氨基糖苷類(lèi)抗生素性耳聾基因治療的研究進(jìn)展

劉文杰，傅仲鷹

（吉林大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻咽喉－頭頸外科，吉林 長(zhǎng)春 130021）

自氨基糖苷類(lèi)抗生素 （aminogloside antibiotics，AmAn）問(wèn)世以來(lái)，氨基糖苷類(lèi)抗生素性耳聾 （AmAn induced deafness，AAID）一直困擾著患者，其治療局限于保護(hù)殘余聽(tīng)力、藥物 （非特異性藥物）、高壓氧、配戴助聽(tīng)器和人工耳蝸植入。AAID治療最根本的目的是使損傷的毛細(xì)胞再生并且恢復(fù)其功能。研究［1－2］顯示：基因治療是AAID治療的有效方法。同時(shí)有研究［3－4］顯示：AmAn對(duì)毛細(xì)胞的損傷不同于機(jī)械性損傷，并且影響AAID基因治療效果的因素錯(cuò)綜復(fù)雜。本研究就AAID基因治療的研究進(jìn)展進(jìn)行簡(jiǎn)要介紹。

1 AmAn和AAID

20世紀(jì)40年代，AmAn問(wèn)世并應(yīng)用于臨床。AmAn的殺菌機(jī)制主要是藥物結(jié)合在細(xì)菌的30S核糖體亞基阻礙氨基酸聚合從而干擾細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成導(dǎo)致細(xì)菌死亡［5］。AmAn因其特殊的抗菌作用和理化特性，目前在多重耐藥結(jié)核、肺囊性纖維性病變、嚴(yán)重綠膿桿菌和假單胞菌感染、腦膜炎及復(fù)雜性院內(nèi)獲得性急性尿路感染等［6－8］仍然廣泛應(yīng)用。

AmAn應(yīng)用于臨床的同時(shí)，其耳毒性和腎毒性也引起人們的關(guān)注，臨床應(yīng)用受到限制。AmAn的耳毒性表現(xiàn)在能夠使聽(tīng)覺(jué)毛細(xì)胞損傷，造成永久性的聽(tīng)力喪失。AmAn通過(guò)內(nèi)吞或陽(yáng)離子通道進(jìn)入毛細(xì)胞［6］。AmAn經(jīng)毛細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和溶酶體，使溶酶體釋放溶酶體酶或自身崩解，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。AmAn可以結(jié)合Fe3＋，在細(xì)胞質(zhì)中形成Fe2＋－AmAn復(fù)合物，這種氧化還原復(fù)合物能夠產(chǎn)生活性氧簇 （reactive oxygen species，ROS）［9］。線粒體受到 ROS破壞，釋放細(xì)胞色素C（cytochrome C），激活一系列含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（caspase）［10］，包括caspase－3、caspase－8、caspase－9，其中caspase－8對(duì)細(xì)胞膜的細(xì)胞死亡因子受體刺激起反應(yīng)［2］。caspase－9 激 活caspase－3，使ROS水平升高，然后激活絲氨酸蛋白酶（calpains）［11］。Calpain激活后可導(dǎo)致細(xì)胞骨架、膜蛋白、各種激酶和磷酸酶以及轉(zhuǎn)錄因子的徹底崩潰［4］。

2 AAID的基因治療

2.1 AAID與毛細(xì)胞再生 20世紀(jì)80年代初，Corwin等［12］和 Cruz等［12－13］發(fā)現(xiàn)：非哺乳動(dòng)物的毛細(xì)胞損傷后可再生。Bermingham 等［14］和 Brignull等［15］證實(shí)：成熟鳥(niǎo)類(lèi)毛細(xì)胞損傷后再生的毛細(xì)胞能夠恢復(fù)聽(tīng)覺(jué)和平衡功能。經(jīng)過(guò)反復(fù)探索，20世紀(jì)90年代初，F(xiàn)orge等［1－2］發(fā)現(xiàn)：豚鼠毛細(xì)胞受AmAn損傷后，耳蝸中能夠再生不成熟的毛細(xì)胞。

