宋雅嫻　何國平　劉　文　周桂香　胡美紅

作者單位： 230001　合肥　安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院生殖醫(yī)學中心

輔助生殖技術后流產(chǎn)胚胎核型與超聲結果分析

宋雅嫻何國平劉文周桂香胡美紅

作者單位： 230001合肥安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院生殖醫(yī)學中心

[摘要]目的探討輔助生殖技術(ART)治療后妊娠早期影響胚胎發(fā)育的因素。 方法以85例不孕癥患者早孕期流產(chǎn)胚胎為研究對象，分析絨毛染色體以及異常核型、不同受孕方式和年齡對超聲結果的影響。 結果85例流產(chǎn)胚胎中異常核型占50.6%，全部為染色體數(shù)目異常；有胚芽的流產(chǎn)胚胎異常核型率(63.3%)顯著高于無胚芽組(33.3%)，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.006)；有胚芽的胚胎由體外受精聯(lián)合胚胎移植技術(IVF)受精的比例(44.9%)較無胚芽組低(80.6%)，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.001)；流產(chǎn)患者的平均年齡在有胚芽和無胚芽組間分別為(33.4±5.2)歲和(33.0±4.4)歲，但差異無統(tǒng)計學意義(P=0.713)。 結論經(jīng)ART妊娠后胚胎自然流產(chǎn)的異常核型主要是染色體數(shù)目異常，出現(xiàn)胚芽的胚胎中染色體異常率較高，IVF受精的胚胎空孕囊的比例較高，年齡對胚胎組織結構的發(fā)育無顯著影響。

[關鍵詞]不孕癥；自然流產(chǎn)；輔助生殖技術；核型；超聲

近年來，隨著輔助生殖技術(assisted reproductive technology,ART)的進步，不孕癥患者的妊娠率得到了較大提高，然而自然流產(chǎn)仍是較為惡劣的妊娠結局，發(fā)生率為10%～20%，其中多數(shù)為孕早期流產(chǎn)[1,2]。孕早期是胚胎發(fā)育的重要階段，胚胎的許多組織結構都在該階段內(nèi)開始形成，如果胚胎形態(tài)出現(xiàn)異?？赡軙鹆鳟a(chǎn)[3]。關于流產(chǎn)胚胎的報道有很多，然而對不同形態(tài)和不同發(fā)育階段流產(chǎn)胚胎的研究并不多，致使胚胎在不同階段停止發(fā)育的原因仍不明確。在以往的報道中，孕早期流產(chǎn)的相關因素包括染色體異常、年齡、受孕方式等[1,4]，研究這些因素與胚胎停止發(fā)育時不同形態(tài)的關系有助于了解不同發(fā)育階段胚胎的流產(chǎn)原因。本研究將通過檢測經(jīng)ART治療后妊娠早期流產(chǎn)胚胎的B超表現(xiàn)，分析核型、受精方式和患者年齡等對胚胎發(fā)育的影響。

1資料與方法

1.1一般資料收集本院2009～2013年經(jīng)ART治療移植新鮮胚胎妊娠后自然流產(chǎn)并進行絨毛染色體檢測的胚胎標本為研究對象。排除標準：①夫妻雙方有染色體異常，包括平衡異位、臂間倒位、染色體多態(tài)性等；②多胎妊娠；③感染、解剖；④有接觸致染色體畸變物質(zhì)可能性等因素的患者。所有患者均從移植后1個月開始B超監(jiān)測胚胎發(fā)育, 記錄孕囊是否有胚芽以及胎心搏動，未見胚芽或胎心則1周后復查，如仍未見胚芽或胎心搏動，經(jīng)門診檢查診斷為胚胎停止發(fā)育。根據(jù)孕囊中是否出現(xiàn)胚芽將胚胎分為無胚芽組和有胚芽組。85例胚胎中有51例是由體外受精聯(lián)合胚胎移植技術(IVF)受精，34例由卵泡漿內(nèi)單精子注射技術(ICSI)受精。

