黃鱗多孔菌多糖提取和抗氧化活性的研究*

謝美華，羅中澤，李 霖，胡永濤，李雪玲，楊海艷，王振吉，范樹國(guó)

（1.楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系，云南 楚雄 675000；2.云南省高校應(yīng)用生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 楚雄 650000；3.楚雄州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，云南 楚雄 675000；4.楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校信息中心，云南 楚雄 675000）

黃鱗多孔菌多糖提取和抗氧化活性的研究*

謝美華1，2，羅中澤3，李 霖4，胡永濤1，李雪玲1，2，楊海艷1，2，王振吉1，2，范樹國(guó)1，2

（1.楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系，云南 楚雄 675000；2.云南省高校應(yīng)用生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 楚雄 650000；3.楚雄州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，云南 楚雄 675000；4.楚雄醫(yī)藥高等專科學(xué)校信息中心，云南 楚雄 675000）

采用水提醇沉法，通過單因素和正交試驗(yàn)，對(duì)提取黃鱗多孔菌粗多糖的最佳方法進(jìn)行了篩選，并采用DPPH法對(duì)其抗氧化能力進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，提取黃鱗多孔菌粗多糖最佳工藝條件為微波時(shí)間4 min，料液比1∶45，提取次數(shù)2次，粗多糖的得率達(dá)到39.42 mg·g-1。當(dāng)黃鱗多孔菌粗多糖溶液濃度為0.8 mg·mL-1時(shí)，抗氧化活性為42.86%，且提取液中粗多糖的含量與抗氧化活性成正比。

黃鱗多孔菌；粗多糖；抗氧化活性；提取方法

黃 鱗 多 孔 菌 [PolyporusellisiiBerk.P.flavosquamosusUnderw.-Albatrellus ellisii(Berk.) Pouz]，別名黃虎掌菌，是一類外生菌根菌，主要產(chǎn)于云南省楚雄彝族自治州和麗江納西自治縣[1]。該菌有特殊的香味，是一類非常珍稀的野生食用菌資源。有研究表明，真菌多糖由于具有廣泛的抗病治病能力，已成為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)[2]。與其同屬的黑虎掌Sarcodon aspratus(Berk)S.Ito多糖在對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用和藥用保健、液體深層方面已有較多研究報(bào)道[3-6]。目前，黃虎掌菌中粗多糖的提取工藝和抗氧化能力還未見報(bào)道。研究表明，自由基與機(jī)體的許多功能障礙和疾病的發(fā)生密切相關(guān)，DPPH分析法被廣泛應(yīng)用于清除自由基物質(zhì)的性質(zhì)研究[7]。為此，本文采用水提醇沉法，利用單因素和正交試驗(yàn)，對(duì)提取云南野生黃鱗多孔菌粗多糖的最佳方法進(jìn)行了篩選，并采用DPPH法對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行了測(cè)定，為這一資源藥用和保健功效方面的研究提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

黃鱗多孔菌，采自云南省楚雄地區(qū)松樹林中。將新鮮黃鱗多孔菌子實(shí)體洗凈、切片、干燥、粉碎后過40目篩。

1.1 多糖的提取及工藝篩選

1.1.1 提取真菌粗多糖方法的篩選

稱取3份0.5 g的黃鱗多孔菌子實(shí)體粉末，以水為提取劑，固定料液比1∶20（g·mL-1）。分別采用微波5 min、熱水浸提2 h、超聲波20 min三種提取方法，離心取上清液，再加入活性炭去色素，抽濾后取濾液，Sevage法除蛋白（加入氯仿∶正丁醇=4∶1），離心（取上層），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至1/3體積，醇沉，離心取沉淀（4 000 r·min-1，10 min），然后50℃鼓風(fēng)干燥得到黃鱗多孔菌粗多糖。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。1.1.2 正交試驗(yàn)法優(yōu)選提取工藝

通過1.1.1的方法篩選試驗(yàn)，選出最佳的提取方法為微波提取法。然后采用L9（34） 正交設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)，研究不同的微波時(shí)間、料液比和提取次數(shù)3個(gè)因素對(duì)黃鱗多孔菌粗多糖提取率的影響，因素與水平設(shè)計(jì)見表1。每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)試驗(yàn)。

