塞北紫堇化學(xué)成分的研究*

李懷平，馬 斌，任松鵬，李 麗

1山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司，山東 濟南 250101；2山東大學(xué)藥學(xué)院

塞北紫堇化學(xué)成分的研究*

李懷平1，2，馬 斌2，任松鵬1，李 麗1

1山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司，山東 濟南 250101；2山東大學(xué)藥學(xué)院

目的：對塞北紫堇的化學(xué)成分進行研究。方法：通過硅膠柱層析和重結(jié)晶法進行分離，根據(jù)理化性質(zhì)及ID-N M R、ESI-M S等波譜方法進行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：從塞北紫堇中共分離得到5種生物堿類單體化合物，分別為：α-比枯枯靈、原阿片堿、黃紫堇明堿、β-hydrast i ne、β-比枯枯靈。結(jié)論：α-比枯枯靈、原阿片堿、β-hydrast i ne為首次從該藥材分離得到。

塞北紫堇；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

1 材料

1.1 儀器 600 MHz核磁共振儀(BRUKER公司)； API400(AB公司)；UV-2450型紫外可見分光光度計(島津)；EYELA-M-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海愛郎儀器有限公司)；AUW220D型電子天平(島津)；5200B型超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)；HH-2恒溫水浴鍋(常州博遠試驗分析儀器廠)；YRT-3型熔點儀(天津市光學(xué)儀器廠)。

1.2 試藥 藥材來自金訶藏藥股份有限公司，經(jīng)青海省藏醫(yī)首席專家尼瑪教授鑒定為罌粟科紫堇屬植物塞北紫堇藥材，所用部位為除去根的地上部位。

1.3 試劑 甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、正己烷(天津市富宇精細化工有限公司)；氫氧化鈉(天津市博迪化工股份有限公司)；硅膠G板、柱層析硅膠(100-200目)(青島海洋化工廠)；所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取分離 取塞北紫堇藥材粗粉10kg，堿性乙醇回流提取，減壓濃縮，干燥，干燥物經(jīng)酸堿處理后得堿水液，堿液經(jīng)過二氯甲烷萃取，萃取液回收溶劑并干燥，得到塞北紫堇總生物堿粗提物34 g。稱取塞北紫堇總生物堿25 g，以硅膠50 g拌樣，加入600 g硅膠濕法裝柱(100～200目，Φ75× 1 000 mm)，以正己烷與乙酸乙酯為洗脫溶劑，進行梯度洗脫(98∶2，90∶10，80∶20，70∶30，60∶40，50∶50，40∶60，30∶70，20∶80，10∶90)，流分以TLC法檢測，合并相同的流分，共得到10個部分(Fr.1～10)。Fr.1 (98∶2)500mg，TLC見明顯的斑點，二氯甲烷重結(jié)晶得到橙紅色粉末Ⅲ(85 mg)；Fr.2(90∶10)1 200 mg，TLC見兩個明顯的斑點其中一個斑點比較小，采用甲醇重結(jié)晶得到白色粉末Ⅰ(800mg)。Fr.3(80∶20) 1100mg，采用甲醇重結(jié)晶得到白色粉末Ⅱ(536mg)。Fr.4(70∶30)為黃色膏狀物，采用甲醇重結(jié)晶得到淡白色粉末Ⅳ(30 mg)，F(xiàn)r.7(40∶60)為淺棕色物，采用三氯甲烷重結(jié)晶得到白色粉V(23 mg)。其余Fr.5(60∶40)，F(xiàn)r.6(50∶50)Fr.8(30∶70)，F(xiàn)r.9(20∶80)Fr.10(10∶90)，5個部分得到的組分較少，未能得到單體物質(zhì)，未做進一步研究。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 化合物Ⅰ 分子式為C20H17NO6，白色粉末，溶于苯、三氯甲烷、乙酸乙酯，微溶于乙醇和乙醚。m.p.215～218℃，ESI-MS顯示分子離子峰368.3 (M+H)m/z。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ∶4.05(1H，d，J=2.4Hz，H-1)，6.63(1H，s，H-5)，6.90(1H，s，H-8)，5.77(1H，d，J=2.4Hz，H-11)，7.23(1H，dd，J=7.8，7.8Hz，H-16，17)，5.94(2H，d，J=9.6Hz，OCH2O)，6.22(2H，d，J=13.8Hz，OCH2O)，2.23(3H，s，N-CH3)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6)δ∶64.7(s，C-1)，50.3(s，C-3)，26.6(s，C-4)，108.2(s，C-5)，145.8(s，C-6)，145.6(s，C-7)，107.4(s，C-8)，130.1(s，C-9)，126.5(s，C-10)，84.6(s，C-11)，167.0(s，O=CO)，109.2(s，C-13)，143.8(s，C-14)，148.5(s，C-15)，113.5(s，C-16)，115.8(s，C-17)，141.5(s，C-18)，100.8(s，OCH2O)，103.3(s，OCH2O)，44.7(s，N-CH3)，根據(jù)以上數(shù)據(jù)，通過與文獻報道［8］235數(shù)據(jù)對照基本一致，故確定化合物Ⅰ為α-比枯枯靈(α-Bicuculline)。

