分化型甲狀腺癌中雌激素受體、孕激素受體和增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá)及臨床意義

黃霞，劉景麗，吳健松，李向榮，陳亮

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論著·臨床

分化型甲狀腺癌中雌激素受體、孕激素受體和增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá)及臨床意義

黃霞，劉景麗，吳健松，李向榮，陳亮

目的 研究分化型甲狀腺癌中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)及臨床意義。方法 收集甲狀腺相關(guān)疾病患者105例，其中甲狀腺乳頭狀癌患者33例，甲狀腺濾泡癌患者24例，甲狀腺腺瘤24例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者24例。使用免疫組化法測定各標(biāo)本中ER和PR及PCNA的表達(dá)情況，分析三者的臨床意義。結(jié)果 甲狀腺乳頭狀癌中，<45歲者的ER陽性表達(dá)率顯著高于≥45歲者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的ER陽性表達(dá)率亦顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=3.945、3.688，P<0.05)；甲狀腺濾泡癌中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的ER陽性表達(dá)率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=4.232，P<0.05)。甲狀腺乳頭狀癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的PR陽性表達(dá)顯著高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=3.861，P<0.05)。甲狀腺濾泡癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的PCNA陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=4.231，P<0.05)。甲狀腺乳頭狀癌的ER及PCNA陽性表達(dá)率均顯著高于甲狀腺腺瘤及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫者(χ2=6.561、8.412、4.520、7.695，P<0.05)。甲狀腺乳頭狀癌的PR陽性表達(dá)率顯著高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫者(χ2=5.519，P<0.05)。甲狀腺乳頭狀癌者的ER、PR及PCNA染色陽性分級(jí)顯著高于甲狀腺腺瘤及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫者(χ2=4.520，5.988，3.256,3.635,3.968,5.509，P均<0.05)。Spearman相關(guān)性結(jié)果表明，甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺濾泡癌中，ER與PR呈正相關(guān)(r=0.459、0.618，P<0.05)。甲狀腺乳頭狀癌中，PCNA蛋白表達(dá)與ER及PR均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.456、-0.442，P均<0.05)。甲狀腺濾泡癌中，PCNA蛋白表達(dá)與ER呈負(fù)相關(guān)(r=-0.635，P<0.05)。結(jié)論 分化型甲狀腺癌中ER、PR、PCNA表達(dá)陽性率高于良性甲狀腺腫瘤組織，ER、PR、PCNA在分化型甲狀腺癌的發(fā)病、進(jìn)展中起重要作用，且三者存在相關(guān)性，因此聯(lián)合檢測ER、PR、PCNA對(duì)分化型甲狀腺癌的診治具有重要價(jià)值。

分化型甲狀腺癌；雌激素受體；孕激素受體；細(xì)胞核增殖性抗原；表達(dá)；價(jià)值

目前，對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)進(jìn)行良惡性診斷在臨床上是一個(gè)難點(diǎn)，現(xiàn)有的影像學(xué)手段及病理檢查均存在一定的缺陷，尋找一種簡單快速的腫瘤標(biāo)志物組合對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)進(jìn)行診斷已成為臨床急需解決的問題之一[1]。國外有研究顯示[2]，雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progesterone receptor，PR)及增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)在診斷乳腺癌、肺癌等方面具有較好的診斷價(jià)值，但在分化型甲狀腺癌中的應(yīng)用較少?，F(xiàn)檢測分化型甲狀腺癌中ER、PR及PCNA的表達(dá)及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年3月—2013年3月在我院接受治療的甲狀腺相關(guān)疾病患者105例作為研究對(duì)象。其中甲狀腺乳頭狀癌患者33例，男16例，女17例；年齡28～72(42.8±1.6)歲；病程6～12(8.9±1.1)個(gè)月；合并高血壓12例，糖尿病18例，冠心病3例；既往有癌癥家族遺傳史者17例。甲狀腺濾泡癌患者24例，男8例，女16例；年齡28～70(42.5±1.3)歲；病程7～12(8.6±1.3)個(gè)月；合并高血壓10例，糖尿病13例，冠心病1例；既往有癌癥家族遺傳史者13例。甲狀腺腺瘤24例，男9例，女15例；年齡30～72(42.6±1.7)歲；病程7～12(8.4±1.5)個(gè)月；合并高血壓11例，糖尿病12例，冠心病1例；既往有甲狀腺疾病家族遺傳史者12例；結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者24例，男5例，女19例；年齡30～74(42.5±1.3)歲；病程8～12(8.6±1.2)個(gè)月；合并高血壓13例，糖尿病10例，冠心病1例。既往有甲狀腺疾病家族遺傳史者10例。納入標(biāo)準(zhǔn)[3]：(1)所有患者的病理標(biāo)本均由2位以上有經(jīng)驗(yàn)的專家進(jìn)行診斷；(2)手術(shù)前無放、化療及內(nèi)分泌治療史；(3)滿足WHO關(guān)于分化型甲狀腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)[4]：(1)有出血和感染，以及組織壞死嚴(yán)重者；(2)癌灶過小亦或是蠟塊較小者，因連續(xù)切片遺漏病變形成假陰性者；(3)年齡≤20歲者。獲取其后期手術(shù)切除所得甲狀腺組織進(jìn)行進(jìn)一步研究。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬同意并簽署知情同意書。

