李 靖，路莎莎

張掖市中醫(yī)醫(yī)院，甘肅 張掖734000

高效液相色譜法測定愈傷膠囊中三七總皂苷和延胡索乙素的含量

李 靖，路莎莎

張掖市中醫(yī)醫(yī)院，甘肅 張掖734000

目的：通過測定愈傷膠囊中三七總皂苷和延胡素乙素的含量，建立愈傷膠囊質(zhì)量控制項下的含量測定標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用高效液相色譜(H PLC)方法，W at ers公司的 Sunfi re C18色譜柱(150 m m×4.6 m m，5 μm)。人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1以乙腈為流動相A，以水為流動相B，二元梯度洗脫，0～30分鐘，18%～19%A;30～40分鐘，19%～31%A;40～60分鐘，31%～56%A，檢測波長203 nm，流速為1.5 m L/m i n；延胡索乙素以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)ph值至6.0)(55∶45)為流動相；檢測波長為280 nm。結(jié)果：經(jīng)測定愈傷膠囊粉末中，每克按干燥品計，三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1的總皂苷含量為0.46 m g/g，延胡索乙素含量為0.046 m g/g。結(jié)論：H PLC法測定愈傷膠囊質(zhì)量三七總皂苷含量與延胡索乙素準(zhǔn)確可行，可作為愈傷膠囊含量控制的指標(biāo)性成分。

愈傷膠囊；三七總皂苷；延胡索乙素；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；高效液相色譜

愈傷膠囊(三七90 g，乳香45 g，沒藥45 g，土鱉蟲45 g等)為張掖市中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，有活血化瘀、行氣消腫止痛、續(xù)筋接骨的功效。于2004年7月經(jīng)甘肅省食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)生產(chǎn)，批號為甘藥制字Z04071025)，據(jù)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制項下沒有建立含量測定，筆者通過對測定愈傷膠囊中三七總皂苷和延胡素乙素的含量，建立愈傷膠囊質(zhì)量控制項下的含量測定標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步實現(xiàn)愈傷膠囊的安全、穩(wěn)定、可控，也為愈傷膠囊進(jìn)一步的研究提供依據(jù)和基礎(chǔ)［1-2］。

1 材料與方法

1.1 藥品 愈傷膠囊取樣批次(批號：20121102、20130123、20130521、20130715、20131014)。

1.2 試劑 三七皂苷R1(中國藥品生物制品檢定所，批號：110742-200934，純度大于99.9%)，人參皂苷Rb1(中國藥品生物制品檢定所，批號：110734-200905，純度大于99.9%)，人參皂苷Rg1 (中國藥品生物制品檢定所，批號：110752-200910，純度大于99.9%)，延胡索乙素(中國藥品生物制品檢定所，批號：110726-200811，純度大于99.9%)，甲醇(天津市紅巖化學(xué)試劑廠生產(chǎn))，乙腈色譜純(成都金山化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn))，哇哈哈純凈水等。

1.3 儀器 高效液相色譜儀(Waters 600、四元泵、在線脫氣系統(tǒng)、手動進(jìn)樣系統(tǒng)、Waters2487型紫外 -可見檢測器、Empower色譜工作站)；KQ2200DB型超聲波清洗器(40 kHz，80 W，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司提供)；BS201型電子天平(北京賽多利斯天平有限公司提供)；回流裝置。

1.4 色譜柱 Waters公司的Sunfire C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；三七總皂苷：以乙腈為流動相A，以水為流動相B，二元梯度洗脫，0～30分鐘，18%～19%A；30～40分鐘，19%～31%A；40～60分鐘，31%～56%A，檢測波長203 nm，流速為1.5 mL/min理論塔板數(shù)按三七皂苷R1峰計算應(yīng)不低于4000，分析時間60分鐘。延胡索乙素：以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值至6.0)(55∶45)為流動相；檢測波長為280 nm，理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰計算應(yīng)該不低于3 000，分析時間50分鐘。各樣品色譜圖中，分離度均大于1.5；拖尾因子在0.95～1.05之間。

