系量的影響

本研究對2 mL塑料離心管和10 mL具塞玻璃試管進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，0.5 mL水相和1.5 mL乙酸乙酯構(gòu)成的2 mL溶液體系的明顯優(yōu)于2 mL水相和6 mL乙酸乙酯構(gòu)成的8 mL溶液體系，具體表現(xiàn)為：

(1) 2 mL離心管因?yàn)槿芤毫可儆?0 mL具塞試管，在吹干速度上具有較大優(yōu)勢，能夠顯著壓縮試驗(yàn)時(shí)間，這樣將有利于將學(xué)生實(shí)驗(yàn)時(shí)間有效地控制在4學(xué)時(shí)以內(nèi)。

(2) 2 mL離心管取用的藥品與試劑量較少，可以節(jié)省藥品與試劑。

(3) 2 mL離心管為一次性物品，使用方便快捷，可以避免玻璃試管因?yàn)榍逑床粡氐卓赡軐?dǎo)致的污染。

4.3 藥品取樣量的影響

因感冒藥中阿片類毒品的含量較高，藥品取樣量會對待測物的峰形有較大的影響。取樣過多將導(dǎo)致GS-MS的過載，出現(xiàn)平頭峰；取樣過少則可能導(dǎo)致提取出的毒品量達(dá)不到檢測限，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。在我們的實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)對于液體藥品(奧亭、強(qiáng)力枇杷露)，取用0.5 mL較為合適，而其他3種固體藥品，取20 g進(jìn)行提取較為合適。

4.4 萃取溶劑的選擇

查閱文獻(xiàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)三氯甲烷[11]、氯丁烷[12]、氯丁烷/異丙醇[13]混合溶液(3∶1)為提取阿片類毒品常用的提取溶劑。本研究對這3種提取溶劑，以及乙酸乙酯、乙酸乙酯/正己烷混合溶液(9∶1)[14]進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)以上溶劑均可從感冒藥中提取到足量供GC-MS檢測的目標(biāo)毒物。但三氯甲烷毒性較大，且因比重大，萃取時(shí)需將滴管伸至水層下方以取到有機(jī)層，如操作不當(dāng)，易混入水相而引入較多的雜質(zhì)并影響吹干時(shí)間。氯丁烷在萃取中過程中容易乳化[15]，需要破乳，使操作更為繁瑣。而乙酸乙酯/正己烷(9∶1)混合溶液[16]與乙酸乙酯相比，無明顯差別。綜上，考慮到學(xué)生實(shí)驗(yàn)的安全性和可操作性要求，我們建議采用乙酸乙酯作為感冒藥中阿片類毒品的萃取溶劑。

4.5 藥品的比較

(1) 藥品的獲取難度?？丝饶z囊在大部分藥店都可以無需處方買到；其次為復(fù)方甘草片，需要進(jìn)行身份證登記；剩下的藥品在現(xiàn)階段已很難從藥店購得，需要在醫(yī)院藥房憑處方購買。故從藥品的獲取難度考慮，克咳膠囊較優(yōu)。

(2) 溶解難度。液態(tài)的強(qiáng)力枇杷露和奧亭無溶解性問題；神奇枇杷止咳顆粒，20 mg顆粒在振蕩渦旋下可完全溶解于0.5 mL水中；余下的藥品在該取樣量下均不能完全溶解。對于我們考察的藥品，其在水中的溶解性大小依次為：強(qiáng)力枇杷露和奧亭>神奇枇杷止咳顆粒>克咳膠囊>復(fù)方甘草片。故從藥品的溶解難度考慮，強(qiáng)力枇杷露、奧亭和神奇枇杷止咳顆粒較優(yōu)。

