山豆根急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

★　張晗羚　華碧春　(福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院　福州 350122)

山豆根急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

★張晗羚華碧春(福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院福州 350122)

摘要：目的:實(shí)驗(yàn)研究山豆根水煎液對(duì)小鼠的急性毒性，為山豆根的臨床安全與合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:采用灌胃給藥的方式，按照經(jīng)典急性毒性實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定山豆根水煎液的小鼠口服半數(shù)致死量(LD50)值，觀察小鼠中毒癥狀，記錄小鼠的累計(jì)死亡數(shù)和體重變化。結(jié)果:小鼠口服山豆根水煎液的LD50及95%可信限為47.918(45.192～50.665)g·kg-1，主要毒性癥狀為閉眼、怠動(dòng)、腹式呼吸等。結(jié)論:小鼠一次性口服大劑量山豆根水煎液可造成急性中毒，中毒表現(xiàn)主要為肝臟的損傷。

關(guān)鍵詞：山豆根；水煎液；急性毒性

山豆根為豆科屬植物越南槐SophoratonkinensisGagnep.的干燥根和根莖[1]?？啵?，有毒。歸肺、胃經(jīng)。具有清熱解毒，利咽消腫之功效。主治火毒蘊(yùn)結(jié)、咽喉腫痛、牙齦腫痛、口舌生瘡及肺熱咳嗽等癥。《求真本草》將其譽(yù)為“治療咽喉腫痛第一要藥”。本品始載于《開(kāi)寶本草》：“解諸藥毒，止痛，消瘡腫毒，急黃發(fā)熱，咳嗽，殺小蟲(chóng)?！庇置麨閺V豆根、南豆根、北豆根、苦豆根等，主要分布在我國(guó)東北、華北和西北等地。由于自古以來(lái)中藥同名異物現(xiàn)象的普遍存在，山豆根與防己科植物蝙蝠葛MenispermumdauricumDC.的干燥根莖——北豆根的混淆用藥加劇了人們對(duì)于山豆根毒性的誤解，許多醫(yī)家畏其毒而不敢用，限制了山豆根良好藥效的發(fā)揮。近年來(lái)中藥的不良反應(yīng)受到了社會(huì)各界的廣泛關(guān)注，山豆根的臨床不良反應(yīng)報(bào)道屢見(jiàn)不鮮，但實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道仍不多見(jiàn)?，F(xiàn)本文對(duì)小鼠單次灌服山豆根水煎液后出現(xiàn)的急性毒性反應(yīng)做了初步研究，以期為山豆根的毒性評(píng)價(jià)和臨床安全用藥提供參考。

1動(dòng)物、材料與儀器

1.1動(dòng)物健康KM小鼠(合格號(hào)SCXK(滬)2012-0002)，雌雄各半，SPF級(jí)，體重(20±2)g，由上海斯萊克動(dòng)物中心提供，動(dòng)物飼養(yǎng)在福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)飼養(yǎng)室，實(shí)驗(yàn)期間自由飲水、攝食，室內(nèi)溫度恒定在21℃～24℃，濕度恒定于40%～60%，通風(fēng)良好。

1.2藥材山豆根藥材，產(chǎn)地廣西，批號(hào)20130315，購(gòu)置于福州回春藥業(yè)有限公司，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院楊成梓教授鑒定系為豆科屬植物越南槐SophoratonkinensisGagnep.的干燥根和根莖。

1.3儀器電子天平FA2004N(上海)；離心機(jī)80-2B(上海安亭科學(xué)儀器廠)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52(上海亞榮生化儀器廠)；循環(huán)水真空泵SHB-III(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；水浴鍋(上海錦屏科學(xué)儀器公司)。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1山豆根藥材的制備取山豆根藥材100g，加10倍量水(1 000mL)浸泡60min，武火煮沸后文火煎煮30min，紗布過(guò)濾倒出濾液；濾渣再加5倍量水(500mL)煎煮，武火煮沸后文火煎煮30min，合并兩次濾液，3000r·min-1，離心20min，倒出上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至生藥量2.0g·mL-1，4℃保存，備用。

2.2山豆根水煎液半數(shù)致死量(LD50)測(cè)定根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，山豆根水煎液可測(cè)出小鼠口服LD50值，LD0=40g·kg-1，LD100=60g·kg-1。按照改良寇氏法計(jì)算組間r=0.9。正式實(shí)驗(yàn)分設(shè)5個(gè)劑量組，劑量分別為60g·kg-1、54g·kg-1、48.6g·kg-1、43.74g·kg-1、39.37g·kg-1。

