陳能橋 ，趙福葳 ，毛以智 ，朱大舉 ，李紅艷 ，冉浴

（1.貴州省遵義市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 遵義 563000；2.遵義市綏陽縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

豬O型口蹄疫是由O型口蹄疫病毒引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病傳播迅速，發(fā)病率高，是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定必須報(bào)告的傳染病之一，我國將其列為一類動(dòng)物疫病[1～2]。長期以來，使用豬O型口蹄疫疫苗免疫接種是我國預(yù)防該病的重要措施[3～5]。為科學(xué)制定遵義市豬O型口蹄疫的免疫程序，合理使用豬口蹄疫O型滅活疫苗和合成肽疫苗，于2014年在遵義市綏陽縣某種豬場，隨機(jī)篩選90頭53～73日齡仔豬分組進(jìn)行豬口蹄疫O型滅活疫苗和合成肽疫苗及豬口蹄疫O型滅活疫苗不同劑量免疫后副反應(yīng)調(diào)查、免疫抗體水平和抗體維持時(shí)間等相關(guān)工作的研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

隨機(jī)選擇53～73日齡的仔豬若干頭，無菌前腔靜脈采血分離血清，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測母源抗體，篩選母源抗體陰性的仔豬90頭為試驗(yàn)動(dòng)物。將90頭仔豬隨機(jī)分成A、B、C 3組，每組30頭，對(duì)每頭仔豬進(jìn)行唯一編號(hào)。

1.2 試驗(yàn)疫苗

上海某生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的豬口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽 2570+7309）（批號(hào)：20131203，有效期：20141202）；蘭州某生物科技股份有限公司生產(chǎn)的豬口蹄疫O型滅活疫苗（O/MYA98/BY2010株）（批號(hào)：H131154J，有效期：20141127）。

1.3 檢測試劑

A組和B組用豬口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）（鄭州中道生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20140101，有效期：20150109）。C組用O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測試劑盒（武漢科前生物制品有限責(zé)任公司，批號(hào)：140302，有效期：150112）。

1.4 免疫劑量

A組每頭仔豬耳根后肌肉注射豬口蹄疫O型滅活疫苗2mL；B組每頭仔豬耳根后肌肉注射豬口蹄疫O型滅活疫苗4mL；C組每頭仔豬耳根后肌肉深層注射豬口蹄疫O型合成肽疫苗1mL。

1.5 免疫副反應(yīng)調(diào)查

免疫后72h內(nèi)細(xì)心觀察試驗(yàn)仔豬是否出現(xiàn)采食減少、體溫升高甚至死亡等免疫副反應(yīng)。

1.6 采血時(shí)間

分別于免疫后第 7d、15d、30d、45d、60d、90d、120d、150d和180d，進(jìn)行無菌前腔靜脈采血并分離血清，4℃保存，次日檢測。

1.7 抗體檢測

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。按檢測試劑盒使用說明書操作、判定。A組和B組：樣品OD450nm值≥Cut Off值時(shí)判為陽性；樣品OD450nm值＜Cut Off值時(shí)判為陰性；C組：樣品OD630nm值≥0.4時(shí)判為陽性；樣品OD630nm值＜0.4時(shí)判為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫副反應(yīng)調(diào)查結(jié)果

見表1和圖1，本試驗(yàn)共有28頭豬出現(xiàn)了不同程度的免疫副反應(yīng)，表現(xiàn)為精神沉郁、體溫升高、嘔吐和腹瀉，其中A組6頭，B組22頭，C組未見免疫副反應(yīng)，28頭豬均在72h內(nèi)自愈。

2.2 免疫后不同時(shí)間抗體的檢測結(jié)果

表1 免疫豬群副反應(yīng)調(diào)查結(jié)果 頭，%

圖1 免疫豬群副反應(yīng)調(diào)查結(jié)果

表2 不同時(shí)間免疫抗體檢測結(jié)果 天，頭，%

圖2 免疫豬群O型口蹄疫抗體動(dòng)態(tài)檢測OD值

圖3 免疫后不同時(shí)間群體保護(hù)率

見表2、圖2和圖3。整個(gè)試驗(yàn)過程因其他原因?qū)е?頭豬死亡，其中A組2頭，即45d和150d各死亡1頭；B組于45d死亡1頭；C組3頭，即15d死亡1頭、45d死亡2頭。從表2、圖2和圖3可知，A組7 d時(shí)免疫抗體陽性率即群體保護(hù)率為20.00%，15～150d群體保護(hù)率均＞70%；B組和C組免疫第7 d時(shí)群體保護(hù)率分別為76.67%、73.33%，150d時(shí)3組的群體保護(hù)率分別為71.43%、75.86%和77.78%。3個(gè)試驗(yàn)組免疫后150d豬的群體保護(hù)率均達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定≥70%的標(biāo)準(zhǔn)。由表2知，接種豬口蹄疫O型滅活疫苗2mL后，15～150d免疫豬群體的群體保護(hù)率＞70%，所以生產(chǎn)中遵照疫苗使用說明書規(guī)范操作，就可獲得較好的免疫效果。

3 結(jié)論與討論

3.1 接種豬口蹄疫O型滅活疫苗72h內(nèi)，試驗(yàn)豬出現(xiàn)免疫副反應(yīng)的頭數(shù)是：A組6頭，B組22頭，分別為免疫數(shù)的20.00%和73.33%（6/30、22/30）。由此可知，生產(chǎn)實(shí)踐中不應(yīng)隨意加大免疫劑量，避免對(duì)動(dòng)物機(jī)體造成傷害。免疫后150d，3個(gè)試驗(yàn)組群體保護(hù)率分別為71.42%、75.86%和77.77%；到180d時(shí)，C組（合成肽組）的群體保護(hù)率為22.22%，A、B兩組因試驗(yàn)豬銷售未能檢測，根據(jù)120～150d A、B兩組抗體OD值下降的幅度可以看出，180d時(shí)這兩組豬的群體保護(hù)率都將低于70%。由此可知，接種豬口蹄疫O型滅活疫苗和豬口蹄疫O型合成肽疫苗后的群體有效保護(hù)期（免疫期）為150d左右（圖3）。

3.2 對(duì)豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗體消長變化的研究表明，豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫1次，即可確保高效價(jià)抗體維持至150d。豬口蹄疫O型合成肽疫苗具備免疫原性高，生物安全性好，免疫副反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)，在生產(chǎn)實(shí)踐中值得普及推廣。由于有1頭豬接種豬口蹄疫O型滅活疫苗后（B組，4mL），7～150d的檢測結(jié)果均為陰性，表明該頭豬未產(chǎn)生免疫抗體，其原因是否為加倍劑量免疫導(dǎo)致免疫不應(yīng)答（免疫耐受）有待進(jìn)一步探討。

3.3 在本試驗(yàn)中,B組即加倍劑量注射豬口蹄疫O型滅活疫苗后，豬群提前7d達(dá)到群體保護(hù)水平，但免疫副反應(yīng)也隨之大幅度增加 (為免疫數(shù)的73.33%)，主要表現(xiàn)為體溫升高、精神沉郁嘔吐和腹瀉，因此只有在緊急免疫情況下，才建議使用該種免疫方法進(jìn)行免疫。C組即接種口蹄疫O型合成肽疫苗后，未見豬群出現(xiàn)以上副反應(yīng)；通過表2、圖2和圖3可知，接種口蹄疫O型合成肽疫苗后豬群的群體保護(hù)率均較好，且抗體水平和群體保護(hù)率的時(shí)間較穩(wěn)定，說明接種該疫苗效果最好。

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