賈云云，羅士香

(淮安市食品藥品檢驗所，江蘇 淮安 223300)

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HPLC法同時測定清肺解毒片中小檗堿、黃芩苷含量

賈云云，羅士香

(淮安市食品藥品檢驗所，江蘇 淮安 223300)

目的：采用HPLC法同時測定清肺解毒片中的小檗堿和黃芩苷含量。方法：采用HPLC法，色譜柱為HederaODS-2柱(4.6mm×200mm，5μm)，流動相為A(0.1%磷酸)∶B(乙腈)=50∶50，柱溫為30℃；檢測波長為280nm。結(jié)果：小檗堿和黃芩苷分別在0.0251～0.251μg和0.0365～0.365μg范圍內(nèi)與峰面積積分呈良好的線性關(guān)系，r分別為0.999和0.998；小檗堿平均加樣回收率為97.4%，RSD為1.95%(n=6)，黃芩苷為99.6%，RSD為0.94%(n=6)。結(jié)論：該方法結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于清肺解毒片的質(zhì)量控制。

清肺解毒片；高效液相色譜法；小檗堿；黃芩苷

清肺解毒片由臨床經(jīng)驗方清肺解毒湯經(jīng)劑型改良而來，全方由黃芩、黃連、桑白皮、白芷、甘草等八味中藥組成，具有清肺平喘、瀉火解毒的功效，臨床主治麻疹后期、熱毒入肺。黃芩苷為黃芩的主要有效成分，小檗堿為黃連的主要有效成分。本研究參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-3]，采用高效液相色譜法同時測定方中小檗堿、黃芩苷的含量，方法簡單可靠，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于清肺解毒片的質(zhì)量控制。

1 儀器與試劑

Waters2695高效液相色譜儀，Waters-2996紫外檢測器，Empower色譜工作站；色譜柱為HederaODS-2柱(4.6mm×200mm，5μm)；AG135型電子天平(瑞士梅特勒)；FA1104N電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；AS20500A超聲清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。

清肺解毒片為實驗室自制(批號：20130715、20130926、20140105)；鹽酸小檗堿(批號：0713-9906，中國食品藥品檢定研究院)；黃芩苷(批號：110715-200413，中國食品藥品檢定研究院)；甲醇、乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HederaODS-2柱(4.6mm×200mm，5μm)，流動相：A(0.1%磷酸)∶B(乙腈)=50∶50，柱溫：30℃；流速：1mL/min；檢測波長：280nm。進(jìn)樣量：20μL。

2.2 混合對照品溶液制備

精密稱取小檗堿對照品2.51mg、黃芩苷對照品3.65mg，分別置于10mL容量瓶中，加50%乙醇溶解，并稀釋至刻度。精密吸取上述兩種對照品溶液各1mL至10mL容量瓶中，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL中含有小檗堿25.1μg、黃芩苷36.5μg)。

2.3 供試品溶液制備

取清肺解毒片，研細(xì)，取細(xì)粉1g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25mL，稱定重量，超聲30min，放冷，再次稱重，用50%乙醇補足重量，取上清液過0.22μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性溶液制備

按照制備工藝分別制備不含黃連、黃芩的陰性樣品，按照“2.3”項下處理陰性樣品，即得。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

精密吸取上述混合對照品溶液、供試品溶液和陰性溶液各10μL，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定。供試品溶液色譜圖中，呈現(xiàn)與對照品保留時間相同的峰，并且達(dá)到基線分離；陰性溶液在對應(yīng)的保留時間處無吸收峰，表明其他幾味藥對小檗堿、黃芩苷的測定無干擾，見圖1。

圖1 對照品、供試品和陰性樣品HPLC

2.6 線性關(guān)系考察

分別精密吸取上述混合對照品溶液1、2、4、6、8、10μL 進(jìn)樣，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定。以各對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，相應(yīng)的對照品峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行回歸處理得回歸方程Y小檗堿=29 561X+23 781(r=0.999)，Y黃芩苷=29 813X+13 902(r=0.998)。結(jié)果表明小檗堿在0.025 1～0.251μg、黃芩苷在0.036 5～0.365μg與峰面積積分呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗

精密吸取上述混合對照品溶液適量，重復(fù)進(jìn)樣測定6次，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，進(jìn)樣量為10μL。小檗堿、黃芩苷峰面積RSD值分別為0.91%、1.93%，表明儀器和方法的精密度良好，符合測定要求。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取上述供試品溶液分別于配制后0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣，測定小檗堿、黃芩苷的峰面積，進(jìn)樣量為10μL，小檗堿、黃芩苷峰面積RSD值分別為2.01%、1.32%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定，符合測定要求。