(3) 萃取難度。對于強(qiáng)力枇杷露與奧亭，經(jīng)萃取后，水層與有機(jī)層分層明顯，且無中間層，萃取操作較為容易。對于神奇枇杷止咳顆粒，由于溶解性較好，中間層較少，故萃取操作也較為容易。對于復(fù)方甘草片和克咳膠囊，溶于水后會形成較多不溶物，若直接加有機(jī)溶劑萃取則會產(chǎn)生較多的中間層，在萃取時(shí)需要比較小心，此外部分顆粒會進(jìn)入有機(jī)層，使得最后制成的樣品渾濁，需要延長離心時(shí)間或提高離心速度來減少中間層(使用2 mL離心管比使用10 mL具塞試管更容易達(dá)到高轉(zhuǎn)速)。亦可先對水溶液進(jìn)行離心，轉(zhuǎn)移上清液后再進(jìn)行有機(jī)溶劑萃取，但此操作會延長實(shí)驗(yàn)時(shí)間?？紤]到高校毒品毒物分析實(shí)驗(yàn)一次課程一般為4個(gè)學(xué)時(shí)，故操作最為簡單的強(qiáng)力枇杷露、奧亭和神奇枇杷止咳顆粒較優(yōu)。

(4) 吹干難度。對于奧亭，在吹干時(shí)管壁會附著較多難以去除的油狀液滴，進(jìn)樣后待測物的峰形較差，雜質(zhì)峰較多，猜測該油狀液滴可能為藥品含有的愈創(chuàng)木酚甘油醚[17](標(biāo)識的含量達(dá)到20 mg/mL)。曾嘗試先用乙醚去除愈創(chuàng)木酚甘油醚后再用乙酸乙酯萃取目標(biāo)物，但效果不明顯。其余藥品均可在短時(shí)間內(nèi)吹干。故在吹干難度方面，除奧亭較差外，其余藥物均較好。

綜合上面所述的4個(gè)方面，我們建議使用強(qiáng)力枇杷露或神奇枇杷止咳顆粒作為法醫(yī)毒物分析實(shí)驗(yàn)課的檢材，復(fù)方甘草片與克咳膠囊可作為備選，而奧亭因?yàn)橛忻黠@的缺點(diǎn)故不推薦。

4.6 與現(xiàn)有的學(xué)生實(shí)驗(yàn)方法相比的優(yōu)勢

(1) 更能激發(fā)學(xué)生的興趣。本實(shí)驗(yàn)檢材取自生活中容易得到的藥品，相比直接添加純品制作的檢材，更能夠激發(fā)學(xué)生探索的欲望與對法醫(yī)毒物分析的興趣。

(2) 更為安全?，F(xiàn)有的阿片類毒品的檢測一般采用氯仿作為萃取劑，但氯仿毒性較大。而法醫(yī)學(xué)專業(yè)的學(xué)生化學(xué)基礎(chǔ)較薄弱，使用化學(xué)試劑時(shí)操作上可能會不太注意自我防護(hù)。因此在學(xué)生實(shí)驗(yàn)中使用氯仿作為萃取溶劑有一定的危險(xiǎn)性。本方法使用低毒的乙酸乙酯作為萃取劑，經(jīng)過驗(yàn)證，可以替代毒性大的氯仿用于感冒藥中阿片類毒品的分析，從而可以提高學(xué)生實(shí)驗(yàn)的安全性。

(3) 檢材更容易獲得?，F(xiàn)有的學(xué)生實(shí)驗(yàn)一般將嗎啡純品添加到尿液中制作檢材，而嗎啡純品的購買較為困難。而本方法的檢材容易獲得，在普通的藥店即可買到，并且由于阿片類毒品的含量高，能夠保證有較好的檢測效果，適合用于學(xué)生實(shí)驗(yàn)。

5 結(jié) 語

本研究采用克咳膠囊、復(fù)方甘草片、強(qiáng)力枇杷露等5種常見感冒藥作為檢材，對感冒藥中阿片類毒品的檢測用于法醫(yī)毒物分析實(shí)驗(yàn)課教學(xué)的可行性進(jìn)行了探索。結(jié)果表明，強(qiáng)力枇杷露和神奇枇杷止咳顆粒可以作為學(xué)生實(shí)驗(yàn)的檢材(復(fù)方甘草片與克咳膠囊可作為備選)，而低毒的乙酸乙酯可用作萃取溶劑以替代以往實(shí)驗(yàn)中常用的高毒的氯仿。該方法在保證教學(xué)效果的基礎(chǔ)上降低了檢材的準(zhǔn)備難度、增加了實(shí)驗(yàn)的安全性，并更能夠激發(fā)學(xué)生的興趣，可以作為法醫(yī)毒物分析或藥物分析教學(xué)中檢測阿片類毒品的實(shí)驗(yàn)方案。

[1] Bush D M．The U.S. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs: current status and future considerations[J]. Forensic Science International，2007，174：111-119.

