中醫(yī)藥防治腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的研究進(jìn)展*

秦 曼 呂孝冬 仲維娜

（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院·哈爾濱 150036）

腎間質(zhì)纖維化（renal interstitial fibrosis，RIF）在慢性腎衰竭（chronic renal failure，CRF）中的作用已經(jīng)被大量臨床及實(shí)驗(yàn)資料所證實(shí)，腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）是RIF發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)。目前國內(nèi)外學(xué)者針對EMT機(jī)制的研究，主要著重于細(xì)胞因子方面。大量研究表明，EMT才是保護(hù)腎功能、防治CRF發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵?；诖耍I臟病學(xué)者做了大量研究，包括中藥單體、經(jīng)驗(yàn)復(fù)方制劑及經(jīng)典方劑，現(xiàn)總結(jié)如下：

1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對EMT發(fā)生機(jī)理的研究概述

EMT是眾多損傷因子長期刺激誘發(fā)的細(xì)胞表型改變，直接參與小管-間質(zhì)纖維化進(jìn)程，腎臟損傷后，在腎臟胚胎發(fā)育中高表達(dá)的一些因子、蛋白重新表達(dá)，轉(zhuǎn)分化表達(dá)胚胎間充質(zhì)細(xì)胞表型，這過程類似胚胎腎發(fā)育過程中后腎間充質(zhì)細(xì)胞向上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化的逆轉(zhuǎn)。其特征是腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)原纖維出現(xiàn)并突破基底膜游離到腎間質(zhì)中，與腎間質(zhì)細(xì)胞、膠原纖維混合存在，受損并處于恢復(fù)狀態(tài)的腎小管上皮細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞等間胚葉細(xì)胞轉(zhuǎn)化，產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）[1]，同時(shí)大量分泌膠原，這導(dǎo)致了腎臟結(jié)構(gòu)的重塑，使得ECM增加而降解減少，促進(jìn)RIF的產(chǎn)生[2]。主要表現(xiàn)為：上皮細(xì)胞極性及胞間的緊密連接消失，上皮型鈣黏蛋白（E-cadherin）表達(dá)減少，基底膜斷裂，a-平滑肌肌動蛋白（a-SMA）重新表達(dá)，Vimentin表達(dá)增加，肌動蛋白微絲重組以及細(xì)胞遷移和浸潤增加[3,4]。

2 單味中藥及其有效提取物的抗EMT研究

單味中藥及其提取物抗EMT的研究多集中在具有“補(bǔ)益、活血、化瘀”等功用的中藥，如：黃芪、大黃、杜仲、丹參、紅花。

2.1 黃芪

牟娜等[5]報(bào)道黃芪可通過抑制DM大鼠腎皮質(zhì)轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）的過度表達(dá)，抑制EMT進(jìn)程。左川[6]等通過研究發(fā)現(xiàn)，黃芪可通過核酸和蛋白水平抑制腎臟結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)的表達(dá)，從而減輕和改善單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)大鼠RIF的進(jìn)展。

2.2 大黃

大黃的主要活性成分為大黃酸、大黃素等。秦建華等[7]認(rèn)為，大黃可調(diào)節(jié)腎臟細(xì)胞增殖、表型轉(zhuǎn)化乃至凋亡，抑制促纖維化因子的合成與分泌，調(diào)節(jié)ECM合成與降解，進(jìn)而起到抗EMT的作用。

2.3 杜仲

藥理研究表明，杜仲可抗病毒、調(diào)節(jié)甘油三酯及膽固醇含量、抑制腫瘤細(xì)胞生長[8]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，杜仲可抑制腎臟組織CTGF的過度表達(dá)，增加基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）的表達(dá)[9]，進(jìn)而減緩腎皮質(zhì)纖維化的病程進(jìn)展[10]。

2.4 丹參

丹參是中藥活血化瘀的代表藥物。趙愛青等[11]應(yīng)用丹參注射液治療UUO大鼠，發(fā)現(xiàn)腎組織TGF-β1、α-SMA的表達(dá)面積均明顯下降，EMT進(jìn)程受到抑制，RIF面積明顯減小。有研究表明丹參可抑制人腎成纖維細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)c-myc蛋白高水平表達(dá)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，長期大量使用可能對RIF病變有一定療效，防止或減少疤痕的形成，延緩慢性腎臟病進(jìn)展，減少終末期腎病的發(fā)生[12]。