取KM小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成6組(空白對(duì)照組和5個(gè)劑量組)。小鼠禁食不禁水12h后，按最大灌胃量40mL·kg-1體積灌胃給藥1次，空白組灌胃等體積的蒸餾水。各組給藥2h后恢復(fù)給食，正常飼養(yǎng)，觀察14d；給藥30min內(nèi)，連續(xù)觀察；30min～2h，每10min觀察1次；2h～4h，每30min觀察1次；4h～8h，每1h觀察1次；8h～24h，每4h觀察1次；24h之后，每天觀察1次。觀察內(nèi)容為小鼠進(jìn)食、飲水、毛色、精神、呼吸等一般情況及中毒和死亡情況。觀察期間每日記錄小鼠的體重，死亡小鼠解剖肉眼觀察各臟器有無(wú)異常變化。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用Bliss軟件計(jì)算山豆根水煎液的LD50。

3結(jié)果

3.1山豆根水煎液半數(shù)致死量(LD50)山豆根水煎液灌胃小鼠25min后出現(xiàn)小鼠抽搐，繼而死亡。多數(shù)小鼠的死亡集中在12h內(nèi)，各組小鼠的死亡率分別為100%、80%、60%、30%、0%(表1)，灌胃后不同時(shí)間小鼠的累計(jì)死亡數(shù)見(jiàn)圖1。死亡動(dòng)物解剖時(shí)肉眼可見(jiàn)少部分肝臟存在散在淤血點(diǎn)。根據(jù)各組死亡數(shù)計(jì)算LD50值為47.918g·kg-1，95%可信限為45.192～50.665g·kg-1。

回歸方程y(Probit)=-8.977+0.187log(D)

半數(shù)致死量LD50=47.918g·kg-1

LD50(Feiller)校正95%可信限=45.192～50.665g·kg-1

LD5=39.139g·kg-1

LD95=56.698g·kg-1

表1　山豆根水煎液半數(shù)致死量

圖1　山豆根水煎液小鼠急毒(LD50)實(shí)驗(yàn)時(shí)間-累計(jì)死亡曲線

3.2山豆根水煎液致小鼠急性毒性癥狀山豆根水煎液灌胃1min后小鼠出現(xiàn)雙目閉合、怠動(dòng)、豎毛等毒性反應(yīng)，毒性癥狀的發(fā)生率及發(fā)生時(shí)間呈現(xiàn)一定的劑量相關(guān)性。毒性癥狀在給藥后48h內(nèi)基本消失。小鼠灌胃山豆根水煎液急性毒性癥狀見(jiàn)表2。

表2　山豆根水煎液小鼠急性毒性癥狀

3.3山豆根水煎液急毒(LD50)實(shí)驗(yàn)存活動(dòng)物體重變化60g·kg-1劑量組動(dòng)物全部死亡，最后一只死亡時(shí)間在第7d，存活期間每日稱重，體重呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。其余各組動(dòng)物體重增長(zhǎng)緩慢。低劑量組增長(zhǎng)趨勢(shì)高于高劑量組。給藥后第4d各給藥組小鼠體重逐漸恢復(fù)正常增長(zhǎng)(圖2)。

