南寧市4 679例新生兒突變耳聾基因篩查結(jié)果

杜娟,許涓涓,黃萍麗,付華鈺

(廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院，南寧530003)

摘要：目的了解南寧市新生兒突變耳聾基因攜帶情況。方法選擇在廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院出生3～5 d的新生兒4 679例，采集其足跟末稍靜脈血，提取DNA，采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)檢測GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA四個耳聾基因的20個突變位點。結(jié)果4 679例新生兒中有143例檢出四個耳聾基因的13種突變類型，突變耳聾基因攜帶率為3.056%。GJB2基因檢出235delC、299_300delAT、176_191del16三種突變共76例，GJB3基因檢出538C>T、547G>A兩種突變5例，SLC26A4基因檢出IVS7-2A>G、1174A>T、1229C>T、1975G>C、2027T>A、2168A>G、六種突變48例，12SrRNA基因檢出1555A>G突變14例。結(jié)論 通過突變耳聾基因篩查可早期發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性耳聾患兒，為人群聽力障礙防控提供幫助。

關(guān)鍵詞：耳聾；先天性疾??；耳聾基因；基因突變；基因篩查；新生兒

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.006

中圖分類號：R394.3文獻標(biāo)志碼：A

基金項目：廣西壯族自治區(qū)科技研究與開發(fā)計劃項目(1140003B-82)。

作者簡介：第一杜娟(1965-)，女，學(xué)士，主任醫(yī)師，主要研究方向為臨床遺傳學(xué)。E-mail： xyycmz@163.com

作者簡介：通信付華鈺(1984-)，女，碩士，住院醫(yī)師，主要研究方向為臨床遺傳學(xué)。E-mail： fuhuayu211@163.com

收稿日期：(2015-08-10)

Screening results of deafness gene mutations in 4 679 newborns in Nanning

DUJuan,XUJuan-juan,HUANGPing-li,FUHua-yu

(MaternalandChildHealthHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Nanning530003,China)

Abstract:ObjectiveTo understand the newborns' carrying situation of the mutation of deafness-related genes in Nanning.MethodsSamples of heel blood were collected from 4 679 newborns in Maternal and Child Health Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region who were born in 3-5 days. DNA samples were extracted and detected by Matrix-assisted Laser Desorption-Ionization Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF-MS), including 20 mutation sites of 4 deafness-related genes (GJB2, GJB3, SLC26A4 and 12SrRNA). Results Among 4 679 newborns, 143 cases (3.056%) were detected with 13 mutation types, which included 76 cases of GJB2 (235delC, 299_300delAT, 176_191del16) gene mutation, 5 cases of GJB3 (538C>T, 547G>A) gene mutation, 48 cases of SLC26A4 (IVS7-2A>G, 1174A>T, 1229C>T, 1975G>C, 2027T>A, 2168A>G) gene mutation and 14 cases of 12SrRNA (1555A>G) gene mutation. ConclusionThe mutation of deafness-related gene screening in neonates may be useful in early detection of delayed deafness and it helps for the prevention and control of hearing impairment.

Key words: deafness; congenital diseases; deafness genes; gene mutation; genetic screening; newborn

2006年中國第二次殘疾人抽樣調(diào)查結(jié)果顯示，我國聽力言語殘障者共2 780萬例，占殘障人總數(shù)的33.52%。7歲以下的聾啞兒童達80萬例，并以每年8萬例聾兒的速度在增長。在重度以上耳聾人群，特別是兒童耳聾群體中，遺傳性耳聾的比例高達60%[1～4]。為做好聽力障礙防控工作，降低人口出生缺陷，我們采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF-MS)對南寧市4 679例新生兒的GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA四個耳聾基因的20個突變位點進行了檢測，了解本市新生兒突變耳聾基因攜帶情況?，F(xiàn)將結(jié)果分析如下。