表1 試驗(yàn)因素與水平表Tab.1 Factors and levels

1.1.3 黃鱗多孔菌粗多糖的測(cè)定

采用硫酸-蒽酮比色法[8]。

1.2 不同濃度黃鱗多孔菌的抗氧化能力測(cè)定

采用DPPH法[8]，將維生素C配成濃度為0.01 mmol·L-1、0.03 mmol·L-1、0.05 mmol·L-1、0.07 mmol·L-1、0.09 mmol·L-1、0.1 mmol·L-1、0.2 mmol·L-1、0.3 mmol·L-1、0.4 mmol·L-1、0.5 mmol·L-1的溶液作為對(duì)照試驗(yàn)[9]。試驗(yàn)加樣表見表2。所有測(cè)定重復(fù)操作3次，取平均值。

表2 DPPH試驗(yàn)加樣表Tab.2 Sample-adding method in the DPPH test for extracting crude polysaccharide from Polyporus ellisii

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS Statistics 16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，Excel作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素法篩選提取黃鱗多孔菌粗多糖最佳方法

分別采用微波法、熱水浸提法、超聲波法提取鱗多孔菌粗多糖，結(jié)果見表3。

表3 3種提取方法提取黃鱗多孔菌粗多糖的結(jié)果比較Tab.3 Result comparison of three extraction methods on polysaccharides of Polyporus ellisii

試驗(yàn)結(jié)果表明提取效率最高的是微波法，與熱水浸提法、超聲波法相比在5%水平存在顯著差異。

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 提取工藝條件的比較

根據(jù)2.1單因素方法篩選結(jié)果，采用微波法進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果如表4所示。

表4 黃鱗多孔菌提取粗粗多糖正交試驗(yàn)結(jié)果Tab.4 The results of orthogonal tests of Polyporus ellisii

根據(jù)極差判斷，3個(gè)因素對(duì)黃磷多孔菌粗多糖得率的影響大小依次為微波時(shí)間＞提取次數(shù)＞料液比。通過試驗(yàn)數(shù)據(jù)直觀分析，最佳提取方法是A2B1C2，即微波時(shí)間4 min，料液比1∶45，提取次數(shù)2次。黃鱗多孔菌粗多糖提取正交試驗(yàn)方差分析見表5。

表5 黃鱗多孔菌粗多糖提取正交試驗(yàn)方差分析表Tab.5 The table of variance analysis of Polyporus ellisii crude polysaccharides

從表5的方差分析可以看出，在本試驗(yàn)所研究的范圍內(nèi)，微波時(shí)間對(duì)黃磷多孔菌粗多糖得率有極顯著的影響，微波2 min多糖得率（Mean±SE） 為28.29±1.59，微波4 min為33.89±1.83，微波6 min為36.03±0.82。料液比和提取次數(shù)對(duì)粗多糖得率沒有明顯的影響。

2.2.2 最佳提取條件的驗(yàn)證

為了驗(yàn)證正交試驗(yàn)優(yōu)選的黃鱗多孔菌粗多糖最佳提取工藝條件的穩(wěn)定性，每組稱取原料粉0.5 g，做3組平行實(shí)驗(yàn)，每組3個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)工藝重復(fù)性較好，粗多糖得率平均為40.59± 0.91，試驗(yàn)的重復(fù)性較好。

2.3 不同濃度虎掌菌粗多糖的抗氧化能力

黃鱗多孔菌粗多糖與VC抗氧化抑制率比較情況見表6。

表6 黃鱗多孔菌粗多糖與VC抗氧化抑制率比較Tab.6 Antioxidant inhibitory rate of Polyporus ellisii polysaccharides compared with VC

試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著黃鱗多孔菌粗多糖濃度的提高，抗氧化抑制率也隨之提高。黃磷多孔菌粗多糖質(zhì)量濃度為0.8 mg·mL-1時(shí)，其抑制率與VC質(zhì)量濃度為0.012 mg·mL-1相當(dāng)，說(shuō)明黃鱗多孔菌粗多糖存在一定的抗氧化活性。