2.9 重復(fù)性試驗

取同一批次清肺解毒片(批號：20130715)，按照供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，共6份，按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，進(jìn)樣量為10μL，制劑中小檗堿、黃芩苷含量RSD值分別為1.98%、2.87%，表明小檗堿、黃芩苷在該測定條件下重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗

取同一批樣品(批號：20130715)1g ，共6份，精密稱定(小檗堿含量為59.1μg · g-1，黃芩苷含量為203.9μg · g-1)，精密加入一定量小檗堿對照品溶液(25.1μg · mL-1)、黃芩苷對照品溶液(36.5μg · mL-1)，按照“2.3”項下供試品溶液的制備方法制備，測定并計算加樣回收率。結(jié)果顯示，小檗堿的平均加樣回收率為97.4%，RSD為1.95%，黃芩苷的平均加樣回收率為99.6%，RSD為0.94%，均符合測定要求，結(jié)果見表1。

表1 清肺解毒片中小檗堿和黃芩苷加樣回收率試驗 (n=6)

2.11 樣品測定

取3批清肺解毒片樣品，按照供試品溶液制備方法制得供試品溶液，并按照“2.1”項下色譜條件測定小檗堿和黃芩苷含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中小檗堿和黃芩苷含量測定 (μg·g-1)

3 討論

小檗堿在263、345、421nm處均有較強吸收，黃芩苷在276、315nm處有較強吸收，在280nm檢測波長處有較好的色譜峰形且有效避免了其他組分的干擾，使結(jié)果更加準(zhǔn)確。

文獻(xiàn)報道中，小檗堿和黃芩苷的同步含量測定流動相多選用緩沖鹽或離子對體系[4-6]，離子對試劑對色譜柱的填料具有不可逆的改性作用，緩沖鹽體系容易堵塞色譜柱并對儀器泵系統(tǒng)具有較大的磨損作用，因此均不宜采用。本實驗采用的流動相為乙腈、磷酸水溶液，系統(tǒng)分離清肺解毒片中的小檗堿和黃芩苷，方法簡單易操作，避免了離子對試劑和緩沖鹽對色譜柱產(chǎn)生的不良作用，且分離效果良好。

本實驗建立的高效液相含量測定方法可在同一色譜條件下同時測定清肺解毒片中小檗堿和黃芩苷兩種指標(biāo)性成分的含量，方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于清肺解毒片的質(zhì)量控制，同時可為中藥復(fù)方制劑定性定量方法的確定提供一定參考。

[1] 戚秋鵬,王中彥,劉天富.HPLC法測定萬氏牛黃清心微丸中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2003,20(5):352-354.

[2] 李妍,宋舒暖,李留法,等.高效液相色譜法同時測定清新靈微丸中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,20(11):2773-2774.

[3] 王西彬,陳暢,何希榮.RP-HPLC法測定三黃片中黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2012,18(13):128-130.

[4] 田書霞,蔣曄.RP-HPLC同時測定三黃片中4種有效成分的含量[J].中國藥學(xué)雜志,2006,41(3):220.

[5] 馮有龍,余伯陽,董小平.HPLC法高效液相色譜法同時測定三黃片中的蒽醌類、黃酮類及生物堿類化合物[J].藥學(xué)學(xué)報,2006,41(3):285.

[6] 張艷菊,王曉玲.不同廠家三黃片中黃芩苷、鹽酸小檗堿的溶出度[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2010,29(6):62.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Determination of Berberine and Baicalin in Qingfeijiedu Tablets by HPLC

Jia Yunyun，Luo Shixiang

(Huaian Institute for Food and Drug Control，Huaian 223300，China)

Objective:To establish a method for determining berberine and baicalin in Qingfeijiedu tablets by HPLC.Methods:A hederaODS-2 column(4.6mm×200mm,5μm) in an oven at 30℃ was used, with a mobile phase consisting of 0.1mol·L-1phosphate(A)-acetonitrile(50∶50). Detective wavelength was 280nm.Results:The berberine and baicalin had good linear relationship in the ranges of 0.025 1～0.251μg(r=0.999) and 0.036 5～0.365μg(r=0.998). The average recoveries were 97.4% and 99.6%, with RSD 1.95%(n=6) and 0.94%(n=6), respectively.Conclusion:The method was accurate and reproducible, and can be used for the quality control of Qingfeijiedu tablets.

Qingfeijiedu Tablets; HPLC;Berberine;Baicalin

2015-01-07

賈云云(1988-)，女，江蘇省淮安市食品藥品檢驗所藥師，研究方向為藥品不良反應(yīng)監(jiān)測。

R284.1

A

1673-2197(2015)12-0019-03

10.11954/ytctyy.201512008