1.5 溶液制備

1.5.1 對照品溶液 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品及三七皂苷R1對照品適量，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg1 0.4 mg、人參皂苷Rb1 0.4 mg、三七皂苷R1 0.1 mg的混合溶液。取延胡索乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含46 μg的溶液。

1.5.2 供試品溶液 制備三七總皂苷樣品溶液：取本品內(nèi)容物6 g，精密稱定，加甲醇100 mL，放置2小時，時時振搖，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。進(jìn)樣量10 μL［3-5］。延胡索乙素樣品溶液的制備：取本品內(nèi)容物5 g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入濃氨水試液-甲醇(1∶20)混合溶液100 mL，稱定質(zhì)量，冷浸1小時后加熱回流1小時，放冷，再次稱定質(zhì)量，用濃氨水試液-甲醇(1∶ 20)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過。精密稱取濾液25 mL，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL的量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，進(jìn)樣量10 μL［6-8］。

1.6 方法

1.6.1 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品三七總皂苷溶液0.5、1.0、2.5、3.0、4.0、5.0 mL置于10 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣20 μL，以對照品濃度對峰面積積分分值線性回歸得三七總皂苷的回歸方程為：Y=6.6×107X-1.7619×104相關(guān)系數(shù)r=0.999 2。精密吸取對照品延胡索乙素溶液0.4、0.6、2.0、3.0、5.0 mL置于5 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣20 μL，以對照品濃度對峰面積積分分值線性回歸得延胡索乙素的回歸方程為：Y=6.2×107X-1.07×104相關(guān)系數(shù)r=0.999 1。結(jié)果表明三七總皂苷含量和延胡索乙素的含量分別在0.032～0.86 mg/mL和0.037～0.177 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.6.2 精密度實驗 精密吸取同一濃度的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，得到三七總皂苷和延胡索乙素的峰面積，計算三七總皂苷峰面積的RSD為0.37%(n=5)，延胡索乙素的RSD為0.30%(n=5)，表明本方法精密度良好。

1.6.3 重復(fù)性實驗 取愈傷膠囊內(nèi)容物，按供試品制備方法制備5份樣品溶液，得到三七總皂苷和延胡索乙素的峰面積，計算三七總皂苷面積的RSD為1.46%(n=5)，延胡索乙素峰面積的RSD為1.51%(n=5)。

1.6.4 穩(wěn)定性實驗 取愈傷膠囊內(nèi)容物，制得供試品溶液，分別在0、2、6、8、12小時進(jìn)樣測定，計算三七總皂苷的RSD為0.99%(n=5)，延胡索乙素峰面積的RSD為2.39%(n=5)，結(jié)果表明樣品在12小時內(nèi)穩(wěn)定。

1.6.5 回收率實驗 精密稱取同一已知含量的樣品6份，分別精密加入一定量的對照品，制得樣品溶液后，依法進(jìn)樣測定，結(jié)果三七總皂苷的回收率為97.6%，RSD為1.7%，延胡索乙素的回收率為98.8%，RSD為1.5%。

2 結(jié)果

經(jīng)測定愈傷膠囊粉末中，每克按干燥品計，三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1的總皂苷含量為0.46mg/g，延胡索乙素含量為0.046mg/g。圖1—2為愈傷膠囊樣品中，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1含量測定色譜圖，圖3—4為愈傷膠囊樣品中，延胡索乙素的含量測定色譜圖。

圖1 人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖3 延胡索乙素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖4 愈傷膠囊樣品中延胡索乙素色譜圖