毛細(xì)胞再生的前體細(xì)胞來(lái)源多樣，根據(jù)研究［1－2，12－15，21］可以歸結(jié)為以下4個(gè)來(lái)源：①內(nèi)耳感覺(jué)上皮中的干細(xì)胞；②支持細(xì)胞通過(guò)有絲分裂或直接分化為毛細(xì)胞；③受損區(qū)旁的毛細(xì)胞自我修復(fù)；④非感覺(jué)區(qū)上皮細(xì)胞遷移至受損區(qū)并分化為毛細(xì)胞。

2.2 AAID與線粒體基因突變 一部分AAID患者在應(yīng)用小劑量或常規(guī)劑量的AmAn時(shí)出現(xiàn) “一針致聾”的現(xiàn)象，其聽(tīng)力呈雙耳對(duì)稱性、重度感音神經(jīng)性耳聾［16］。隨著研究的深入，證實(shí)了 “一針致聾”的現(xiàn)象與線粒體基因突變有密切關(guān)聯(lián)。

線粒體DNA （mitochondrial DNA，mtDNA）具有突變率高和母系遺傳的特點(diǎn)，其中1555A＞G和1494C＞T是常見(jiàn)的引起母系遺傳的非綜合征型聽(tīng)力損失的突變位點(diǎn)，與AAID發(fā)生有密切關(guān)聯(lián)。目前學(xué)者［17］認(rèn)為：線粒體位于12SrRNA高度保守的解碼區(qū)的同質(zhì)性的A1555G和C1494T發(fā)生突變，在12SrRNA的高度保守的A位形成新的1494C－G1555或1494U－A1555堿基對(duì)，使得12SrRNA在二級(jí)結(jié)構(gòu)上與細(xì)菌的16SrRNA的相應(yīng)區(qū)域的二級(jí)結(jié)構(gòu)更加相似。AmAn與其結(jié)合更加容易，因此，攜帶突變基因的人在接觸了該AmAn時(shí)會(huì)更加容易出現(xiàn)或者加重耳聾。趙芳等［16］通過(guò)對(duì)AmAn易感的遺傳性耳聾家系系譜分析進(jìn)一步證實(shí)：mtDNA A1555G點(diǎn)突變是AAID遺傳易感性的分子基礎(chǔ)。研究［18］顯示：mtDNAC1494T點(diǎn)突變的細(xì)胞株mtDNA編碼蛋白合成減少，ATP產(chǎn)物減少，并且線粒體中ROS水平升高。慶大霉素作用于mtDNAC1494T點(diǎn)突變的細(xì)胞株系，更多功能障礙的線粒體發(fā)生融合和自噬。

目前發(fā)現(xiàn)線粒體的突變位點(diǎn)除1555A＞G和1494C＞T外，還有961insC、1095T＞C、961T＞G、1291T＞C和827A＞G都與藥物性耳聾有關(guān)聯(lián)［19］。

2.3 AAID和Atoh1基因 Atoh1基因即Math1基因，是現(xiàn)在應(yīng)用最廣泛及研究最深入的轉(zhuǎn)錄因子，屬于堿性螺旋－環(huán)－螺旋轉(zhuǎn)錄因子 （basic helix－loop－h(huán)elix，bHLH）家族，在多種組織中廣泛表達(dá)。在內(nèi)耳的發(fā)育過(guò)程中，雖然Atoh1在前體細(xì)胞中處于低轉(zhuǎn)錄水平，但對(duì)哺乳動(dòng)物聽(tīng)覺(jué)毛細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育是必需的。

