王召波，董靜

(青島大學(xué)附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，山東 青島 266555)

?

自制內(nèi)眥采血器用于小鼠采血效果分析

王召波，董靜

(青島大學(xué)附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，山東 青島 266555)

目的 探討自制內(nèi)眥采血器用于小鼠內(nèi)眥取血的效果。方法 將60只昆明小鼠隨機分為實驗組和對照組各30只，分別采用自制采血器及普通毛細(xì)管行內(nèi)眥定量取血5次。比較兩組采血成功率、采血相關(guān)損傷率和采血相關(guān)死亡率。結(jié)果 兩組均未發(fā)生采血相關(guān)死亡；實驗組采血成功率明顯高于對照組(χ2=6.522，P<0.05)；兩組采血相關(guān)損傷率差異無顯著性(P>0.05)。結(jié)論 自制內(nèi)眥采血器制作容易，采血成功率高，操作簡便，值得在動物實驗中推廣應(yīng)用。

小鼠；內(nèi)眥；采血；動物實驗

毛細(xì)管內(nèi)眥采血是小鼠及大鼠動物實驗中經(jīng)常會用到的操作，需要一定的技巧。特別是對于體型較小的小鼠，如果操作不當(dāng)可直接造成小鼠眼球的不可逆性損傷,容易繼發(fā)感染，嚴(yán)重時甚至造成小鼠死亡[1]。并且該操作一般需要兩個人完成，在接取血樣時，經(jīng)常會因小鼠的掙扎及操作者配合欠佳造成血液標(biāo)本的浪費及污染[2]。在小鼠采血的實踐操作中，我們自制一種簡易內(nèi)眥采血器，經(jīng)實際操作及對比分析，效果良好?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1內(nèi)眥采血器的制作

取200 μL規(guī)格的吸頭1支，視具體情況剪去前端長0.3～0.4 cm部分。取直徑約1 mm的毛細(xì)玻璃管1支，沿吸頭上端插入并從下端拔出至吸頭與玻璃管套疊部分長0.3～0.5 mm，經(jīng)乙醇燈適當(dāng)燒灼，兩部分可緊密連接。此過程中注意調(diào)整玻璃管與吸頭成直線，勿使成角，以免影響使用。使用小砂輪在適當(dāng)長度切割，掰斷去除冗長部分毛細(xì)管，裸露毛細(xì)管長度以2.0～2.5 cm為佳。為避免污染，以上過程在超凈工作臺上完成。制作好的采血器置入吸頭盒，經(jīng)消毒備用。

1.2實驗動物分組及操作過程

雄性昆明小鼠60只，8周齡，體質(zhì)量(21.0±2.0)g，由青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，均將其飼養(yǎng)于青島大學(xué)附屬醫(yī)院動物中心無特定病原體(SPF)屏障環(huán)境中。將小鼠隨機分為實驗組及對照組各30只。兩組小鼠均于8周齡開始，每5 d行內(nèi)眥采血1次，共計5次。實驗組采用自制采血器取血：手法固定小鼠，將其按置于有一定角度的斜面上(手應(yīng)有一定力度，使其眼睛盡量突出)，手執(zhí)采血器，將毛細(xì)管探入肝素瓶中蘸取少許肝素溶液以防止凝血，后以毛細(xì)管端刺入小鼠內(nèi)眥，輕輕轉(zhuǎn)動采血器使毛細(xì)管破壞小鼠眼部血管叢，血液會自動隨毛細(xì)管流入吸頭中，待獲取滿意血量，拔出采血器，以干棉球按壓內(nèi)眥止血，快速將毛細(xì)管端置入EP管中。該過程中在采血器置入EP管前禁止直立移動，以免血樣流出。待血樣完全流入EP管后，采血器可按照銳器處置方式丟棄。對照組取血按照孫奎等[1]所述眼眶取血方法進(jìn)行。

1.3評價指標(biāo)及判斷標(biāo)準(zhǔn)