1.2 觀測方法與判定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 方法 使用免疫組化法測定各標(biāo)本中ER、PR及PCNA的表達(dá)。將制作好的標(biāo)本蠟塊行4 μm切片，脫蠟至水后置于蒸餾水內(nèi)漂洗5 min，高壓修復(fù)后將切片置于蒸餾水內(nèi)沖洗2次，5 min/次。將切片擦干，滴入1滴3%過氧化氫，放在37℃下溫育15 min，再置于蒸餾水內(nèi)沖洗2次，5 min/次。擦干切片，滴入pH 7.8胃蛋白酶，在37℃下溫育30 min。用蒸餾水及PBS液各沖洗5 min。而后滴入封閉液，在37℃下溫育15 min。擦干切片，添加一抗，ER與PR稀釋度1∶100，而PCNA稀釋度1∶200。于4℃下過夜。在蒸餾水及PBS液下各沖洗5 min。擦干切片并滴入二抗，在37℃下溫育40 min。用蒸餾水沖洗2次，5 min/次。各切片滴入2滴DAB液，在顯微鏡(XSP-8型, 上海普丹光學(xué)有限公司)下觀察10～30 min，檢測顯色過程，終止反應(yīng)過程。以自來水沖洗和蘇木紫染色2 min，30 s分化液，30 s返藍(lán)。利用酒精和二甲苯依次行脫水處理。利用中性樹膠進(jìn)行封片和晾干，使用PBS替代一抗用作陰性對(duì)照。

1.2.2 判定標(biāo)準(zhǔn)[5]： ER及PR蛋白的陽性產(chǎn)物主要存于胞漿及胞核中，而PCNA通常表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)，為黃色或者棕黃色顆粒。其中免疫組化判定標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞數(shù)<10%記0分，10%～25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記3分，>75%記4分。染色程度評(píng)價(jià)：淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。統(tǒng)計(jì)二者乘積，所得結(jié)果<3記為陰性，≥3記為陽性。根據(jù)分?jǐn)?shù)對(duì)表達(dá)程度進(jìn)行劃分，0～2分記為陰性(-)、3～4分記為低表達(dá)(+)、5～8分記為中表達(dá)(++)、≥9分記為高表達(dá)(+++)，將低、中、高表達(dá)記為陽性。為Log-rank檢驗(yàn)的對(duì)數(shù)秩值。

2 結(jié) 果

2.1 癌組織ER、PR及PCNA表達(dá)與相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系 甲狀腺乳頭狀癌中，ER陽性表達(dá)率<45歲高于≥45歲者(χ2=3.945，P=0.033)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=3.688，P=0.042)；甲狀腺濾泡癌中，ER陽性表達(dá)率有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=4.232，P=0.000)。甲狀腺乳頭狀癌中，PR陽性表達(dá)率無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=3.861，P=0.035)。甲狀腺濾泡癌中，PCNA陽性表達(dá)率有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=4.231，P=0.000)。見表1。

2.2 ER、PR及PCNA在甲狀腺組織中的分布 ER、PR及PCNA在甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺濾泡癌組織中的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.081、0.081、1.852，P=0.776、0.776、0.174)；甲狀腺乳頭狀癌的ER及PCNA陽性表達(dá)率均顯著高于甲狀腺腺瘤及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫者(χ2=6.561、8.412；4.520、7.695,P均=0.010、0.004；0.033、0.006)。甲狀腺乳頭狀癌的PR陽性表達(dá)率高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫者(χ2=5.519，P=0.019)。見表2。

