組蛋白去乙?；?、7在腎癌組織中的表達(dá)及臨床意義探討

劉婷婷1，左文東2，宋立友3， 晉學(xué)飛4

(1.吉林省軍隊(duì)離退休干部療養(yǎng)中心，吉林 長(zhǎng)春130000；2.吉林省前衛(wèi)醫(yī)院；

3.吉林省腫瘤醫(yī)院；4.吉林大學(xué)中日聯(lián)醫(yī)院)

腎癌是泌尿外科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，又叫腎細(xì)胞癌或腎腺癌，是一種起源于腎小管上皮細(xì)胞的腎實(shí)質(zhì)性腫瘤。目前，對(duì)于腎癌的發(fā)病機(jī)制，國(guó)內(nèi)外仍無(wú)統(tǒng)一意見(jiàn)，但都認(rèn)同腎癌的發(fā)生是多因素共同參與形成的[1]。組蛋白去乙?；?HDAC)是一種蛋白酶，在人體內(nèi)主要控制染色體的結(jié)構(gòu)修飾和調(diào)節(jié)并控制基因的表達(dá)。在細(xì)胞核中，組蛋白的乙?；腿ヒ阴；乃俾蚀笾孪嗤幱趧?dòng)態(tài)平衡，其速率就是由組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶(HAT)和組蛋白去乙酰化酶(HDAC)共同調(diào)控的。HDAC-1在細(xì)胞周期中，主要起到控制細(xì)胞周期和轉(zhuǎn)錄因子的分化與增殖；HDAC-7近年來(lái)在多種腫瘤中都發(fā)現(xiàn)了其有過(guò)表達(dá)的情況，王君等人認(rèn)為HDAC-7可以作為診斷腎癌的腫瘤標(biāo)記物之一，并且可以檢測(cè)其預(yù)后情況[2]。本次研究著重探討HDAC-1和HDAC-7在腎癌組織中的表達(dá)情況及其臨床意義，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1　一般資料

隨機(jī)選取2013年1月至7月期間，我院泌尿外科收治的、經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為腎癌的患者67例。其中男性44例，女性23例，年齡范圍48-72歲，平均年齡(57.3±9.6)歲。透明細(xì)胞癌51例，顆粒細(xì)胞癌9例，混合細(xì)胞癌5例，未分化細(xì)胞癌2例。根據(jù)臨床TNM分期，Ⅰ期12例，Ⅱ期15例，Ⅲ期29例，Ⅳ期11例。根據(jù)病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級(jí)為分化良好，Ⅱ級(jí)為中等分化，Ⅲ級(jí)為分化不良，其中Ⅰ級(jí)24例，Ⅱ級(jí)28例，Ⅲ級(jí)15例。

1.2　研究方法

術(shù)中尋找目標(biāo)瘤體，沿瘤體邊緣選取無(wú)壞死的腫瘤組織，取2-4 mm作為病例標(biāo)本[3]，在癌旁取正常組織2-4 mm作為正常標(biāo)本，用液氮保存，送檢。如不能及時(shí)送檢，將標(biāo)本保存在-80℃的冰柜內(nèi)。

標(biāo)本用10%的甲醛固定，脫水、包埋，做厚度為3 μm的切片3-5張。采用免疫組織化學(xué)法(S-P法)對(duì)標(biāo)本切片進(jìn)行染色，切片脫蠟、水化后，用3%的過(guò)氧化氫溶液對(duì)過(guò)氧化物酶進(jìn)行阻斷，持續(xù)15 min。HDAC-1選取鼠抗人HDAC-1單抗，HDAC-7選取兔抗人HDAC-7單抗，陰性對(duì)照選用濃度為1%的PBS緩沖液作為一抗，利用蘇木精復(fù)染后，用DAB試劑盒顯色后用顯微鏡觀察標(biāo)本切片。所有試劑盒均購(gòu)自上海研晶生物科技有限公司，所有操作均按照相應(yīng)說(shuō)明書嚴(yán)格進(jìn)行操作。