2.5 紅花

藥理研究表明[13]，紅花可降低機(jī)體甘油三酯和膽固醇含量，抗血小板聚集，增加冠脈血流量，提高機(jī)體耐養(yǎng)能力，抑制腎小管上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化標(biāo)志物a-SMA和Ⅲ型膠原的表達(dá)，拮抗EMT。

3 中醫(yī)經(jīng)典方劑的抗EMT研究

中醫(yī)經(jīng)典方劑在治療EMT方面成效顯著，包括六味地黃湯、抵擋湯、防己黃芪湯、四妙散、真武湯等。

3.1 六味地黃湯

唐群等[14]通過觀察5/6腎切除大鼠腎組織缺氧誘導(dǎo)因子1a（HIF-1a）、CTGF蛋白水平，證實(shí)六味地黃湯可以通過改善HIF-1a，調(diào)控CTGF從而改善腎小管間質(zhì)部分的慢性缺氧，從而影響腎小管上皮細(xì)胞和間質(zhì)成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)分化。

實(shí)驗(yàn)證實(shí)[15]，六味地黃湯可明顯上調(diào)E-cadherin表達(dá)量，降低a-SMA和FSP-1表達(dá)，從而抑制EMT發(fā)生。

3.2 抵擋湯

馮宏漢等[16]經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)抵擋湯可提高纖溶活性，維持腎間質(zhì)正常血循環(huán)，減少腎組織a-SMA相對陽性表達(dá)面積并抑制其在腎間質(zhì)的表達(dá)，減少纖溶酶原激活劑抑制物-1（plasminogen activator，PAI-1）蛋白表達(dá)面積，抑制EMT，促進(jìn)ECM降解。

3.3 防己黃芪湯

李建秋[17]等經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)防己黃芪湯可有效下調(diào)a-SMA的表達(dá)，下調(diào)TGF-β1表達(dá)，上調(diào)BMP-7的表達(dá)，從而抑制EMT的產(chǎn)生與發(fā)展。張長明等[18]通過實(shí)驗(yàn)證明防己黃芪湯可以有效降低IL-6濃度提高腎組織TGF-β1濃度，陳洪宇[19]等觀察阿霉素腎病大鼠腎組織單核細(xì)胞趨化蛋白-1mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白水平，證明防己黃芪湯可通過降低其表達(dá)以抑制EMT，改善腎臟病理，減少蛋白尿。

3.4 四妙散

楊麗花[20]通過對四妙散含藥血清干預(yù)尿酸誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）纖維化模型的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，四妙散可以改善尿酸誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，下調(diào)TGF-β1、a-SMAmRNA和蛋白的表達(dá)，上調(diào)E-Cadherin mRNA和蛋白的表達(dá)，抑制EMT發(fā)生發(fā)展。

3.5 真武湯

周波等[21]對UUO模型大鼠試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，真武湯能降低模型大鼠血清中肌酐及尿素氮含量，抑制血清中Ang-II和ILK的蛋白表達(dá)以及腎組織中FN和MMP-9蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制EMT，降低RIF程度。

4 討論

EMT的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多途徑的復(fù)雜過程，目前關(guān)于其治療的研究還不盡完善，本文闡述了部分中藥及方劑抑制EMT的機(jī)制。中醫(yī)藥干預(yù)EMT的研究，主要集中在補(bǔ)益、活血、化瘀這幾個(gè)方面發(fā)揮作用，有的甚至已深入到分子生物學(xué)、蛋白表達(dá)等研究水平。但總體來說大部分研究主要還是局限于動物試驗(yàn)，臨床觀察相對較少。通過動物造模雖然可以模擬某一器官的特定病變，但動物的機(jī)體代謝和損傷組織的恢復(fù)與人類在很多方面還是有所不同。另動物試驗(yàn)不能很好的反映中醫(yī)的辯證施治精髓，不能體現(xiàn)人類疾病在全身表現(xiàn)的整體觀，因而中醫(yī)藥在抗EMT的研究中受到一定限制。EMT的產(chǎn)生是受到很多因素共同作用的結(jié)果，而中醫(yī)藥在這一領(lǐng)域的研究還較為零散，得出的許多結(jié)論往往僅代表個(gè)人觀點(diǎn)，缺乏大樣本病例研究的支持，今后若能在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下借助現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究成果，深入研究中醫(yī)藥防治EMT的機(jī)制和作用環(huán)節(jié)，或者將已經(jīng)取得大樣本臨床病例應(yīng)用且療效顯著的中藥處方，用含藥血清進(jìn)行體外藥效學(xué)研究，將有助于開發(fā)出具有抗EMT的新型藥物。

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