[2] 黃光照. 法醫(yī)毒理學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2004:85-86.

[3] 曾文遠(yuǎn). 論我國現(xiàn)行禁毒工作方針的內(nèi)涵[J]. 江西警察學(xué)院學(xué)報(bào)，2011(2):103-106.

[4] 李靈宏，蔣學(xué)之. 氯仿的毒性及車間衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)研究[J]. 中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志，1993(4):206-208.

[5] 《中華人民共和國藥典》編輯委員會. 中國藥典2000年版(二部)[S]. 北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000：503-503.

[6] 楊玉林，溫憶敏. 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析中毒樣品中四種生物堿[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2004，14(3):272-273.

[7] 徐明琴，蒲 剛. 阿片類藥物的分析方法[J]. 國外醫(yī)藥(抗生素分冊)，2006，27(2):84-86.

[8] 孟品佳. 鴉片類毒品酰化與硅烷化在GC-MS 分析中的比較[J]. 化學(xué)試劑，2010，32: 69-73.

[9] 沈 敏，沈保華. 微波照射在衍生化反應(yīng)中的應(yīng)用[J]. 法醫(yī)學(xué)雜志， 1997(13): 200-202.

[10] 秦啟發(fā)，劉守亮. 氣相色譜法測定阿片生物堿的研究[J]. 預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2002，18(2):187-188.

[11] 王繼芬. 超聲萃取-三氟乙酰胺衍生化氣相色譜-質(zhì)譜法測定血液中阿片類毒品[J]. 理化檢驗(yàn): 化學(xué)分冊，2009(12): 1365-1368.

[12] 張興安. 瑞芬太尼群體藥代藥效學(xué)研究進(jìn)展[J]. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2007，23: 291-294.

[13] 孟品佳，王景翰. 生物體液中嗎啡的提取方法研究[J]. 法醫(yī)學(xué)雜志，1999，15: 17-18.

[14] 丁 瓊，任達(dá)兵. 離線二維高速逆流色譜分離制備湖北海棠葉中的黃酮化合物[J]. 江西化工，2014(1):115-121.

[15] 周 華. 一種處理氯仿乳化層的簡便方法[J]. 廣東藥學(xué)，2005(4): 6-6.

[16] 張 瑩，黃志強(qiáng). 氣相色譜法測定茶葉中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量[J]. 色譜，2001，19: 273-275.

[17] 朱衛(wèi)國，李 明. 高效液相色譜法測定愈創(chuàng)木酚甘油醚、福爾可定和馬來酸氯苯那敏含量[J]. 化學(xué)與生物工程，2011，28(7):89-91.

Investigation on the Feasibility of Opiates Detection Using Medicine for Colds as the Samples for Forensic Toxicological Analysis Course

WUZheng-ming,YEYong-hong,LINZe-bin,JIANGYan,RAOYu-lan

(Department of Forensic Medicine, School of Basic Medical Sciences, Fudan University, Shanghai 200032, China)

The feasibility of opiates detection using readily available medicine for colds as the samples for forensic toxicological analysis course was investigated in this study. Several factors like the sampling volume, the selection of extraction solvents were tested. The results that used medicine for colds as samples and ethyl acetate as the extraction solvent showed that this experiment would be simple, safe and interesting. Because of its convenience, efficiency and hypo toxicity, it was a suitable method for the courses of forensic toxicological analysis and pharmaceutical analysis.

medicine for colds; opiates drugs; forensic toxicological analysis; student experiments

2014-04-30

吳爭明(1992-)，男，江蘇濱海人，學(xué)生。

Tel.：15201928462； E-mail: 09301010071@fudan.edu.cn

饒渝蘭(1981-)，女，四川內(nèi)江人，副教授，研究方向?yàn)榉ㄡt(yī)毒物分析的教學(xué)與科研。

Tel.：021-54237403； E-mail: yulan_rao@fudan.edu.cn

R-331

A

1006-7167(2015)03-0223-03