陽(yáng)性表達(dá)判定方法：細(xì)胞染色標(biāo)準(zhǔn)：在細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)淺黃色、棕黃色或黃褐色顆粒為染色細(xì)胞。在400倍光學(xué)顯微鏡下，每張切片隨機(jī)選取4個(gè)視野，每個(gè)視野對(duì)1000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行染色計(jì)數(shù)，觀察每個(gè)標(biāo)本的所有切片，計(jì)算平均染色細(xì)胞數(shù)，作為該例標(biāo)本的染色數(shù)量。陰性(-)：染色細(xì)胞數(shù)量<25%；弱陽(yáng)性(+)：染色細(xì)胞數(shù)量在25%-75%；強(qiáng)陽(yáng)性(++)：染色細(xì)胞數(shù)量>75%。所有標(biāo)本標(biāo)本均由兩位病理專家獨(dú)立審閱并給出結(jié)果，當(dāng)兩位專家意見(jiàn)不一致時(shí)，請(qǐng)第三位專家獨(dú)立給予判定。陽(yáng)性率=(表達(dá)陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)+表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本數(shù))/該組總標(biāo)本數(shù)×100%。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件對(duì)所有實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，對(duì)計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)，對(duì)計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，組間比較采用秩和檢驗(yàn)，取α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2結(jié)果

2.1　HDAC-1和HDAC-7在腎癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)情況

絕大部分腎癌組織中觀察到了HDAC-1和HDAC-7的表達(dá)情況。HDAC-1染色顆粒主要出現(xiàn)在細(xì)胞漿內(nèi)，HDAC-7染色顆粒主要出現(xiàn)在腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞核中，還有部分出現(xiàn)在腎小球上皮細(xì)胞細(xì)胞核中。HDAC-1在腎癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為80.60%，其中弱陽(yáng)性21例，強(qiáng)陽(yáng)性33例，而正常組織中只有7例表達(dá)弱陽(yáng)性，其余均為陰性表達(dá)，HDAC-1在腎癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常組織(P<0.05)。HDAC-7在腎癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為61.19%，其中弱陽(yáng)性29例，強(qiáng)陽(yáng)性12例，在正常組織中僅有8例表達(dá)弱陽(yáng)性，其余均表達(dá)陰性，HDAC-7在腎癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常組織(P<0.05)。

2.2　不同臨床分期HDAC-1和HDAC-7的表達(dá)情況

13例陰性表達(dá)的HDAC-1主要集中在臨床分期為Ⅰ期和Ⅱ期的標(biāo)本中，分別有7例和6例，而Ⅲ期和Ⅳ期標(biāo)本中HDAC-1全部為陽(yáng)性表達(dá)，隨著臨床分期的提高，HDAC-1的陽(yáng)性表達(dá)率也隨之升高，組間比較具有顯著差異(P<0.05)。Ⅰ期和Ⅱ期的標(biāo)本中，HDAC-7多為陽(yáng)性表達(dá)，在Ⅲ期和Ⅳ期標(biāo)本中，HDAC-7多為陰性表達(dá)，隨著臨床分期的提升，HDAC-7的陽(yáng)性表達(dá)率也隨之下降，組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1　不同臨床分期HDAC-1和HDAC-7的表達(dá)情況(n)

注：與Ⅰ期比較，*P<0.05；與Ⅱ期比較，#P<0.05

2.3　不同病理分級(jí)HDAC-1和HDAC-7的表達(dá)情況

病理分級(jí)為Ⅰ級(jí)的標(biāo)本中，僅有約1/2的標(biāo)本HDAC-1表達(dá)陽(yáng)性，而病理分級(jí)為Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)的標(biāo)本中，絕大部分標(biāo)本HDAC-1呈陽(yáng)性表達(dá)，隨著病理分級(jí)的提高，HDAC-1的陽(yáng)性表達(dá)率也隨之提高，組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。病理分級(jí)為Ⅰ級(jí)的標(biāo)本中，絕大多數(shù)標(biāo)本HDAC-7呈陽(yáng)性表達(dá)，隨著病理分級(jí)的提高，HDAC-1的陽(yáng)性表達(dá)率隨之降低，組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見(jiàn)表2。