3 結(jié)論

三七作為愈傷膠囊處方中的君藥，活血散瘀效果顯著，在處方中比重較大，其含三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1的總皂苷含量為0.46 mg/g，含量較高，且測定實驗無陰性干擾，可以作為愈傷膠囊質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。延胡索作為愈傷膠囊處方中的佐藥，輔助君臣藥，增強活血、利痛、行氣之功效，延胡索乙素含量為0.046 mg/g，且測定實驗無陰性干擾，可以作為愈傷膠囊質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。愈傷膠囊中藥制劑是多組分制劑，療效也是多靶點作用的綜合結(jié)果，所以測定的指標(biāo)性成分越多，對于控制中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量越有利［9］，已知愈傷膠囊中含有三七總皂苷和延胡索乙素有效成分，并且都同用HPLC法測定，同時作為指標(biāo)性成分，這樣既可增加質(zhì)量控制的覆蓋面，又可克服藥材中所含若干種成分多少無固定比例規(guī)律的缺陷［10］。因此用三七總皂苷含量和延胡素乙素含量來控制愈傷膠囊質(zhì)量科學(xué)、可行、有效。

［1］ 肖小河.中藥制劑質(zhì)量控制方法應(yīng)走向多元化［N］.中國醫(yī)藥報，2007-03-08(B6).

［2］ 國家藥典委員會.中國藥典：一部［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：773.

［3］ 馬銀海，韋建榮.正交實驗法研究三七皂甙的超聲提?。跩］.昆明師范高等專科學(xué)校學(xué)報，2005，27(4):1-3.

［4］ 梁秋云，劉華鋼，賴茂祥，等.三七莖基與須根含量測定方法的研究［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，23(1):36-38.

［5］ Feng X i anH u，Ji an Ji angZhong.Rol e of j asm oni c aci d i n al t erat i on of gi nsenosi de het erogenei t yi n el i ci t ed cel l cul t ures of panax not ogi nseng［J］. Journal of bi osci ence and bi oengi neeri ng，2007，104(6):513.

［6］ 楊志剛，陳阿琴，俞頌東.三七藥理研究新進(jìn)展［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2005，39(4):59-60.

［7］ 徐征.元胡止痛膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2006，6(3):17-19.

［8］ 王玲.H PLC法測定胃安顆粒中延胡索乙素的含量［J］.齊魯藥事，2008，3(7):32-33.

［9］ 周愛珍，董曉燁，尹華.中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)代化的探討［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25(7):1455-1458.

［10］劉建玉，宗志軍，李民蘭.愈傷膠囊治療急性軟組織扭傷臨床觀察［J］.中國中醫(yī)藥信息，2004，14(4):71.

Content Detection of Panax Notoginseng Saponins and Tetrahydropalmatine in YuShang Capsules by HPLC

LI Jing,LU Shasha
Zhangye Municipality TCM Hospital,Zhangye 734000,China

Objective:To establish the standard of the content determination of YuShang capsules for quality control by detecting the contents of Panax Notoginseng Saponins(PNS)and tetrahydropalmatine in YuShang capsules.Methods:HPLC method was adopted,Sunfire C18chromatographic column (150 mm×4.6 mm,5 μm).Ginsenoside Rg1,Ginsenoside Rb1,PNS R1 with acetonitrile as mobile phase A and water as mobile phase B,dual gradient elution,0～30 minutes,18%～19%A;30～40 minutes,19%～31%A;40～60 minutes,31%～56%A,detection wavelength was 203 nm,flow rate was 1.5mL/min;methanol-0.1%phosphoric acid solution(ph of triethylamine was adjusted to 6.0)(55:45)were taken as mobile phase for tetrahydropalmatine;detection wavelength was 280 nm.Results:The contents of total saponins and tetrahydropalmatine in PNS R1,Ginsenoside Rb1 and ginsenoside Rg1 contained in YuShang capsules after detected in the powder of dry produce per gram.Conclusion:HPLC method used to detect PNS and tetrahydropalmatine in YuShang capsules is accurate and feasible,which could be used as indicative indexes of YuShang capsules content control.

YuShang capsules;Panax Notoginseng Saponins;tetrahydropalmatine;quality standard;HPLC

R284.1

A

1004-6852(2015)10-0046-03

2014-12-27

李靖(1979—)，男，主管藥師。研究方向：中藥提取。