王麗華 龐 棟 李巧玲 劉 霞

·實驗研究·

厄貝沙坦對高脂飲食兔肝臟低密度脂蛋白受體活性影響

王麗華 龐 棟 李巧玲 劉 霞

目的 通過研究厄貝沙坦對高脂血癥兔肝臟低密度脂蛋白受體(LDLR)活性的影響, 來探討其對脂代謝異常的影響。方法 30只長耳兔隨機分為模型組、實驗組、對照組, 各10只。實驗開始前、實驗?zāi)┏檠? 檢測各組血脂水平；實驗?zāi)└闻K多點取材, 依據(jù)Fromowitz陽性細胞半定量分級法判斷肝組織LDLR表達。結(jié)果 模型組實驗后TC、LDL-C、TG明顯升高, 與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。實驗組兔治療后血清總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)明顯升高,與對照組比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；實驗組兔治療后肝臟LDLR表達的陽性率為100%, 強陽性率為40%, 較模型組增加, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 厄貝沙坦雖然不能降低血漿低密度脂蛋白(LDL)水平, 但可以上調(diào)兔肝臟LDLR, 從而發(fā)揮調(diào)節(jié)脂代謝的作用。

高脂血癥；肝病理學(xué)；免疫組織化學(xué)；厄貝沙坦；低密度脂蛋白受體

高血壓、高脂血癥是冠心病的主要危險因素, 既往研究顯示, 高脂血癥特別是低密度脂蛋白膽固醇水平與冠心病發(fā)生發(fā)展呈顯著正相關(guān)［1,2］。厄貝沙坦是常用的血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑, 本研究通過研究厄貝沙坦對高脂血癥兔肝臟LDLR活性的影響, 來探討其對脂代謝異常的影響。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 2.0～2.5 kg日本長耳兔, 均為雄性, 購自山東大學(xué)實驗動物中心。

1.1.2 試劑與儀器 血脂檢測所用試劑盒為四川省邁克科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)；血脂測定所用儀器為日立生化儀(美國羅氏)；LDLR主要試劑：一抗為兔抗LDLR(即用型SABC免疫組化)試劑盒, 二抗為生物素化山羊抗兔IgG(DAB顯色)試劑盒, 為武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 飼料 普通飼料；高膽固醇飼料。

1.2 方法

1.2.1 動物分組與喂養(yǎng) 將日本長耳兔按體重隨機分為模型組、實驗組、對照組, 每組10只。模型組給予高膽固醇飼料12周, 200 g/d, 后連給予普通飼料12周, 120～140 g/d,共24周。實驗組喂養(yǎng)飼料與模型組相同, 同時按照75 mg/d給予厄貝沙坦灌胃, 共24周。對照組給予普通飼料24周, 200 g/d。

1.2.2 血脂測定 實驗開始前、實驗?zāi)┘吹?4周末, 空腹12 h以上, 耳緣靜脈抽血, 檢測各組血清血脂濃度, 包括：TC、LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、TG。

1.2.3 肝組織LDLR表達 實驗?zāi)? 將動物處死, 肝臟多點取材, 石蠟切片脫蠟, 滴加3%H2O2后, 室溫孵育10 min。磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗, 3 min/次, 沖洗3次后, 加正常山羊血清以封閉, 室溫下孵育30 min, 去除血清后加一抗, 4℃條件下過夜。PBS沖洗3 min/次, 沖洗3次后, 滴加二抗, 37℃孵育30 min。PBS沖洗3 min/次, 沖洗3次后, 加入顯色劑顯色,蘇木素復(fù)染后封片。顯微鏡下觀察肝組織LDLR表達, 結(jié)果判斷依據(jù)Fromowitz陽性細胞半定量分級法［3］。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( -x±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料用率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兔血漿脂質(zhì)水平變化 對照組兔實驗前、后血脂水平統(tǒng)計學(xué)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。模型組兔實驗開始血脂與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；實驗后TC、LDL-C、TG明顯升高, 與對照組比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01), HDL-C與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。實驗組兔實驗開始時血脂與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；治療后TC、LDL-C、TG明顯升高, 與對照組比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組比較, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 兔血漿脂質(zhì)水平檢測指標(biāo)( x-±s, mmol/L)

2.2 肝組織LDLR的表達 于光鏡下見藍色細胞核及胞漿內(nèi)分布不均勻的棕色顆粒, 對照組兔棕色顆粒沉著較少, 模型組兔棕色顆粒沉著增多, 實驗組兔棕色顆粒沉著增多, 與模型組類似。對照組肝LDLR表達陽性率為100%, 強陽性率為20%；模型組肝臟低密度脂蛋白受體表達表達的陽性率為70%, 強陽性率為0, 強陽性率與對照組比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；實驗組肝臟低密度脂蛋白受體表達的陽性率為100%, 強陽性率為40%, 與模型組比較, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

人血液中70%的膽固醇由低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白攜帶。LDL是機體轉(zhuǎn)運內(nèi)源性膽固醇到全身組織的主要形式。LDL代謝的最主要途徑是受體介導(dǎo)途徑［3］, 正常情況下, LDLR途徑降解了大部分LDL, 巨噬細胞等非受體介導(dǎo)途徑清除少部分LDL。因此LDLR對于血漿LDL維持相對恒定的水平作用顯著。全身組織細胞均分布有LDLR, 而大約全身LDLR總數(shù)的3/4為肝細胞LDLR。既往研究顯示, 飲食中的膽固醇可以下調(diào)肝臟LDLRmRNA, 從而導(dǎo)致血LDL的升高［4］。丹參、肝細胞生長因子及雌激素等能提升高脂血癥大鼠肝臟LDLR的mRNA水平［5］, 從而使LDLR的抑制狀態(tài)解除, 使LDLR的表達增加, 從而使血中的LDL得以降低, 起到調(diào)控血脂水平的作用。厄貝沙坦是屬于血管緊張素受體拮抗劑的抗高血壓藥物。曾有研究提示厄貝沙坦在降低血壓的同時可能具有調(diào)節(jié)血脂代謝的作用, 分析其機制為：①姚琰等［6］研究發(fā)現(xiàn)厄貝沙坦可以改善高血壓患者的胰島素抵抗, 提高對胰島素的敏感性, 達到調(diào)節(jié)血脂的目的；②厄貝沙坦可以抑制血管平滑肌細胞(SMC)的遷移、增殖［7］,從而減少動脈壁膽固醇的合成［8］。此外, 厄貝沙坦阻滯血管緊張素胎Ⅱ受體后, 可有效阻斷血管收縮, 并可改善紅細胞膜的結(jié)構(gòu)缺陷, 降低了血液粘度。本實驗顯示, 高膽固醇飲食可以使兔肝臟低密度脂蛋白膽固醇受體的表達明顯下降,這有可能是高膽固醇血癥的代償性反應(yīng), 但這種代償反應(yīng)有限, 同時高膽固醇飲食又可以使血中LDL-C升高；厄貝沙坦雖然不能降低血漿LDL水平, 但可以上調(diào)兔肝臟LDLR, 從而發(fā)揮調(diào)節(jié)脂代謝的作用。

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［2］ 胡定波, 李滎娟, 湯日寧, 等.羅格列酮和厄貝沙坦對高膽固醇血癥大鼠血脂及心肌脂聯(lián)素的干預(yù)作用.中國新藥與臨床雜志, 2009(2):115-119.

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.21.204

2015-03-23］

250013 濟南醫(yī)院內(nèi)科

龐棟