注：與Ⅰ級(jí)比較，*P<0.05；與Ⅱ級(jí)比較，#P<0.05

3討論

組蛋白去乙酰化酶(HDAC)是一種類蛋白酶，其主要功能是在細(xì)胞染色體修飾過(guò)程中和基因表達(dá)時(shí)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，同時(shí)對(duì)組蛋白的去乙?；^(guò)程起到調(diào)控作用，使之與組蛋白的乙?；俾式咏瑥亩_(dá)到一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡[4，5]。根據(jù)與酵母菌的同源性，HDAC可以分為三型，HDAC-1屬于Ⅰ型，HDAC-7屬于Ⅱ型。近年來(lái)，HDAC-1在多種腫瘤中(如結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌等)被發(fā)現(xiàn)有高表達(dá)的情況，Yu J等人在研究中發(fā)現(xiàn)，HDAC-1有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的能力，并且與腫瘤細(xì)胞對(duì)周圍組織的浸潤(rùn)和向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[6]。作為第一個(gè)在哺乳類動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的HDAC，HDAC-1被認(rèn)為具有調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的動(dòng)能。魏曙光等人在研究中發(fā)現(xiàn)，HDAC-1幾乎參與了整個(gè)細(xì)胞周期，并且，HDAC-1可以通過(guò)對(duì)線粒體轉(zhuǎn)位的控制，來(lái)促進(jìn)癌基因的活化和表達(dá)[7]。而Takashi等人在對(duì)腫瘤細(xì)胞中HDAC-1進(jìn)行干涉的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，缺少HDAC-1的腫瘤細(xì)胞，有絲分裂過(guò)程會(huì)被抑制，取而代之的是Caspase-3的激活，這種改變可以直接導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞進(jìn)入凋亡程序，故提出了HDAC-1抑制劑來(lái)治療腫瘤的新觀點(diǎn)[8]。HDAC-7在體內(nèi)的作用是與肌細(xì)胞結(jié)合因子-2(MEF-2)結(jié)合，對(duì)MMP-10(基質(zhì)金屬蛋白酶-10)的表達(dá)起到抑制作用，MMP-10可以講解細(xì)胞外基質(zhì)，這種作用在血管內(nèi)皮細(xì)胞尤為明顯[9]。HDAC-7通過(guò)上述作用將內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞緊密的連接。Glaser在研究中發(fā)現(xiàn)，若HDAC-7的表達(dá)發(fā)生障礙，則內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞之間的粘附作用會(huì)大大降低[10]。本次研究著重探討HDAC-1和HDAC-7在腎癌組織中的表達(dá)情況，為腎癌的治療提供新思路。

從本次研究的結(jié)果中可以看出，腎癌組織中HDAC-1和HDAC-7的陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于正常組織(P<0.05)，正常組織中未發(fā)現(xiàn)HDAC-1和HDAC-7有強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，僅有7例和8例的陽(yáng)性表達(dá)。而在對(duì)不同臨床分期和病理分級(jí)的腫瘤標(biāo)本的檢查中發(fā)現(xiàn)，隨著臨床分級(jí)和病理分期的提高，HDAC-1的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，而HDAC-7的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸下降?？梢哉J(rèn)為HDAC-1在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到了一定作用，正是由于HDAC-1的高表達(dá)，才使得抑癌基因被抑制，而原癌基因被激活，隨著腫瘤的生長(zhǎng)，HDAC-1的表達(dá)越來(lái)越強(qiáng)烈，可能是腫瘤產(chǎn)生了某種刺激HDAC-1表達(dá)的因子，兩者互成因果。本次研究只對(duì)HDAC-1的表達(dá)做了定性研究，至于其定量檢測(cè)可不可以作為腎癌診斷和評(píng)估預(yù)后的標(biāo)志，還有待進(jìn)一步研究。本次研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，隨著臨床分期和病理分級(jí)的提高，HDAC-7的陽(yáng)性表達(dá)率隨之降低。這說(shuō)明HDAC-7的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤的自然病程和惡性程度均相關(guān)。腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)十分迅速，而當(dāng)其向遠(yuǎn)處發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí)，需要有血管的支持，而HDAC-7的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸降低，可能腫瘤血管向外發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí)的一種特殊變化，也可以認(rèn)為有其它的促癌因素抑制了HDAC-7的表達(dá)。

綜上，HDAC-1和HDAC-7在腎癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于正常腎組織；臨床分期和病理分級(jí)越高，HDAC-1表達(dá)陽(yáng)性率越高，HDAC-7表達(dá)陽(yáng)性率越低。HDAC-1和HDAC-7可能是促進(jìn)腎癌形成的一種因子。

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收稿日期：(2013-12-14)

文章編號(hào)：1007-4287(2015)01-0115-03