1資料與方法

1.1臨床資料2014年1月1日～2015年5月10日在廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院出生3～5 d的新生兒中，家屬同意進行突變耳聾基因篩查的新生兒共4 679例(男2 745例，女1 934)。

1.2耳聾基因檢測方法采集受檢新生兒足跟末稍靜脈血，提取DNA，采用MACDI-TOF-MS檢測耳聾基因：根據(jù)飛行時間質(zhì)譜法的技術(shù)路線，將樣本進行擴增、消化、延伸和純化，將延伸產(chǎn)物用質(zhì)譜檢測(詳細步驟參照Sequenom Spectro CHIP Arrays操作說明書)，最后測序、進行數(shù)據(jù)分析。該方法可檢測的耳聾基因共四個(包括20個突變位點)：GJB2(35delG、167delT、176_191del16、235delC、299_300delAT)，GJB3(538C>T、547G>A)，SLC26A4(281C>T、589G>A、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、IVS15+5G>A、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G)，mtDNA 12SrRNA(1494C>T、1555A>G)。

2 結(jié)果

4 679例受檢新生兒中有143例檢出四個耳聾基因的13種突變類型，突變耳聾基因攜帶率為3.056%(143/4 679)。

攜帶突變耳聾基因的143例新生兒中，GJB2基因突變(235delC、299_300delAT、176_191del16位點突變)76例(占53.147%)，攜帶率為1.624%(76/4 679)，其中235delC純合突變2例、雜合突變59例、235delC雜合突變合并1555A>G同質(zhì)突變1例；299_300delAT純合突變2例、雜合突變9例；176_191del16雜合突變3例。

攜帶突變耳聾基因的143例新生兒中，SLC26A4基因突變(IVS7-2A>G、1174A>T、1229C>T、1975G>C、2027T>A、2168A>G、281C>T位點突變)48例(占33.566%)，攜帶率為1.026%(48/4 679)。其中IVS7-2A>G純合突變2例、雜合突變19例；1229C>T復(fù)合1975G>C雙重雜合突變1例、1229C>T雜合突變16例、1975G>C雜合突變3例；2168A>G雜合突變4例；1174A>T雜合突變、2027T>A雜合突變、281C>T雜合突變各1例。

攜帶突變耳聾基因的143例新生兒中，mtDNA 12SrRNA基因突變(1555A>G同質(zhì)性突變和異質(zhì)性突變)14例(占9.790%)，攜帶率為0.299%(14/4 679)。其中1555A>G同質(zhì)性突變12例、1555A>G異質(zhì)性突變2例。

攜帶突變耳聾基因的143例新生兒中，GJB3基因突變(538C>T、547G>A位點突變)5例(占3.497%)，攜帶率為0.107%(5/4 679)。其中538C>T雜合突變3例、547G>A雜合突變2例。

在接受四種耳聾基因突變檢測的4 679例受檢新生兒中，排在前五位的突變位點依次為235delC占1.325%(62/4 679)、IVS7-2A>G占0.449%(21/4 679)、1229C>T占0.363%(17/4 679)、1555A>G占0.321%(15/4 679)、299_300delAT占0.235%(11/4 679)。

3討論

本組4 679例受檢新生兒中有143例檢出四個耳聾基因的13種突變類型，突變耳聾基因攜帶率為3.056%，其中GJB2基因突變檢出率為53.147%、SLC26A4基因突變檢出率為33.566%、12SrRNA基因檢出率為9.790%、GJB3基因檢出率為3.497%，攜帶率排在前五位的突變位點依次為235delC、IVS7-2A>G、1229C>T 、1555A>G、299_300delAT。即GJB2基因中235delC的攜帶率最高，SLC26A4基因中IVS7-2A>G攜帶率最高，這與國內(nèi)外報道[5～8]的我國耳聾熱點基因是一致的。