2.2.2 化合物Ⅱ 分子式為C20H19NO5，為白色粉末，溶于三氯甲烷、乙醚，微溶于甲醇，幾乎不溶于水。m.p.206～208℃。ESI-MS顯示分子離子峰354.4(M+H)m/z。1H-NMR(600 MHZ，DMSO-d6)δ∶6.95(1H，s，H-1)，6.81(1H，s，H-4)，6.73(1H，d， J=7.8Hz，H-14)，6.69(1H，d，J=8.4Hz，H-15)，1.81 (3H，s，NCH3)。13C-NMR(150MHz，DMSO-d6)δ∶107.5 (s，C-1)，145.9(s，C-2)，147.4(s，C-3)，110.5(s，C-4)，30.6(s，C-5)，57.5(s，C-6)，194.8(s，C=O)，132.8(s，C-9)，136.1(s，C-10)，50.8(s，C-11)，118.4(s，C-12)，129.8(s，C-13)，125.1(s，C-14)，106.4(s，C-15)，145.3(s，C-16)，145.4(s，C-17)，46.1(s，C-18)，101.2(s，OCH2O)，100.8(s，OCH2O)，41.2(s，NCH3)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)，通過與文獻報道［8］692數(shù)據(jù)對照基本一致，故確定化合物為原阿片堿(Protopine)。

2.2.3 化合物Ⅲ 分子式為C22H23NO4，橙紅色粉末，溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇等。m.p.190～193℃，ESI-MS顯示分子離子峰366.3(M+H)m/z。1H-NMR (600MHZ，DMSO-d6)δ：6.15(1H，s，H-1)，6.62(1H，s，H-2)，3.42(2H，d，J=19.8Hz，H-8)，3.35(2H，t，J=6.6Hz，H-8)，7.20(1H，d，J=8.4Hz，H-11)，6.88 (1H，t，J=13.8Hz，H-12)，1.99(3H，s，NCH3)，3.71 (3H，d，J=7.8Hz，OCH3)，3.45(3H，s，O-CH3)，5.66 (2H，s，=CH2)，4.72(2H，s，=CH2)。13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：111.2(s，C-1)，147.3(s，C-2)，147.7(s，C-3)，110.5(s，C-4)，126.2(s，C-4α)，29.9(s，C-5)，37.1(s，C-8)，123.6(s，C-8α)，142.9 (s，C-9)，148.1(s，C-10)，108.3(s，C-11)，114.0 (s，C-12)，136.0(s，C-12α)，155.5(s，C-13)，71.5 (s，C-14)，136.8(s，C-14α)，38.9(s，NCH3)，101.6 (s，OCH2O)，55.9(s，OCH3)，55.7(s，OCH3)、106.6(s，=CH2)，根據(jù)以上數(shù)據(jù)，通過與文獻報道［8-9］數(shù)據(jù)對照基本一致，故確定化合物Ⅲ為：黃紫堇明堿［(+) -Ochotensimine］。

2.2.4 化合物Ⅳ 分子式為C21H21NO6，淡白色粉末，溶于丙酮、乙酸乙酯等，m.p.130～133℃，ESI-MS顯示分子離子峰384.3(M+H)m/z。1H-NMR(600 MHZ，DMSO-d6)δ∶4.04(1H，d，J=2.4Hz，H-1)，2.27(3H，s，NCH3)，2.54(2H，d，J=2.4Hz，H-3)，2.95(2H，m，J=11.4Hz，H-4)，2.40(2H，m，J=11.4Hz，H-4)，6.85 (1H，s，H-5)，6.61(1H，s，H-5)，5.70(1H，d，J=2.4 Hz，H-1′)，7.43(1H，d，J=8.4Hz，H-6′)，7.38(1H，d，J=8.4Hz，H-7′)，5.92(2H，s，OCH2O)，5.89(2H，s，OCH2O)，3.81(3H，d，J=4.8Hz，OCH3)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6)δ∶64.7(s，C-1)，44.6(s，NCH3)，50.3(s，C-3)，26.9(s，C-4)，126.4(s，C-4α)，108.2(s，C-5)，145.8(s，C-6)，145.5(s，C-7)，107.3(s，C-8)，130.0(s，C-8α)，82.6(s，C-1′α)，167.6(s，O=CO，119.0(s，C-3′α)，146.5(s，C-4′)，152.0(s，C-5′)，119.3(s，C-6′)，118.4(s，C-7′)，141.4(s，C-7′α)，100.7(s，OCH2O)，61.6(s，OCH3)，56.6(s，-OCH3)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)，通過與文獻報道［10］數(shù)據(jù)對照基本一致，故確定化合物Ⅳ為：β-hydrastine。

