紀(jì)中華

（四平市公安局交警支隊(duì)， 吉林 四平 136001）

交通事故中汗?jié)撝赣NA檢驗(yàn)

紀(jì)中華

（四平市公安局交警支隊(duì)， 吉林 四平 136001）

為成功提取交通事故中的指印DNA，用502膠熏顯指印，用EZ-tape膠帶采集車輛方向盤及變速桿等處的脫落細(xì)胞，然后Chelex-100 法與磁珠法結(jié)合提取DNA，延長保溫時(shí)間。DNA定量，根據(jù)DNA濃度調(diào)整PCR 反應(yīng)體系，通過適當(dāng)增加PCR循環(huán)數(shù)、增加PCR 產(chǎn)物量及延長進(jìn)樣時(shí)間等方法，成功地對指印DNA 做了STR分型，確定了兩起交通事故中的駕駛?cè)恕?/p>

法醫(yī)遺傳學(xué)；脫落細(xì)胞；指??；交通事故

DOΙ: 10.16467/j.1008-3650.2015.02.020

隨著我國汽車工業(yè)的發(fā)展，汽車的數(shù)量增加，駕駛?cè)藛T增加，現(xiàn)有的道路狀況容量有限，加之駕駛員水平參差不齊，經(jīng)常發(fā)生道路交通事故。在道路交通事故中有著各種各樣的謎團(tuán)，脫落細(xì)胞物證，尤其是涉嫌車輛上的汗?jié)撝赣?，在解開這些謎團(tuán)中起著重要的作用，但是汗?jié)撝赣⊥鶜埲辈蝗?，特征少或模糊不清，難以進(jìn)行識別，這時(shí)，如果提取其中的脫落細(xì)胞進(jìn)行DNA檢測，可以獲得個(gè)人識別信息，為案件提供了偵查線索。但這些樣本僅含有極微量DNA，屬于低拷貝模板，且易受指印提取方法的影響，因此建立科學(xué)的汗?jié)撝赣NA提取方法極為重要。本文采用502膠熏顯指印，EZ-tape膠帶粘取指印表面DNA，并用Chelex-100和磁珠法相結(jié)合的方法提取DNA，獲得了良好的結(jié)果。

1 案例資料

1.1 案例1

2012 年某日，一輛黑色轎車側(cè)翻于公路路邊溝內(nèi)，經(jīng)勘查，車內(nèi)副駕駛位置一名男青年側(cè)臥于車內(nèi)（已死亡），肇事司機(jī)棄車逃離現(xiàn)場，嫌疑駕駛員趙某某稱車是死者開的。為了證實(shí)趙某某說話的真?zhèn)?，對該車輛方向盤和變速桿表面進(jìn)行了檢驗(yàn)（此表面為皮革材質(zhì)）。技術(shù)人員首先用502膠熏顯指印，但指印殘缺不全，不能采用，后又用EZ-tape膠帶采集方向盤和變速桿上的指印，采用Chelex-100和磁珠法相結(jié)合的方法提取DNA，經(jīng)比對確定了駕駛?cè)司褪勤w某某的事實(shí)。

1.2 案例2

2013 年某日，發(fā)生一起交通事故，一輛無牌車將一過馬路的老太太撞死，肇事后車上2人棄車逃跑，經(jīng)調(diào)閱相關(guān)監(jiān)控錄像，查到張某、謝某。對肇事車輛進(jìn)行勘查，首先用502膠熏顯指印，在駕駛員側(cè)左門擋風(fēng)玻璃升降器按鈕上發(fā)現(xiàn)了一枚模糊指印，無法進(jìn)行同一認(rèn)定，隨后用EZ-tape膠帶采集指印內(nèi)的DNA，同樣采用Chelex-100和磁珠法相結(jié)合的方法提取DNA，和兩犯罪嫌疑人DNA樣本進(jìn)行比對，從而確定了駕駛員為謝某。

2 討 論

汗?jié)撝赣∩嫌忻撀浼?xì)胞，通常是由手指皮膚本身的脫落細(xì)胞和手指觸摸身體其它部位而粘附的脫落細(xì)胞兩部分組成。上皮細(xì)胞角化后，細(xì)胞核消失，但有些細(xì)胞尚未完全角化就脫落了，因此汗?jié)撝赣≈泻形赐耆腔?xì)胞，從中有可能獲得未完全降解的核DNA。在交通事故中，汽車方向盤和變速桿上往往留有汗?jié)撝赣?，這些指印中有脫落細(xì)胞，這些細(xì)胞蘊(yùn)含著駕駛?cè)薉NA信息，有助于確定駕駛?cè)?，對肇事司機(jī)身份的確認(rèn)具有一定的意義。但提取這些DNA有一定的技術(shù)難度：（1）DNA量極少，屬于低拷貝模版；（2）樣本搜集過程中可能損失或被污染；（3）顯現(xiàn)指印的方法對DNA檢出率也有影響。

為獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，本案例對汗?jié)撝赣NA提取采用了以下措施：（1）運(yùn)用502膠熏顯指?。?］。502膠是以α-氰基丙烯酸乙酯為主要成分的粘合劑，顯現(xiàn)指印靈敏度高、清晰度高、應(yīng)用范圍廣，由于汗液中存在水和氨基酸，有少量陰離子存在，502膠汽化氰基丙烯酸單體在這些水或弱堿的引發(fā)下，發(fā)生聚合形成固體狀的指印，聚合是由單體變成高分子的過程，并不會對汗液中的脫落細(xì)胞造成破壞影響。（2）采取EZ-tape膠帶采集DNA［2］。因?yàn)檐囕v方向盤表面多為塑料、皮革、橡膠和金屬等屬于非滲透性載體，利用EZ-tape膠帶的充分粘取，可以將非滲透性載體上的指印物質(zhì)轉(zhuǎn)移的比較徹底，用于DNA檢驗(yàn)。（3）運(yùn)用 Chelex-100和磁珠法純化相結(jié)合提取DNA［3，4］，提高了純化效率。提取時(shí)，用干凈鑷子將膠帶放進(jìn)0.5mL離心管中，盡量放管底，加5% Chelex-100 130μL，剛好浸沒整個(gè)膠帶，向離心管中加5% 蛋白酶K 6μL，在金屬恒溫浴上56℃保溫130min，100℃煮沸16min，13000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一干凈離心管中，轉(zhuǎn)移時(shí)盡量避開Chelex顆粒。將上清液用IQTM磁珠法［5］（Promega公司）進(jìn)行了DNA純化，即向離心管中加入與上清液等體積的裂解液，振蕩后再加入7μL的磁珠，室溫放置5min，渦旋振蕩后將離心管放到磁架上，小心吸去溶液，用100μL裂解液洗滌1次，渦旋振蕩后將離心管放到磁架上，去除所有裂解液，用100μL洗滌液洗滌3次，每次渦旋振蕩使磁珠懸浮，最后一次要去除所有洗滌液，打開離心管蓋子，置磁架上，室溫干燥10min，加入100μL去離子水，蓋好蓋子，充分渦旋振蕩后，65℃加熱5min，取出離心管，渦旋振蕩后，立即將離心管放在磁架上，吸出溶液，以備檢驗(yàn)。運(yùn)用Chelex-100法時(shí)，延長了消化和煮沸時(shí)間，獲得了良好的結(jié)果。適當(dāng)?shù)难娱L消化和煮沸時(shí)間有利于裂解細(xì)胞核，使DNA釋放的更為完全，但膠帶本身可能會在高溫下產(chǎn)生抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì)，為此，在用Chelex-100法提取完DNA后，又用磁珠法對DNA進(jìn)行了純化，通過磁珠純化，有效的去除了PCR抑制物，濃縮了DNA模板。（4）在9700型PCR擴(kuò)增儀上擴(kuò)增，采用10μL反應(yīng)體系，其中加入4μL DNA模板，以提高體系中模板濃度，從而提高了靈敏度。（5）應(yīng)用低拷貝模板PCR技術(shù)［6］，在擴(kuò)增時(shí)，增加PCR循環(huán)數(shù)至32個(gè)循環(huán)。（6）用ABI3130型基因分析儀檢測，并延長進(jìn)樣時(shí)間為10s，如果DNA分型結(jié)果不理想，如等位基因丟失、不平衡及雜帶情況，以相同條件再擴(kuò)增3次，單獨(dú)及混合4次擴(kuò)增產(chǎn)物檢測，綜合分析結(jié)果，防止基因型錯誤判型。

綜上所述，汗?jié)撝赣∶撀浼?xì)胞DNA檢驗(yàn)對偵破交通肇事逃逸疑難案件，確定駕駛員有很大的實(shí)用價(jià)值，雖然現(xiàn)在由于技術(shù)的限制，提取方法還不十分完善，但相信未來隨著DNA檢測技術(shù)的飛速發(fā)展，將會在駕駛員身份確定方面起到不可替代的作用。

［1］ 賴躍.8種方法顯現(xiàn)的汗?jié)撝赣TR分型研究［J］.中國法醫(yī)學(xué)雜志，2007，22（6）: 366-368.

［2］ 袁麗.車輛上脫落細(xì)胞STR 檢驗(yàn)［J］.證據(jù)科學(xué)，2010，18（1）: 120-124.

［3］ 袁麗.手部皮膚脫落細(xì)胞的DNA檢驗(yàn)［J］.中國法醫(yī)學(xué)雜志，2010，25（4）: 270-271.

［4］ 董林芳.聯(lián)合應(yīng)用Chelex-100和磁珠法檢測霉變皮上衣微量DNA 1 例［J］.刑事技術(shù)，2008（6）: 68-69.

［5］ 楊電.DNA IQ 磁珠法結(jié)合Maxwell 16自動儀提取接觸DNA 進(jìn)行STR檢驗(yàn)［J］.刑事技術(shù)，2011（3）: 3-5.

［6］ 馬妍.低拷貝模板DNA 分型及其在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用［J］.中國法醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（2）: 132-135.

本文引用格式：紀(jì)中華.交通事故中汗?jié)撝赣NA檢驗(yàn)［J］.刑事技術(shù)，2015，40（2）：162-163.

Touch DNA Testing in Car Accident Investigation

JΙ Zhong-hua
（Traffi c Management Detachment of Siping Public Security Bureau， Jilin Siping 136001， China）

This paper introduces analysis of fingerprint DNA collected from accidental vehicles.Fingerprint on the steering wheel and gear lever was developed with 502 glue， and EZ-tape was used to collect the shed cells.DNA was extracted with Chelex-100 and magnetic bead-based method， and DNA purifi cation and quantifi cation were performed.PCR reaction was optimized by properly adding 4μL of DNA template and increasing PCR cycle number to 32.PCR products were run in ABΙ3130 with 10s extension of the injection time， and STR profi les were determined.This method had been successfully applied in 2 car accidents and the drivers were identifi ed.

forensic genetics； touch DNA； fi ngerprint； car accidents

DF794.1

A

1008-3650（2015）02-0162-02

紀(jì)中華（1977—），男，吉林四平人，法醫(yī)師，碩士研究生，研究方向?yàn)榉ㄡt(yī)學(xué)。 E-mail：158045289@qq.com

2014-11-25