采血成功：單次取血量>0.1 mL且無溶血，經(jīng)離心獲得清亮血清視為采血成功。采血相關(guān)損傷：因取血所致的小鼠失明、眶周感染視為發(fā)生采血相關(guān)損傷。采血相關(guān)死亡：因采血所致的小鼠死亡。

2 結(jié) 果

實驗組累計發(fā)生采血相關(guān)損傷4只，對照組發(fā)生采血相關(guān)損傷7只，兩組采血相關(guān)損傷率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。實驗組累計采血成功144只次，對照組采血成功132只次，兩組采血成功率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.522，P<0.05)。兩組均未發(fā)生采血相關(guān)死亡。

3 討 論

小鼠血液標(biāo)本的獲取一般有如下方法：斷尾采血、斷頭采血[3]、摘除眼球采血、內(nèi)眥采血[4]。少量采血可行斷尾采血；大量采血且不需小鼠存活可斷頭采血；摘除眼球采血也是取得較多血量的常用方法，但是該方法會對小鼠長期存活產(chǎn)生不利影響；內(nèi)眥采血是比較折中及人道的采血方法，在幾乎不影響小鼠視力的前提下，可取得較多的血量，只要操作手法得當(dāng)，幾乎不影響小鼠的存活。本文結(jié)果顯示，采用自制采血器采血成功率明顯高于對照組，雖然采血相關(guān)損傷率低于對照組，但差異無顯著性。在實際操作中，采用內(nèi)眥采血器采血有如下優(yōu)點：①內(nèi)眥采血器制作簡單，取材方便；②可單人完成采血；③可最大限度地避免標(biāo)本污染及浪費，標(biāo)本質(zhì)量好；④采血量直觀易于掌握；⑤可最大限度地減少對小鼠的傷害。

該采血器稍加改造，亦適用于大鼠采血，僅需將200 μL吸頭更換為1 000 μL吸頭，便可滿足大鼠采血量較多的要求。該采血器制作過程亦可繼續(xù)改進(jìn)，如利用無毒、無污染膠水代替乙醇燈燒灼來制作將是另一種可行途徑，有待進(jìn)行相關(guān)實驗研究。

[1] 孫奎,梅丹,姜華,等. 實驗鼠采血方法及特點[J]. 第四軍醫(yī)大學(xué)吉林軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2003,25(1):31-32.

[2] 宗阿南,鄒悅,任萍萍. 實驗動物質(zhì)量檢測中不同采血方法的比較[J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2008,18(2):74-75.

[3] 閆長虹,徐珞. Ghrelin對食源性肥胖小鼠血液中血管生成標(biāo)志物影響[J]. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2014,50(1):7-9.

[4] 李曉晶,劉瑾. 實驗動物采血方式優(yōu)缺點比較[J]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2009,11(11):217-218.

(本文編輯 馬偉平)

APPLICATION OF SELF-MADE INNER-CANTHUS HEMOSTIX FOR MOUSE BLOOD COLLECTION

WANGZhaobo,DONGJing

(Department of Rheumatology and Clinical Immunology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College,Qingdao 266555, China)

ObjectiveTo apply self-made inner-canthus hemostix for blood collection in mice.MethodsSixty Kunming mice were equally randomized to experimental group and control group using the self-made inner-canthus hemostix and glass capillary for blood sampling, respectively. Inner-canthus blood collection was done for five times. Success rate of blood collection, its related injury rate and mortality were compared between the two groups.ResultsNo blood-collection-related death was found in both groups. The success rate of blood collection was obviously higher in the experimental group than the control (χ2=6.522,P<0.05). There was no significant difference in blood-collection-related injury between the two groups (P>0.05).ConclusionThe self-made inner-canthus hemostix is easy to make, with high success rate in blood collection and simple to manipulate, which deserves to be widely applied in animal experiment.

mice; inner canthus; blood collection; animal experiment

2014-05-23;

2014-09-25

青島市科技計劃基礎(chǔ)研究項目 (11-2-4-2-(13)-jch)；山東省高等學(xué)?？萍加媱濏椖?J10LF78)

王召波(1983-)，男，在讀碩士研究生。

董靜(1972-)，女，博士，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師。

R33-33

A

1008-0341(2015)01-0082-02