2.2.5 化合物Ⅴ 分子式為C20H17NO6，白色粉末，溶于三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯等，m.p.194～196℃，ESI-MS顯示分子離子峰368.3(M+H)m/z。1H-NMR(600MHZ，DMSO-d6)δ：4.09(1H，s，H-1)，6.71(1H，d，J=14.4Hz，H-5)，6.73(1H，d，J=14.4Hz，H-8)，5.77(1H，d，J=4.2Hz，H-11)，6.10(1H，d，J=4.2Hz，H-16)，7.14(1H，d，J=7.8Hz，H-17)， 5.97(2H，d，J=7.8Hz，OCH2O)，6.10(2H，d，J=4.2Hz，OCH2O)，2.44(3H，s，NCH3)。13C-NMR(150MHz，DMSO-d6)δ∶64.8(s，C-1)，48.8(s，C-3)，26.3(s，C-4)，108.3(s，C-5)，146.3(s，C-6)，145.5(s，C-7)，107.9(s，C-8)，130.4(s，C-9)，125.0(s，C-10)，84.2(s，C-11)，166.7(s，O=CO)，109.5(s，C-13)，144.0(s，C-14)，148.7(s，C-15)，113.5(s，C-16)，115.5(s，C-17)，140.4(s，C-18)，100.9(s，OCH2O)，103.4(s，OCH2O)，44.9(s，NCH3)，根據(jù)以上數(shù)據(jù)，通過與文獻報道［8］347，693數(shù)據(jù)對照基本一致，故確定化合物Ⅴ為β-比枯枯靈(β-Bicuculline)。

以上5種生物堿化合物的結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 5種生物堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)

3 討論

本文采用酸堿法制備總生物堿粗提物，并通過常規(guī)的硅膠柱色譜法對其塞北紫堇總生物堿進行了系統(tǒng)研究，以TLC法檢測不同流份，合并相同流份，再經(jīng)過進一步重結(jié)晶，分離得到5個化合物，鑒定其結(jié)構(gòu)，均為生物堿類化合物，其中原阿片堿、α-比枯枯靈、β-hydrastine為從本藥材中首次分離得到。

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Research on Chemical Constituents of SaiBei ZiJin

LI Huaiping1,2,MA Bin2,REN Songpeng1,LI Li1
1 Shandong Arura Drug Research and Development Company,Ltd,Jinan 250101,China;
2 Pharmacy College of Shandong University

Objective:To study chemical constituents of SaiBei ZiJin[Corydalis impatiens(pall.)Fisch.]. Methods:SaiBei ZiJin was abstracted by silica column chromatography method and recrystalization method,structure identification were performed according to physicochemical property,ID-NMR,ESI-MS and other spectral methods.Results:Five alkaloid monomer compounds were extracted from SaiBei ZiJin,they were:α-bicuculline, protopine,ochotensimine,β-hydrastine and β-bicuculline.Conclusion:α-bicuculline,protopine and β-hydrastine are isolated from medicinal materials for the first time.

SaiBei ZiJin;chemical constituents;structure identification塞北紫堇為罌粟科紫堇屬植物塞北紫堇Corydalis impatiens(Pall.)Fisch.的干燥全草。收載于《中華本草》藏藥卷，藏語名稱為“帕下嘎”(或譯為“帕夏嘎”或“巴夏嘎”)，具有除熱消腫、活血散瘀功效，用于熱性諸癥［1-5］。塞北紫堇分布在青海、西藏、甘肅、四川等地，為藏成藥中常用藥材，應(yīng)用非常廣泛，數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示有25%的藏成藥中含有該藥材?，F(xiàn)代研究中，對塞北黃堇化學(xué)成分的報道甚少，因紫堇屬植物中含多種生物堿，具有多方面的藥理作用［6-7］，故筆者提取制備了塞北紫堇總生物堿，并進行了分離，得到5個生物堿類成分，分別為原阿片堿、α-比枯枯靈、黃紫堇明堿、β-hydrastine、β-比枯枯靈。

R284.1

A

1004-6852(2015)10-0043-03

2014-09-27

藏醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新服務(wù)平臺(編號2060503)。

李懷平(1980—)，男，碩士學(xué)位，工程師。研究方向：民族藥質(zhì)量標準制定及藏藥新藥研究開發(fā)。