1.2標本處理行清宮術時,無菌條件下采集絨毛，用生理鹽水浸泡，立刻送至實驗室處理。在無菌操作臺內(nèi)剪取10～15 mg絨毛組織,在生理鹽水中漂洗去除明顯血塊后剪碎，加入絨毛處理試劑(杭州博圣)，37℃消化10～20 min，直至組織塊基本消失，用生理鹽水漂洗2次后接種于培養(yǎng)皿中，加入培養(yǎng)基(AmnioMax-Ⅱ,Gibco)后置于37℃、5% CO2恒溫箱培養(yǎng)，當細胞長至指數(shù)生長期，即可收獲制片。收獲時加入0.08 μg/mL秋水仙素處理2 h，貼壁細胞使用0.25%胰酶消化后離心去除培養(yǎng)基和消化液，向沉淀中加入0.075 MKCl，混勻后低滲10～15 min，甲醇：冰醋酸3 ∶1的固定液固定3次之后按常規(guī)方法滴片制備中期相，G顯帶后進行核型分析。

1.3核型分析每例標本至少檢查2張玻片，共計數(shù)30個分裂相，分析3個核型，并按照《人類細胞遺傳學命名的國際體制》ISCN 2005命名。

2結果

2.1流產(chǎn)絨毛染色體結果本研究共分析85例經(jīng)ART治療移植新鮮胚胎妊娠后流產(chǎn)的標本，絨毛染色體分析的結果見表1，正常核型42例，占49.4%，異常核型43例，占50.6%。異常核型全部為染色體數(shù)目異常，主要是非整倍體，共39例 (90.7%)，包括僅涉及一條染色體的非整倍體(2～8、13、15～18、21、22號染色體三體以及45,X0核型)，以及同時兩條染色體異常的非整倍體(46,X0,+19、48,XX,+9,+21、48,XXX,+13)，多倍體共4例(9.3%)。

2.2不同核型胚胎的B超結果根據(jù)B超結果將停止發(fā)育的胚胎分為無胚芽和有胚芽兩組，有胚芽組異常核型率為63.3%，顯著高于無胚芽組(33.3%)，且差異有統(tǒng)計學意義(P=0.006)。詳見表2。

2.3不同方式受精后流產(chǎn)胚胎的B超結果51例IVF受精胚胎及34例ICSI受精胚胎無胚芽的胚胎多數(shù)為IVF受精29(80.6%)，顯著高于有胚芽組中IVF受精胚胎的比例22(44.9%)，且差異有統(tǒng)計學意義(P=0.001)。詳見表3。

表1　流產(chǎn)絨毛染色體分析結果

表2　不同核型胚胎的B超結果(n=85)

表3　不同方式受精流產(chǎn)胚胎的B超結果(n=85)

2.4流產(chǎn)患者的年齡與流產(chǎn)胚胎B超結果85例不同B超結果的流產(chǎn)胚胎中，無胚芽組36例，平均年齡(33.0±4.4)歲；有胚芽組49例，平均年齡(33.4±5.2)歲，兩組患者年齡差異無統(tǒng)計學意義(P=0.713)。

3討論

孕早期是自然流產(chǎn)的高發(fā)階段，而染色體異常是該時期流產(chǎn)的主要原因。絨毛滋養(yǎng)層細胞與胚胎其他細胞有著相同的遺傳性狀，并且具有相對旺盛的分裂能力，易于體外培養(yǎng)，是研究胚胎核型的理想材料。本研究共分析了85例ART治療后自然流產(chǎn)胚胎的絨毛染色體，其中染色體異常胚胎43例，占50.6%，非整倍體核型以常染色體三體為主，從A組到G組的染色體均有三體核型被發(fā)現(xiàn)，16三體最為常見(共8例，占異常核型的20.51%)，此外，還有45,X0以及多倍體核型，與其他報道相同[1,5]。