Pan等［20］采用Pax2－Cre去掉小鼠胚胎時(shí)期內(nèi)耳的Atoh1基因發(fā)現(xiàn)：出生后小鼠的柯蒂氏器會(huì)因缺乏Atoh1基因而致支持細(xì)胞數(shù)量減少、毛細(xì)胞未分化及輸入和輸出神經(jīng)纖維大部分缺失，證明Atoh1在內(nèi)耳發(fā)育及分化中的重要作用。近年來(lái)多項(xiàng)研究表明Atoh1能夠使AAID損傷的毛細(xì)胞再生，并且恢復(fù)內(nèi)耳的部分功能：Patrick等［21］采用攜帶Atoh1基因的腺病毒轉(zhuǎn)染全聾的成年豚鼠的柯蒂氏器，3周后發(fā)現(xiàn)與未經(jīng)治療一側(cè)比較毛細(xì)胞明顯增多，聽(tīng)覺(jué)功能部分恢復(fù)。該研究結(jié)果表明：Atoh1基因治療AAID可能通過(guò)殘余毛細(xì)胞自身修復(fù)和促進(jìn)支持細(xì)胞直接分化為毛細(xì)胞2種方式來(lái)增加毛細(xì)胞的數(shù)量。Lzumikawa等［22］過(guò)表達(dá)Atoh1基因治療AmAn致聾的豚鼠，8周后不僅毛細(xì)胞再生，并且聽(tīng)力水平也得到提高。

2.4 AAID 和其他相關(guān)基因 Atoh1基因［21－22］在支持細(xì)胞中過(guò)表達(dá)能夠促進(jìn)支持細(xì)胞分化為毛細(xì)胞，而支持細(xì)胞不僅僅只表達(dá) Atoh1基因，除 Atoh1外，Hes1、Hes5、MYC、Jagged2、Pax2和Sox2等都影響支持細(xì)胞的增殖和分化。

Hes1和Hes5基因負(fù)性調(diào)節(jié)Atoh1基因表達(dá)，從而阻礙支持細(xì)胞分化為毛細(xì)胞［23］。Du等［24］發(fā)現(xiàn)：出生3d的小鼠柯蒂氏器經(jīng)AmAn作用毛細(xì)胞缺失，運(yùn)用siRNA阻斷Hes1或Hes5表達(dá)，支持細(xì)胞能夠分化為毛細(xì)胞。MYC基因家族調(diào)節(jié)耳部發(fā)育，感覺(jué)細(xì)胞和非感覺(jué)細(xì)胞的合理分化，c－Myc基因能夠使支持細(xì)胞重新進(jìn)入有絲分裂［25］。Jagged2是Notch通路的配體，在聽(tīng)覺(jué)和前庭器官正常發(fā)育中起重要作用，去除Jagged2，支持細(xì)胞分化為毛細(xì)胞［26］。Pax2（Paired box 2）是Paired box基因家族的一員，在雞和鼠聽(tīng)覺(jué)及前庭感覺(jué)原基及內(nèi)淋巴管中表達(dá)，在內(nèi)耳發(fā)育中起重要作用，Pax2基因融合可導(dǎo)致聽(tīng)覺(jué)及前庭器官缺陷。Chen等［27］發(fā)現(xiàn)：體外培養(yǎng)的新生小鼠柯蒂氏器，在新霉素作用24h后毛細(xì)胞缺失，使用腺病毒共表達(dá)Pax2和Math1基因轉(zhuǎn)染柯蒂氏器上皮細(xì)胞，能夠促進(jìn)支持細(xì)胞在原先位置增殖、分化為毛細(xì)胞，并且獲得一定的功能。Sox2是一種高遷移率家族轉(zhuǎn)錄因子，在保持細(xì)胞多能性及再生能力起關(guān)鍵作用，在哺乳動(dòng)物聽(tīng)覺(jué)及前庭支持細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，可能與支持細(xì)胞細(xì)胞潛在的持續(xù)的自身更新及有絲分裂有關(guān)聯(lián)［28］。

