張永勝，王艷偉，常雪瑩，廖冬雪，陳冰

(吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林 吉林 132101)

槲寄生為桑寄生科植物槲寄生[Viscumcoloratum(Komar.)Nakai]的干燥帶葉莖枝，我國(guó)東北地區(qū)為主要產(chǎn)地，其它大部分省區(qū)均產(chǎn)，資源豐富。槲寄生常寄生于榆樹(shù)、樺樹(shù)、柳樹(shù)、楓樹(shù)、楊樹(shù)等樹(shù)上，從寄主植物上吸取水分和無(wú)機(jī)物進(jìn)行光合作用[1]。槲寄生主要含有黃酮、皂苷、生物堿以及蛋白、多糖等成分[2]。研究表明，槲寄生具有抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、抗骨質(zhì)疏松、保護(hù)心腦血管及免疫調(diào)節(jié)等作用[3]。對(duì)于不同寄主槲寄生中總生物堿含量的比較目前研究很少。通過(guò)對(duì)2種寄主寄生的黃果槲寄生、紅果槲寄生中總生物堿進(jìn)行提取[4～7]，并進(jìn)行含量的差異比較，可為更好地研究和開(kāi)發(fā)槲寄生資源提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

KQ-100DE超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；RE-3000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海雅榮生化設(shè)備儀器有限公司)；OHG-924385-Ⅲ電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司)；5100紫外分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司)；AL204-IC電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

1.2 試劑

硫酸阿托品對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100040-201312)；溴甲酚綠、鄰苯二甲酸氫鉀等試劑均為分析純。

1.3 槲寄生藥材

均采自吉林省永吉縣，經(jīng)鑒定為槲寄生，寄主為楊樹(shù)和榆樹(shù)，分別為楊樹(shù)寄生黃果槲寄生(YA1)、楊樹(shù)寄生紅果槲寄生(YA2)、榆樹(shù)寄生黃果槲寄生(YU1)、榆樹(shù)寄生紅果槲寄生(YU2)，將藥材清洗、干燥，粉碎處理備用。

2 方法

2.1 總生物堿提取工藝

常溫條件下選擇乙醇濃度(A)、提取時(shí)間(B)、料液比(C)為試驗(yàn)因素，因素水平見(jiàn)表1。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表2。

表1因素水平

Table 1 Factor levels

表2L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

Table 2 L9(34)orthogonal test design and results

由表2可以看出，影響槲寄生總生物堿提取的順序?yàn)锳>B>C，最優(yōu)的提取條件是A1B2C2，即乙醇70%、提取30min、料液比1∶20。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)確定

本方法在200nm～600nm范圍內(nèi)掃描，測(cè)得最大吸收波長(zhǎng)為422nm，且不受供試品及其它試劑的影響。

2.3 溶液配制

2.3.1水飽和正丁醇溶液的制備將正丁醇和蒸餾水混合，超聲振蕩30min后靜置分層，取上層的水飽和正丁醇溶液作為萃取劑留用。

2.3.2供試液的制備精密稱取4種槲寄生粉末各5g，加70%乙醇100mL超聲提取(功率40Hz、時(shí)間30min)，抽濾；殘?jiān)貜?fù)提取1次，合并濾液，減壓濃縮得浸膏，用HCl溶液溶解浸膏，濾過(guò)，用少量氯仿去除溶液中的脂質(zhì)雜質(zhì)，用NaOH溶液調(diào)節(jié)至pH 10～11，氯仿萃取，合并及濃縮濾液，得脂溶性總生物堿A。將堿性水溶液調(diào)節(jié)至pH 6.5～7，用水飽和正丁醇萃取，合并及濃縮濾液，得水溶性總生物堿B，合并A、B，即為提取的總生物堿，加無(wú)水乙醇定容至10mL，作為供試品。

2.3.3對(duì)照品溶液的配制精密稱取硫酸阿托品對(duì)照品20mg，置于50mL容量瓶中，加蒸餾水定容到刻度，搖勻備用。

2.3.4溴甲酚綠試劑的配制取溴甲酚綠100mg溶于12mL 0.2mol/L的NaOH溶液中，加入鄰苯二甲酸氫鉀2.2g，移入200mL量瓶中，用蒸餾水定容到刻度，搖勻備用。

2.4 測(cè)定方法

首先將10mL氯仿加入分液漏斗中，然后再加入精密量取的樣品溶液1mL，最后精密加入2mL溴甲酚綠試劑，振蕩5min后靜置，待氯仿層澄清后分離，在422nm波長(zhǎng)下測(cè)吸收度。用溴甲酚綠溶液飽和的氯仿液為空白對(duì)照，測(cè)定對(duì)照品溶液時(shí)，用蒸餾水稀釋成所要濃度后按同樣方法進(jìn)行測(cè)定。

2.5 精密度試驗(yàn)

取適量的對(duì)照品溶液，按上述方法重復(fù)測(cè)定5次，RSD為0.72%，表示儀器精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液6份，同法測(cè)定，其RSD分別是1.6%，表示此方法有良好的重現(xiàn)性。

2.7 穩(wěn)定性考察

精密吸取供試品溶液1份，分別在0h、4h、12h、16h、20h、24h測(cè)定，供試品溶液在24h內(nèi)RSD分別為1.99%，表示樣品在24h內(nèi)有良好的穩(wěn)定性。

2.8 樣品測(cè)定

將楊樹(shù)紅果槲寄生、楊樹(shù)黃果槲寄生、榆樹(shù)紅果槲寄生、榆樹(shù)黃果槲寄生藥材分別按上述方法制備供試品溶液，在422nm波長(zhǎng)下測(cè)定，計(jì)算各槲寄生的總生物堿含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3不同寄主槲寄生總生物堿含量

Table 3 The content of total alkaloids in different host mistletoe

4 討論

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同寄主、不同品種的槲寄生總生物堿含量有一定的差異性，楊樹(shù)寄生的槲寄生總生物堿含量明顯高于榆樹(shù)寄生的槲寄生；同寄主的槲寄生中，紅果槲寄生總生物堿含量高于黃果槲寄生，其中，楊樹(shù)寄生的紅果槲寄生的總生物堿含量最高，為1.701mg/g，這種現(xiàn)象可能與受到更多的光照及獲得更多生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)有關(guān)。本品采集的為野生槲寄生，且是在冬季采得，其總生物堿含量與采收季節(jié)及枝莖和葉中的不同部位是否存在差異，還需要進(jìn)一步研究。

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