早孕的12周是胚胎發(fā)育的關鍵時期，胚芽、胎心均在此階段間出現(xiàn)，缺乏這些特征的胚胎可認為已停止發(fā)育。本研究中經(jīng)ART妊娠后的自然流產(chǎn)胚胎B超顯示的主要形態(tài)包括無胚芽和有胚芽無胎心兩類。為了解異常核型對胚胎發(fā)育的影響，我們比較了不同B超表現(xiàn)的停育胚胎核型，無胚芽的空孕囊異常核型率33.3%明顯低于出現(xiàn)胚芽的胚胎63.3%(P=0.006)，提示出現(xiàn)胚芽的胚胎停止發(fā)育多數(shù)由于染色體異常造成，而未出現(xiàn)胚芽的胚胎流產(chǎn)更可能由其他原因造成。這一結果與其他對自然妊娠流產(chǎn)胚胎研究結果的報道不同。在自然妊娠患者中，出現(xiàn)胚芽和未出現(xiàn)胚芽的流產(chǎn)胚胎染色體異常率并未發(fā)現(xiàn)明顯區(qū)別[5,6]。我們推測自然妊娠和ART妊娠患者之間該結果的差異可能由于多數(shù)ART妊娠患者受子宮內(nèi)膜容受性、炎癥、免疫等因素影響，宮腔環(huán)境并不利于胚胎發(fā)育，造成許多染色體正常的胚胎在胚芽出現(xiàn)前就停止發(fā)育，因而流產(chǎn)胚胎染色體異常率降低。

本資料分析了不同受精方式下流產(chǎn)胚胎的B超表現(xiàn)，結果顯示，無胚芽的胚胎多數(shù)為IVF受精(80.6%)，顯著高于有胚芽組中IVF受精胚胎的比例(44.9%，P=0.001)。由于IVF患者多數(shù)為女方不孕癥， ICSI患者中多數(shù)由于男方不育但女方健康狀況較好，推測可能是女方不孕癥對胚胎早期發(fā)育中胚芽的出現(xiàn)有影響。

年齡是影響胚胎質(zhì)量進而造成流產(chǎn)的重要因素，隨年齡增加不斷下降的卵子質(zhì)量是高齡孕婦胚胎染色體異常率升高的主要原因[2，8]。我們比較了兩組胚胎停止發(fā)育患者的年齡，無胚芽組患者36例，平均年齡(33.0±4.4)歲；有胚芽組49例，平均年齡(33.4±5.2) 歲，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.713)，說明患者年齡并不影響胚胎各組織結構發(fā)育。

本研究目前國內(nèi)報道較少。由于①不孕癥患者妊娠率本身較自然懷孕低；②為排除胚胎冷凍的因素對胚胎發(fā)育的影響，本研究選擇鮮胚移植后妊娠流產(chǎn)的胚胎進行分析；③排除了因夫妻雙方染色體異?；蚨鄳B(tài)性等對胚胎核型影響有爭議的因素等原因，本文的樣本量較少，故需要進一步積累病例進行更深入的分析。

總之，本研究結果表明染色體數(shù)目異常是經(jīng)ART妊娠后胚胎的主要染色體異常；經(jīng)ART妊娠后的流產(chǎn)胚胎中有胚芽的胚胎染色體異常率較未出現(xiàn)胚芽的胚胎高；年齡對胚胎組織結構的發(fā)育無顯著影響。

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(2014-09-22 收稿2015-01-15 修回)

Analysis of karyotype and ultrasound findings in miscarriage embryo following assisted reproductive technology

SongYaxian,HeGuoping,LiuWen,etal

ReproductiveMedicineCenter，theAffiliatedProvincialHospitalofAnhuiMedicalUniversityHefei230001,China

[Abstract]ObjectiveTo analyze the factors affecting embryo development in first trimester following assisted reproductive technology (ART). MethodsSpontaneous abortion embryos from 85 conceptions following ART were analyzed by karyotype, ultrasound findings, the mode of conception and age. ResultsIn 85 abortion embryos, abnormal karyotype consisted 50.6%, all of which were numerical disorders; the percentage of abnormal karyotype in embryos with embryonic pole was significantly higher than that without embryonic pole (63.3%vs33.3%,P=0.006); most embryos with empty sac was fertilized by IVF (80.6%), which was significantly more than that in embryos with embryonic pole (44.9%,P=0.001); between infertile patients with two different embryo morphology, no age effect was found (P=0.929). ConclusionMost abnormal karyotype in miscarriage following ART is numerical disorder and contributes more in abortion embryos with embryonic pole. Most embryos with empty sac come from IVF. No age effect is found in different ultrasound findings of abortion embryo.

[Key words]Infertility; Spontaneous abortion; Assisted reproductive technology; Karyotype; Ultrasound

doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.05.016

通信作者：何國平，13865943124@126.com