2.5 AAID和Notch信號(hào)通路 Notch信號(hào)通路［23］在內(nèi)耳的發(fā)育中起關(guān)鍵作用，能夠決定內(nèi)耳感覺(jué)器官發(fā)育的部位，并且使毛細(xì)胞及其周?chē)闹С旨?xì)胞鑲嵌分布，通過(guò)接觸抑制控制兩者的增殖和分化。毛細(xì)胞表達(dá)Notch配體Delta1和Jagged2，與相鄰支持細(xì)胞的Notch受體相互作用，Notch蛋白通過(guò)3次剪切，釋放NICD，使轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Hes1和Hes5表達(dá)上調(diào)，抑制Atoh1基因表達(dá)，從而抑制毛細(xì)胞和支持細(xì)胞的增殖和分化。

Korrapati等［29］通過(guò)慶大霉素誘導(dǎo)新生小鼠耳蝸毛細(xì)胞缺失，支持細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，填補(bǔ)毛細(xì)胞死亡時(shí)殘留的裂隙，此時(shí)Notch信號(hào)通路表達(dá)活躍，以不依賴毛細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Hes1、Hey1、Hey2、HeyL和Sox2作為目標(biāo)和潛在的Notch效應(yīng)器。Notch信號(hào)通路抑制劑——γ－分泌酶抑制劑能夠使支持細(xì)胞分化為毛細(xì)胞樣細(xì)胞，該毛細(xì)胞樣細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)、分子學(xué)和基本的電生理學(xué)特性與成熟的毛細(xì)胞相似。Zhao等［30］運(yùn)用 DAPT——γ－分泌酶抑制劑，同時(shí)過(guò)表達(dá)Atoh1，培養(yǎng)新生大鼠柯蒂氏器，誘導(dǎo)大量新生毛細(xì)胞。

2.6 細(xì)胞周期調(diào)控 細(xì)胞周期蛋白D（cyclinD，cD）在細(xì)胞周期調(diào)控中起重要作用，能夠使哺乳動(dòng)物毛細(xì)胞的細(xì)胞周期處于靜止期［31］。cD1是影響支持細(xì)胞增殖的重要因素，支持細(xì)胞增殖能力下降與cD1表達(dá)減少有關(guān)聯(lián)，過(guò)表達(dá)cD1能夠刺激支持細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期而增殖。Loponen等［32］將攜帶cyclinD1的腺病毒導(dǎo)入小鼠成熟的支持細(xì)胞中，異常表達(dá)的cyclinD1能夠使支持細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期，細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶抑制因子 （cyclin dependent kinase inhibitors，Ckis）包括2個(gè)家族［33］：Ink4家族和 Cip／Kip 家族。Ink4家族包括p15Ink4a、p16Ink4b、p18Ink4c和 p19Ink4d，Cip／Kip 家族包括 p21Cip1、p27Kip1和p57Kip2多肽。p27kip1基因能夠使哺乳動(dòng)物毛細(xì)胞細(xì)胞周期處于靜止期，下調(diào)P27kip1能夠促進(jìn)支持細(xì)胞的增殖，并且少數(shù)支持細(xì)胞可分化為毛細(xì)胞［34］。

細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控因子還有視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（rentinoblastoma protein，pRb）。pRb是口袋蛋白，可抑制毛細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞分裂期。Yu等［35］運(yùn)用Prox1－CreER （T2）法去掉新生小鼠耳蝸支持細(xì)胞中的pRb，支持細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期，進(jìn)行有絲分裂。

