袁曉娟， 黃增榮， 趙孝木， 莫興虎， 汪忠榮

(黔東南州動物預防控制中心，貴州凱里556000)

?

豬弓形蟲病診斷方法研究進展

袁曉娟， 黃增榮*， 趙孝木， 莫興虎， 汪忠榮

(黔東南州動物預防控制中心，貴州凱里556000)

豬弓形蟲病可引起豬呼吸困難、高熱和流產，暴發(fā)性流行時會導致大量死亡，對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。文章就豬弓形蟲病的診斷方法進行概述，為防控該病提供一定的科學依據(jù)。

豬；弓形蟲?。辉\斷方法

弓形蟲病是由剛地弓形蟲引起的一種人獸共患原蟲病。弓形蟲于1908年由Nicolle和Manceaux在北非突尼斯的嚙齒類梳趾鼠體內發(fā)現(xiàn)，并正式命名。我國于1955年由恩庶氏首先在福建的貓、兔等動物體內發(fā)現(xiàn)弓形蟲， 1977年在北京、上海等地發(fā)生豬弓形蟲病，并引起普遍重視。本病傳染源主要是病畜和帶蟲動物，易感動物多，貓是各種易感動物的主要傳染源。本病可經(jīng)口、胎盤、皮膚、黏膜感染。據(jù)相關調查，豬是我國人群感染此病的重要傳染源之一[1]。食用未熟的豬肉產品對人體存在著感染弓形蟲的危險[2]。對于豬弓形蟲病的診斷，必須結合病原學、免疫學和分子生物學等方法進行診斷。

1 病原學診斷

病原學診斷方法包括:直接涂片染色、組織切片染色、動物接種或細胞培養(yǎng)法、卵囊檢查法。該方法是從病料中查出弓形蟲存在最可靠的診斷方法，但缺點是敏感性低，耗時長，容易漏診。

2 免疫學診斷

2.1 凝集試驗 主要包括直接凝集試驗(DAT)、間接血凝試驗(IHAT)、改良凝集試驗(MAT)。間接血凝試驗主要用于大規(guī)模的流行病學調查。JmSenet等[3]證實IHAT檢測IgM抗體更敏感，且比間接免疫熒光試驗(IFAT)更能檢測低滴度弓形蟲抗體。王貝貝等[4]用建立的MAT方法適合于對初篩樣本以及臨床上疑似弓形蟲感染個體的篩查，但該法費時、費力，不宜在基層推廣使用。Lorry B等[5]發(fā)現(xiàn)MAT可用于畜群血清學檢測，且該法可作為檢測組織液的良好候選法。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA檢測) ELISA因為靈敏度高、特異性強等優(yōu)點已被廣泛應用于弓形蟲病的診斷。羅才慶等[6]對ELISA和IHAT比較發(fā)現(xiàn)，ELISA 更適用于豬弓形蟲抗體檢測。楊亞曉等[7]對臨床上常用的金標法、IHAT、ELISA檢測對弓形蟲IgG抗體的檢測效能進行比較分析：ELISA檢測弓形蟲IgG抗體的敏感性和特異性較高，適合于大規(guī)模的弓形蟲IgG抗體篩查。在建立方法方面，白昀等[8]初步建立的間接ELISA檢測對豬球蟲、豬肺炎支原體等7種重要病原的陽性血清呈陰性反應，抗原批間、批內試驗變異系數(shù)均小于8%，與商品化試劑盒的符合率達到95%左右，可用于豬弓形蟲特異性抗體的檢測。近年來，不少學者對重組抗原進行了研究，丁邦勝等[9]研究3種重組抗原(rSAG1+rHXGPRT+rAK)混合的間接ELISA 檢測弓形蟲IgM 和IgG，與進口ELISA檢測總符合率高，敏感性、特異性較高，更經(jīng)濟實惠。Bartomiej等[10]使用5組弓形蟲重組嵌合抗原建立酶聯(lián)免疫吸附檢測3個不同的群體家畜動物(馬、豬、羊)血清中的IgG，結果得到所有嵌合抗原具有高特異性(100%)，其中最有效的弓形蟲病的診斷的重組抗原是SAG2-GRA1-ROP1L，可以檢測特定的抗體。

3 分子生物學診斷

聚合酶鏈反應(PCR) 是靠體外擴增病原核酸DNA 序列而進行病原診斷的技術。任科研等[11]研制的弓形蟲PCR檢測試劑盒能擴增出弓形蟲特異性基因MIC3片段，最低能夠檢測到10個弓形蟲速殖子的DNA，臨床應用效果顯著。李輝等[12]建立免疫-PCR檢測弓形蟲抗原最低濃度為 0.1 nng/mL，I-PCR 檢測弓形蟲抗原靈敏度高于傳統(tǒng)ELISA檢測6 000倍，高于ABC-ELISA 750倍。候照峰等[13]建立的弓形蟲熒光定量PCR法檢測弓形蟲Yz-l株與Yz-2株均為陽性，且其他常見寄生原蟲、寄生蟲呈陰性；檢測組織樣品中，熒光定量PCR方法的檢出率明顯高于常規(guī)PCR方法。