在聽力障礙人群中，遺傳性耳聾占比例高達60%，耳聾致病基因攜帶率為3.6%[9]。 GJB2、GJB3、SLC26A4基因突變導(dǎo)致常染色體隱性遺傳性疾病(GJB3基因突變也可有常染色體顯性遺傳)。GJB2基因突變患者多數(shù)表現(xiàn)為出生即有的先天性耳聾，部分表現(xiàn)為嬰幼兒期或青少年始發(fā)的后天性耳聾，多為語前聾[10]。GJB3基因突變引起進行性高頻耳聾。 SLC26A4基因突變患者表現(xiàn)為前庭水管擴大，可引起中度、重度、極重度耳聾，多為語后聾。SLC26A4基因突變的新生兒在成長過程中應(yīng)嚴格防止頭部外傷、謹慎參加體育活動、防止做頭部倒立動作、預(yù)防感冒、遠離噪聲以避免耳道破裂造成遲發(fā)性耳聾[11]。12SrRNA基因突變母系遺傳線粒體氨基糖苷類抗生素毒性耳聾，可引起中重度、極重度耳聾及感音神經(jīng)性耳聾，多為語后聾。12SrRNA基因突變新生兒禁止使用耳毒性藥物[12]。本組受檢新生兒中，檢出GJB2基因299_300delAT、235delC純合突變各2例、235delC雜合突變復(fù)合1555A>G純合突變1例，檢出SLC26A4基因IVS7-2A>G純合突變2例、1229C>T雜合突變復(fù)合1975G>C雜合突變1例。對此種新生兒應(yīng)加強聽力篩查(DPOAE)及進一步的診斷性檢查(ABR、40Hz-AERP、ASSR等)，以及早進行干預(yù)。

在本研究中，檢測了常見的四個耳聾基因的20個突變位點，只檢出13種突變，有7種突變未檢測到，耳聾基因攜率約為3.056%，比其他地區(qū)的調(diào)查結(jié)果(3.6%)[9,13]略低。耳聾基因在遺傳性耳聾患者中具有較高的遺傳異質(zhì)性，不同地區(qū)和不同人群中耳聾基因的突變頻率、突變方式和熱點突變有很大差異，且不同地域、不同民族有其自身特點。廣西是我國少數(shù)民族最大的聚集地，也是少數(shù)民族種類和人口最多的地方，本研究在對南寧市新生兒突變耳聾基因的篩查中發(fā)現(xiàn)了其他省市未檢測到的致病突變位點，如SLC26A4基因中1229C>T突變的攜帶率僅次于IVS7-2A>G。在曾云等[14]的研究中，杭州、廈門地區(qū)的耳聾患者中未檢出1229C>T突變。說明各地耳聾基因突變類型有差異，應(yīng)擴大樣本量、制定更適合本地的篩查方案，找出本地95%以上耳聾基因突變位點。

目前我國常用的新生兒聽力篩查只是通過物理方法檢測聽力，沒有普遍開展對遺傳物質(zhì)(耳聾基因)進行檢測，藥物性聾或遲發(fā)性聾患兒就會被漏診，達不到早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期干預(yù)的目的。新生兒聽力和基因聯(lián)合篩查能提高耳聾檢出率[13]，是早期發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性耳聾的重要手段。

對在本研究中發(fā)現(xiàn)的8例耳聾基因純合突變和復(fù)合雜合突變新生兒，應(yīng)開展進一步的家系調(diào)查。對父母為耳聾基因突變攜帶者，應(yīng)依據(jù)遺傳模式進行后代遺傳性耳聾的風(fēng)險評估，并進行下一步的生育指導(dǎo)及產(chǎn)前診斷。對于GJB2、SLC26A4基因雜合突變攜帶者，如果日后與具有相同基因型的攜帶者婚配，生育聾兒的風(fēng)險為25%，應(yīng)進行遺傳風(fēng)險告知及婚育指導(dǎo)，從而降低遺傳性聾病的發(fā)生[15，16]。

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