3 展 望

臨床實(shí)際應(yīng)用中如必須要使用AmAn來(lái)治療一些難治性、復(fù)雜性的疾?。?－5］時(shí)，為了避免AmAn的耳毒性，除了要合理用藥，還要采取措施進(jìn)行預(yù)防。AAID的發(fā)生是環(huán)境和遺傳共同造成［18－19］。根據(jù)AAID的發(fā)生機(jī)制，可以通過(guò)消除細(xì)胞中產(chǎn)生的自由基、保護(hù)線粒體的功能及其完整性、抑制凋亡通路和基因檢測(cè)等方法預(yù)防AAID的發(fā)生。AmAn使毛細(xì)胞中ROS水平升高，金屬螯合劑可以減輕細(xì)胞中ROS對(duì)線粒體的損傷［7］。Ding等［9］研究顯示：亮抑酶肽能夠減輕慶大霉素對(duì)毛細(xì)胞的損傷。Tabuchi等［36］發(fā)現(xiàn)：X連鎖凋亡抑制蛋白能夠抑制caspase的活動(dòng)，減輕慶大霉素對(duì)毛細(xì)胞的損傷作用。線粒體基因存在1555A＞G、1494C＞T、961insC、1095T＞C、961T＞G、1291T＞C和827A＞G等點(diǎn)突變的人群可能對(duì)AmAn具有易感性，因此可根據(jù)家族中AAID的發(fā)生情況進(jìn)行基因檢測(cè)。存在mtDNA基因突變的人群，應(yīng)避免接觸AmAn［16－19］。

AAID的基因治療是一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的過(guò)程，基因表達(dá)、凋亡信號(hào)通、細(xì)胞周期蛋白和調(diào)節(jié)因子相互協(xié)調(diào)，相互制約，共同作用于毛細(xì)胞的再生及發(fā)育過(guò)程，任何一個(gè)環(huán)節(jié)均會(huì)影響治療的效果。Atoh1基因在毛細(xì)胞再生過(guò)程中起關(guān)鍵作用，其轉(zhuǎn)錄受Notch信號(hào)通路的抑制［23］。研究［30］表明：?jiǎn)渭冞^(guò)表達(dá)Atoh1并不能夠使得大多數(shù)支持細(xì)胞分化為毛細(xì)胞，同時(shí)抑制Notch信號(hào)通路能夠促進(jìn)新生小鼠毛細(xì)胞樣細(xì)胞的再生。DAPT和Atoh1基因過(guò)表達(dá)作用的部位不完全相同，DAPT在柯蒂氏器頂回誘導(dǎo)更多的毛細(xì)胞，Atoh1基因過(guò)表達(dá)使中回產(chǎn)生更多的毛細(xì)胞。細(xì)胞周期蛋白D與Ckis在細(xì)胞分化、發(fā)育、轉(zhuǎn)移和調(diào)控細(xì)胞周期中共同起關(guān)鍵作用。在成熟小鼠支持細(xì)胞內(nèi)過(guò)表達(dá)cyclinD1，僅有少數(shù)支持細(xì)胞能夠進(jìn)入細(xì)胞周期，支持細(xì)胞中p27Kip1表達(dá)減弱，可能與cyclinD1共同促進(jìn)其重新進(jìn)入細(xì)胞周期［32］。研究［31］顯示：19Ink4d／p21Cip1雙基因敲除新生小鼠的前庭毛細(xì)胞體外培養(yǎng)后，cyclinD1異常表達(dá)，毛細(xì)胞重新進(jìn)入S期。Rb蛋白去活性并過(guò)表達(dá)atoh1基因促進(jìn)新生小鼠毛細(xì)胞再生［35］。

諸多學(xué)者研究AAID基因治療的方法為本文作者進(jìn)一步的探索提供了思路。在AmAn損傷毛細(xì)胞研究中，基因重新表達(dá)使毛細(xì)胞再生至功能恢復(fù)的每個(gè)環(huán)節(jié)中的影響因素都需要考慮，以期能夠發(fā)現(xiàn)一種效果最好的治療方式。但是影響基因治療的很多因素仍然未知，如AAID基因治療的時(shí)間窗，目的基因能否正確安全地導(dǎo)入靶細(xì)胞，能否在正確部位表達(dá)所需蛋白，能否形成有功能的毛細(xì)胞，神經(jīng)纖維與新生毛細(xì)胞能否準(zhǔn)確構(gòu)建傳入傳出系統(tǒng)，聽(tīng)覺(jué)功能能否恢復(fù)至正常水平等。因此，如何能夠安全有效地達(dá)到AAID基因治療的目的是一個(gè)漫長(zhǎng)的探索過(guò)程，還需要進(jìn)一步研究。

［1］Forge A，Li L，Corwin JT，et al.Ultrastructural evidence for hair cell regeneration in the mammalian inner ear ［J］.Science，1993，259 （5101）：1616－1619.