圖2　山豆根水煎液急毒(LD50)存活實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重變化

4討論

山豆根為臨床常用藥，現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合臨床將山豆根用于治療咽喉腫痛、牙齦腫痛、抗腫瘤和抗心律失常等癥。但山豆根的不良反應(yīng)真實(shí)存在且不容忽視，臨床報(bào)道中以胃腸道反應(yīng)和神經(jīng)毒性反應(yīng)引起的損害為主，兩者經(jīng)常伴行。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)分析，山豆根所引起的消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的不良反應(yīng)占其總不良反應(yīng)的32.21%和31.46%。根據(jù)呂莉莉等[2]通過(guò)對(duì)山豆根臨床藥理和有效成分的深入研究后發(fā)現(xiàn)，山豆根主要活性成分為生物堿，所占比例為0.93%，包括苦參堿、氧化苦參堿和槐果堿等。Lan Tang等[3]通過(guò)UPLC發(fā)現(xiàn)，山豆根的藥效主要是山豆根中其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化為苦參堿和氧化苦參堿而發(fā)揮作用。但苦參堿和氧化苦參堿對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有初期呈興奮，繼以麻痹的作用，因此苦參堿和氧化苦參堿既是活性成分也是毒性成分[4]。本文通過(guò)灌胃山豆根水煎液五個(gè)劑量組觀察小鼠急性毒性發(fā)現(xiàn)：山豆根水煎液的半數(shù)致死量(LD50)為47.918g·kg-1，出現(xiàn)的主要急性毒性癥狀有倦怠、呼吸急促、閉眼、豎毛等。藥物性不良反應(yīng)一直是藥物安全性評(píng)價(jià)研究的重點(diǎn)，尤其是近年來(lái)中藥的藥物性不良反應(yīng)更是引起了一番熱議。為了加強(qiáng)臨床的安全合理用藥，除了按照傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論中的配伍理論和藥性理論減毒增效外，對(duì)其毒性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，了解山豆根的毒性特點(diǎn)是非常必要的。根據(jù)中藥配伍中的“七情配伍”理論，配伍減毒是有效降低其毒性的最常用方法之一。目前報(bào)道的山豆根配伍單味藥減毒增效比例前五的主要為甘草(4.9%)、桔梗(3.4%)、玄參(2.4%)、薄荷(2.2%)、黃芩(2.0%)[5]。根據(jù)中藥藥性理論，甘味藥能補(bǔ)、能和、能緩，即具有補(bǔ)益、和中、調(diào)和藥性的作用。如張仲景用藥，常用甘草與麻黃、附子、烏頭等力峻或有毒之品同用；在諸多配伍甘草以降低藥物毒性或峻烈之性的方劑中最具代表性的為四逆湯和調(diào)胃承氣湯[6]。鄭洪波[7]也有報(bào)道，山豆根配伍甘草可減輕毒性，甚至可作為山豆根中毒后急救措施之一。華碧春[8]認(rèn)為要預(yù)防山豆根的不良反應(yīng)，要嚴(yán)格掌握用法用量，煎煮時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，或用研末沖服。山豆根可引起肝毒性，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)解剖死亡小鼠肉眼觀察也證實(shí)了這一點(diǎn)。根據(jù)盛云華[9]所研究山豆根水煎液致小鼠急性肝毒性的時(shí)-效、量-效關(guān)系及病理形態(tài)學(xué)變化顯示，給藥1 h即出現(xiàn)肝小葉周圍性胞質(zhì)疏松；2 h出現(xiàn)多個(gè)單細(xì)胞壞死及空泡變形；6 h后肝細(xì)胞核固縮，細(xì)胞腫大氣球樣變性；肝指數(shù)顯著升高，肝臟組織損傷在24 h最嚴(yán)重；72 h后損傷減輕。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示山豆根單次大劑量給藥會(huì)加重肝臟負(fù)擔(dān)，造成肝臟的病理組織損傷，且呈現(xiàn)一定的時(shí)量效關(guān)系。

本文結(jié)果顯示：?jiǎn)未未髣┝糠蒙蕉垢梢鹦∈蟾闻K急性損傷，長(zhǎng)期服用是否會(huì)產(chǎn)生蓄積損傷及損傷是否可逆和減輕肝損傷的機(jī)制都還有待于進(jìn)一步研究，因此臨床上運(yùn)用山豆根應(yīng)把握好用藥劑量，并進(jìn)一步加強(qiáng)山豆根質(zhì)量控制研究，保證臨床的安全有效。

參考文獻(xiàn)

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Study on Acute Toxicity of Radix et Rhizome Sophorae Tonkinensis

ZHANG Han-ling ，HUA Bi-chun

CollegeofPharmacy,FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China

Abstract:Objective： To study the acute toxicity of water extract of Radix et Rhizoma Sophorae Tonkinensis (RRST) in mice to provide experimental data for safe use in clinal. Methods :With the method of lavage for medicine, the LD50of water extract of RRST were tested by the classical methods of acute toxicity. Observed the symptoms of the acute toxic including the number of death animals and the weight-changes of live mice. Results:The LD50(95% cconfidence interval) of water extract of RRST was 47.918(45.192～50.665)g·kg-1in mice. The main acute tixical symptoms were eyes closed, lazied, shortness of breath and so on. Conclusion:Mice taking high-dose water decoction of RRST one-time can cause acute toxicity and poisoning mainly for liver damage.

Key words:Radix et Rhizome Sophorae Tonkinensis; Water Extract; Acute Toxicity

收稿日期：(2015-01-09)編輯：王河寶

中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B