3 討論與結(jié)論

云南野生食用菌資源非常豐富，但目前大部份野生食用菌產(chǎn)品的科技含量較低，依然處于產(chǎn)業(yè)鏈的最低端[10]。如何進(jìn)一步地加工開發(fā)出高層次的產(chǎn)品是一個(gè)急需解決的問題。很多研究表明，食用真菌多糖是一種從食用真菌中提取獲得的安全無(wú)毒的天然高分子聚合物，具有復(fù)雜多樣的生物學(xué)活性[11]。所以積極開展這一綠色食品的粗多糖研究，能使其藥理保健方面的功效被更好地開發(fā)利用。本文通過單因素試驗(yàn)對(duì)提取黃鱗多孔菌粗多糖的方法進(jìn)行篩選，結(jié)果表明，微波提取法對(duì)提取該菌的粗多糖具有較高的提取效率。進(jìn)一步的正交試驗(yàn)結(jié)果表明，提取黃鱗多孔菌粗多糖最佳工藝條件為微波時(shí)間4 min，料液比1∶45，提取次數(shù)2次，粗多糖得率為39.42 mg·g-1。采用DPPH法對(duì)其抗氧化活性能力進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明粗多糖濃度0.8 mg·mL-1時(shí)，抗氧化活性為42.86%，且提取液中總粗多糖的含量與抗氧化活性成正比，說(shuō)明黃鱗多孔菌粗多糖存在一定程度的抗氧化活性。

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Study on Polysaccharide Extraction and Antioxidant Capacity of Polyporus ellisii

XIE Mei-hua1，2,LUO Zhong-ze3,LI Lin4,HU Yong-tao1,LI Xue-ling1，2, YANG Hai-yan1，2,WANG Zhen-ji1，2,FAN Shu-guo1，2
(1.Department of Chemistry and Life Science,Chuxiong Normal University,Chuxiong 675000,China; 2.Yunnan Province Applied Biology Key Laboratory of University,Chuxiong 675000,China; 3.Chuxiong Institute of Agricultural Sciences,Chuxiong 675000,China; 4.Information Center,Chuxiong Pharmaceutical College,Chuxiong 675000,China)

Taking water extraction and alcohol precipitation method,the best extraction condition for crude polysaccharide in Polyporus ellisii was screened by single factor and orthogonal test.DPPH assay method was used to determine the antioxidant activities of extract.The results showed that the best extraction condition for crude polysaccharide of Polyporus ellisii was that the microwave extraction rime was 4 minutes,solid-liquid ratio was 1∶45,extraction times was 2,and the extraction yield was 39.42 mg·g-1.The antioxidant properties was 42.86%when solution concentration of crude polysaccharide in Polyporus ellisii was 0.8 mg·mL-1，and the content of crude polysaccharide was directly proportional to the antioxidant activities.

Polyporus ellisii;crude polysaccharide;antioxidant capacity;extraction method

S646.9

A

1003-8310（2015）01-0057-03

10.13629/j.cnki.53-1054.2015.01.016

*項(xiàng)目來(lái)源：云南省重點(diǎn)建設(shè)學(xué)科、楚雄師范學(xué)院重點(diǎn)建設(shè)學(xué)科基金項(xiàng)目（05YJJSXK03）；云南省高?？萍紕?chuàng)新團(tuán)隊(duì)支持計(jì)劃項(xiàng)目（IRT STYN）；楚雄師范學(xué)院基金項(xiàng)目（10YJYB02）；楚雄師范學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（2013cxcy04）。

謝美華（1981-），女，碩士，實(shí)驗(yàn)師，主要從事植物病理學(xué)與微生物方面研究。E-mail:xiemeihua@cxtc.edu.cn

**通信作者：楊海燕（1979-）女，博士，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，主要從事植物病理學(xué)研究，E-mail:cxwhh@cxtc.edu.cn

2014-10-20