表1 甲狀腺癌的ER、PR及PNA表達(dá)與相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系 [例(%)]

表2 ER、PR及PCNA在甲狀腺組織中的分布比較 [例(%)]

注：與甲狀腺乳頭狀癌相比，aP<0.05

2.3 ER、PR及PCNA的染色分級(jí)比較 甲狀腺乳頭狀癌者的ER、PR及PCNA染色陽性分級(jí)顯著高于甲狀腺腺瘤及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫者(χ2=4.520、5.988、3.256、3.635、3.968、5.509，P均<0.05)。與甲狀腺濾泡癌者無明顯差異(χ2=0.140、0.001、2.215，P均>0.05)。見表3。

2.4 相關(guān)性分析 在甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺濾泡癌中，ER與PR呈正相關(guān)(r=0.459、P=0.012；r=0.618，P=0.015)。甲狀腺乳頭狀癌中，PCNA蛋白表達(dá)與ER及PR均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.456、-0.442，P=0.012、0.013)。甲狀腺濾泡癌中，PCNA蛋白表達(dá)與ER呈負(fù)相關(guān)(r=-0.635，P=0.004)；與PR無明顯的相關(guān)性(r=-0.389，P=0.092)。

3 討 論

臨床上，甲狀腺癌作為人體頭頸部最為常見的一類惡性腫瘤，近年來發(fā)病率明顯呈上升趨勢(shì)。甲狀腺癌具有較為復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制，且由多因素及多基因的協(xié)同作用，是一種經(jīng)歷多個(gè)步驟才可形成的生物學(xué)變化過程。有報(bào)道稱，甲狀腺具有一定程度的激素依賴性，ER、PR的檢測對(duì)乳腺癌及前列腺癌等腫瘤的診斷及治療具有重要意義，但在甲狀腺癌中較少涉及，同時(shí)，PCNA為細(xì)胞增殖有關(guān)核抗原內(nèi)較為多見的一種，其在細(xì)胞核中的陽性表達(dá)和細(xì)胞增殖的活性緊密相連[6，7]。

表3 不同甲狀腺組織中ER、PR及PCNA染色表達(dá)程度比較 [例(%)]

注：與甲狀腺乳頭狀癌比較，aP<0.05

本研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺癌與ER、PR及PCNA等的表達(dá)緊密相關(guān)，主要原因：(1)ER方面：ER主要是介導(dǎo)雌激素針對(duì)甲狀腺癌調(diào)控性增殖而發(fā)揮作用，其主要途徑含基因及非基因方面[8]。此外，雌激素還可通過調(diào)節(jié)TSH的分泌對(duì)甲狀腺癌形成產(chǎn)生間接影響，這是因?yàn)榧谞钕俑鹘M織增生主要由TSH調(diào)控。因此，雌激素能夠間接發(fā)揮調(diào)控組織增生，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖。由上述結(jié)果可知，甲狀腺癌中ER陽性表達(dá)和年齡有一定聯(lián)系，提示雌激素結(jié)合其受體ER進(jìn)而刺激了癌癥基因表達(dá)，對(duì)早期癌細(xì)胞增殖有影響作用。分化型的甲狀腺癌較其他種類的惡性腫瘤有著較好的預(yù)后，特別是乳頭狀癌，若無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響，患者壽命甚至無明顯影響[9]。國外Shamim等[10]報(bào)道，分化型甲狀腺癌形成的雌激素受體具有更好的功能，因此預(yù)后較其他類型的腫瘤更佳。(2)PR方面：孕激素能夠抑制患者甲狀腺癌的進(jìn)一步生長，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移則顯示惡性腫瘤程度較高，PR表達(dá)降低，孕激素抑制作用將無法較好發(fā)揮。本文研究結(jié)果顯示，PR對(duì)癌細(xì)胞抑制作用逐漸減弱甚至消失，從而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，年齡較大者甲狀腺癌惡性程度亦更高，且預(yù)后更差。同時(shí)，孕激素結(jié)合相關(guān)受體，通過二聚體形式與靶基因的反應(yīng)原件進(jìn)行結(jié)合，進(jìn)而反映出原癌基因表達(dá)，更利于癌細(xì)胞增殖。(3)PCNA方面：由于PCNA是一種DNA聚合酶性輔助蛋白，可參與到DNA修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)控，與P21產(chǎn)生作用，形成四聚體，進(jìn)而抑制了相關(guān)蛋白激酶活性，對(duì)細(xì)胞周期產(chǎn)生一定的阻滯作用而影響其表達(dá)[11]。PCNA表達(dá)程度和腫瘤的惡性程度有緊密聯(lián)系，惡性程度越強(qiáng)，即浸潤程度越大，淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移亦越多，則PCNA表達(dá)強(qiáng)度越高。