環(huán)介導等溫擴增法(LAMP)是一種新型的核酸擴增方法。王玉嬌等[14]用建立的豬弓形蟲病LAMP法檢測豬弓形蟲病血液樣本，在樣本DNA 稀釋3×105倍后仍可檢出豬弓形蟲DNA，且該方法擴增不出新孢子蟲、瑟氏泰勒蟲及豬附紅細胞體等病原體DNA，適合于豬弓形蟲病的檢測。鄒杰等[15]建立的弓形蟲LAMP法能夠檢測出10個拷貝的目的基因，與新孢子蟲等近緣原蟲DNA無交叉反應，且極大地縮短了時間。

4 小結

目前已應用于豬弓形蟲病診斷的方法很多，病原學診斷方法結果最為可靠，但敏感性低、費時、易漏診，在目前條件下尚無其他方法可全部替代。常規(guī)的免疫學方法雖具有簡易、快速等優(yōu)點，但對于陽性結果的分析要慎重。以PCR為代表的分子生物學診斷方法具有敏感、特異、檢測迅速等優(yōu)點，但存在假陽性、操作繁瑣、需專用儀器等缺點，限制了分子診斷技術在基層和臨床工作中的應用。因此，只有結合各種診斷方法的優(yōu)缺點，弓形蟲病診斷方法才會得到更快、更好的發(fā)展。

[1] 呂元聰, 崔君兆.我國部分地區(qū)弓形蟲病流行病學監(jiān)測[J]. 寄生蟲病雜志, 1994, 2(3): 19～22.

[2] Astrid M Tenter, Anja R Heckeroth, Louis M Weiss. Toxoplasma gondii: from animals to humans[J].International journal for parasitology, 2000, 30(12): 1 217～1 258.

[3] Jm Senet, R Robert, G Mauras. [Diagnosis of toxoplasmosis by indirect hemagglutination. II. Value of mixed total antigen fixation in the presence of glutaraldehyde in the early diagnosis of the disease][J]. Biomedicine/[publiee pour l’AAICIG], 1976, 25(6): 212～214.

[4] 王貝貝, 劉帥, 崔麗麗, 等.改良凝集試驗 (MAT) 檢測動物弓形蟲血清抗體[J].中國獸醫(yī)雜志,2012, 48(6): 25～27.

[5] Lorry B Forbes, Sarah E Parker, Alvin A Gajadhar. Performance of commercial ELISA and agglutination test kits for the detection of anti-Toxoplasma gondii antibodies in serum and muscle fluid of swine infected with 100, 300, 500 or 1000 oocysts[J]. Veterinary parasitology, 2012, 190(3): 362～367.

[6] 羅才慶, 游景洲, 劉晶晶,等.ELISA 和 IHA 檢測弓形蟲抗體的比較試驗研究[J]. 中國動物保健,2012, 14(10): 31～34.

[7] 楊亞曉, 陳玉昆, 魏世錦, 等.3 種方法檢測弓形蟲 IgG 抗體的效能[J]. 中國血吸蟲病防治雜志,2014,(1):34.

[8] 白昀,王海燕,張悅,等. 弓形蟲重組 MIC3 蛋白間接 ELISA 檢測方法的建立[J].中國獸醫(yī)科學,2013, 43(7): 738～743.[9] 丁邦勝,李霞,羅慶禮,等. 三種重組蛋白混合抗原的間接 ELISA 法檢測人血清弓形蟲 IgM 和 IgG 抗體[J].中國人獸共患病學報,2014,30(4): 358～363.

[11] 任科研,李琳, 苑淑賢,等.弓形蟲 PCR 檢測試劑盒的組裝和初步應用[J].中國畜牧獸醫(yī),2012,39(9): 92～94.

[12] 李輝,許汴利,鄧艷,等.弓形蟲抗原檢測方法的研究[J].中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志, 2006,24(1): 67～69.

[13] 候照峰, 王尚尚, 賈紅,等.弓形蟲熒光定量 PCR 檢測方法的建立與初步應用[J]. 中國獸醫(yī)雜志, 2015, (1): 3～6.

[14] 王玉嬌，賈立軍.應用環(huán)介導等溫擴增技術 (LAMP) 檢測豬弓形蟲病[J].畜牧與獸醫(yī),2014,(11):27.

[15] 鄒杰, 吳文學, 索勛. 環(huán)介導等溫擴增檢測弓形蟲方法的建立[A].首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學.獸醫(yī)微生物學學術論壇論文集[C].2008.

2015-08-18

從江香豬流行病學調查及免疫防制技術研究

袁曉娟(1989—)，女，研究方向：動物疫病防控。

E-mail：nbwarwor@126.com

S858.28

A

1007-1474(2015)06-0025-02

*通訊作者： 黃增榮(1982—)，男，博士，主要從事動物疫病防控及動物遺傳育種。E-mail：huangzengrong@126.com