［2］Forge A，Li L，Nevill G.Hair cell recovery in the vestibular sensory epithelia of mature guinea pigs［J］.J Comp Neurol，1998，397 （1）：69－88.

［3］Huth ME， Ricci AJ， Cheng AG. Mechanisms of aminoglycoside ototoxicity and targets of hair cell protection［J］.Int J Otolaryngol，2011，2011：937861.

［4］孫建和，楊仕明，劉 軍，等.噪聲引起的耳蝸顯微和超微結(jié)構(gòu)損傷 ［J］.中華耳科學(xué)雜志，2011，9 （3）：272－275.

［5］丁大連，Salvi R.氨基糖苷類(lèi)抗生素耳毒性研究 ［J］.中華耳科學(xué)雜志，2007，5 （2）：125－131.

［6］Twiss J，Byrnes C，Johnson R，et al.Nebulised gentamicinsuitable for childhood bronchiectasis［J］.Int J Pharm，2005，295：113－119.

［7］Karasawa T，Wang Q，F(xiàn)u Y，et al.TRPV4enhances cellular uptake of aminoglycoside antibiotics［J］.J Cell Sci，2008，121 （17）：2871－2879.

［8］Schacht J， Talaska AE， Rybak LP. Cisplatin and aminoglycoside antibiotics：hearing loss and its prevention［J］.Anat Rec （Hoboken），2012，295 （11）：1837－1850.

［9］Genestra M.Oxyl radicals，redox－sensitive signaling cascades and antioxidants ［J］.Cell Signal，2007，19 （9）：1807－1819.

［10］Lee JE，Nakagawa T，Kim TS，et al.Signaling pathway for apoptosis of vestibular hair cells of mice due to aminoglycosides［J］. Acta Oto－Laryngol， 2004，551 （Supp1）：69－74.

［11］Ding D，Stracher A，Salvi RJ.Leupeptin protects cochlear and vestibular hair cells from gentamicin ototoxicity［J］.Hear Res，2002，164 （1／2）：115－126.

［12］Corwin JT.Postembryonic production and aging in inner ear hair cells in sharks［J］.J Comp Neurol，1981，201 （4）：541－553.

［13］Cruz RM，Lambert PR，Rubel EW.Light microscopic evidence of hair cell regeneration after gentamicin toxicity in chick cochlea［J］.Arch Otolaryngol Head Neck Surg，1987，113 （10）：1058－1062.

［14］Bermingham－McDonogh O， Rubel EW. Hair cell regeneration：winging our way towards a sound future［J］.Curr Opin Neurobiol，2003，13 （1）：119－126.

［15］Brignull HR，Raible DW，Stone JS.Feathers and fins：nonmammalian models for hair cell regeneration［J］.Brain Res，2009，1277：12－23.

［16］趙 芳，張芩娜.一母系遺傳氨基糖苷類(lèi)抗生素致聾家系線粒體DNA A1555G突變檢測(cè) ［J］.中華耳科學(xué)雜志，2010，8 （1）：40－45.

［17］Guan MX.Mitochondrial 12srRNA mutations associated with aminoglycoside ototoxicity ［J］. Mitochondrion，2011，11 （2）：237－245.

［18］Yu J，Zheng J，ZhaoX.Aminoglycoside stress together with the 12SrRNA 1494C＞T mutation leads to mitophagy［J］.PLoS One，2014，9 （12）：e114650.

［19］曾 云，馮大飛，張 磊.線粒體 MT－R N R 1基因突變與藥物性聾 ［J］.聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志，2013，21 （4）：428－430.

［20］Pan N，Jahan I，Kersigo J，et al.Conditional deletion of Atoh1using Pax2－Cre results in viable mice without differentiated cochlear hair cells that have lost most of the organ of Corti［J］.Hear Res，2010，275 （1／2）：66－80.

［21］Patrick J， Atkinson PJ， Wise AK，et al. Hair cell regeneration after ATOH1gene therapy in the cochlea of profoundly deaf adult guinea pigs ［J］.PLoS One，2014，9 （7）：e102077.

［22］Izumikawa M，Minoda R，Kawamoto K，et al.Auditory hair cell replacement and hearing improvement by Atoh1gene therapy in deaf mammals［J］.Nat Med，2005，11 （3）：271－276.

［23］Slowik AD，Bermingham－McDonogh O.Notch signaling in mammalian hair cell regeneration ［J］.Trends Dev Biol，2013，7：73－89.

［24］Du X，Li W，Gao X，et al.Regeneration of mammalian cochlear and vestibular hair cells through Hes1／Hes5 modulation with siRNA［J］.Hear Res，2013，304：91－110.

［25］Burns JC，Yoo JJ，Atala A，et al.MYC gene delivery to adult mouse utricle stimulate proliferation of postmitotic supporting cells in vitro ［J］.PLoS One，2012，7 （10）：e48704.

［26］Op de Beeck K，Schacht J，Van Camp G.Apoptosis in acquired and genetic hearing impairment：The programmeddeath of the hair cell［J］.Hear Res，2011，281 （1／2）：18－27.

［27］Chen Y，Yu HQ，Zhang YP，et al.Cotransfection of Pax2 and Math1promote in situ cochlear hair cell regeneration after neomycin insult［J］.Sci Rep，2013，3：2996.

［28］Millimaki BB，Sweet EM，Riley BB.Sox2is required for maintenance and regeneration，but not initial development，of hair cells in the zebrafish inner ear ［J］.Dev Biol，2010，338 （2）：262－269.

［29］Korrapati S，Roux I，Glowatzki E，et al.Notch signaling limits supporting cell plasticity in the hair cell－damaged early postnatal murine cochlea ［J］.PLoS One，2013，8 （8）：e73276.

［30］Zhao LD，Guo WW，Lin C，et al.Effects of DAPT and Atoh1overexpression on hair cell production and hair bundle orientation in cultured Organ of Corti from neonatal rats［J］.PLoS One，2011，6 （10）：e23729.

［31］Laine H，Sulg M，Kirjavainen A，et al.Cell cycle regulation in the inner ear sensory epithelia：role of cyclin D1and cyclindependent kinase inhibitors［J］.Dev Biol，2010，337 （1）：134－146.

［32］Loponen H，Ylikoski J，Albrecht JH，et al.Restrictions in cell cycle progression of adult vestibular supporting cells in response to ectopic cyclin D1expression ［J］.PLoS One，2011，6 （11）：e27360.

［33］Besson A，Dowdy SF，Roberts JM.CDK inhibitors：cell cycle regulators and beyond［J］.Dev Cell，2008，14 （2）：159－169.

［34］Walters BJ，Liu Z，Crabtree M，et al.Auditory hair cellspecific deletion of p27Kip1in postnatal mice promotes cellautonomous generation of new hair cells and normal hearing［J］.J Neurosci，2014，34 （47）：15751－15763.

［35］Yu Y，Weber T，Yamashita T，et al.In vivo proliferation of postmitotic cochlear supporting cells by acute ablation of the retinoblastoma protein in neonatal mice ［J］.J Neurosci，2010，30 （17）：5927－5936.

［36］Tabuchi K，Pak K，Chavez E，et al.Role of inhibitor of apoptosis protein in gentamicin－induced cochlear hair cell damage［J］.Neuroscience，2007，149 （1）：213－222.