此外，本結(jié)果表明ER、PR及PCNA對(duì)于甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展以及浸潤和轉(zhuǎn)移等過程中均發(fā)揮著十分重要的作用。3種指標(biāo)間的相互聯(lián)系較為緊密，是涉及到多種因素和多類分子，以及多種步驟的復(fù)雜進(jìn)程，對(duì)三者進(jìn)行臨床診斷，建立起相應(yīng)的特異型分子標(biāo)志物，能夠更好地提升手術(shù)前的診斷準(zhǔn)確程度，從而制定出合理治療方案，輔助判斷預(yù)后。與國外報(bào)道結(jié)果相一致[12～16]。

綜上所述，分化型甲狀腺癌中ER、PR、PCNA表達(dá)陽性率高于良性甲狀腺腫瘤組織，ER、PR、PCNA在分化型甲狀腺癌的發(fā)病、進(jìn)展中起重要作用，且三者存在相關(guān)性，因此聯(lián)合檢測ER、PR、PCNA對(duì)分化型甲狀腺癌的診治具有重要價(jià)值。

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Expression and clinical significance of ER, PR and PCNA in differentiated thyroid cancer

HUANGXia*,LIUJingli,WUJiansong,LIXiangrong,CHENLiang.*DepartmentofOncology,theCentralHospitalofXiaoganCity,HubeiProvinceXiaogan432000,China

Correspondigauthor:CHENLiang,E-mail:15337126775@163.com

Objective To investgate the expression of estrogen receptor(ER),progesterone recepter(PR) and proliferatiing cell nuclear antigen(PCNA) using immunohistochemistry in every specimen, analyzed the clinical significance of the three indexes.Methods From March 2012 to March 2013 in the hospital for treatment of 105 patients with thyroid related diseases as the research object. 33 patients with papillary carcinoma of thyroid cancer. 24 patients with thyroid follicular carcinoma. 24 cases of thyroid adenoma. 24 patients with nodular goiter. Using immunohistochemical method determination of ER and PR in all specimens, and the expression of PCNA, analysis the three parameter’s clinical significance.Results In papillary thyroid carcinoma, < 45 years old patients’ expression of ER positive rate was significantly higher than that of more than or equal to 45 years old patients(χ2=3.945, χ2=3.688,P<0.05), lymph node metastasis of ER positive expression rate was also significantly higher than those without lymph node metastasis; thyroid follicular carcinoma, lymph node metastasis’ ER positive expression rate were lower than that in the lymph node metastasis (χ2=4.232,P<0.05). The PR positive expression of papillary thyroid carcinoma without lymph node metastasis was significantly higher than that of lymph node metastasis(χ2=3.861,P<0.05). Thyroid follicular carcinoma with lymph node metastasis of PCNA positive expression rate was significantly higher than that without lymph node metastasis (χ2=4.231,P<0.05). Papillary thyroid carcinoma with ER and PCNA positive expression rate was significantly higher than that of nodular goiter and thyroid adenoma(χ2=6.561、8.412、4.520、7.695，P<0.05).The positive expression of PR in papillary thyroid carcinoma was significantly higher than that of nodular goiter patients (χ2=5.519,P<0.05). Papillary thyroid carcinoma of ER, PR and PCNA staining positive classification was significantly higher than that of nodular goiter and thyroid adenoma (χ2=4.520,χ2=5.988,χ2=3.256,χ2=3.635,χ2=3.968,χ2=5.509,P<0.05). Spearman correlation showed that the thyroid papillary carcinoma and follicular thyroid carcinoma, ER and PR were positively correlated (r=0.459,r=0.618,P<0.05). In papillary thyroid carcinoma, PCNA protein expression were negatively correlated with ER and PR (r=-0.456,r=-0.442,P<0.05). In thyroid follicular carcinoma, the expression of PCNA protein was negatively correlated with ER (r=-0.635,P<0.05).Conclusion The differentiated thyroid carcinoma in ER, PR, PCNA expression positive rate was significantly higher than that in benign thyroid tumor tissues, the expressions of ER, PR, PCNA play an important role in differentiated thyroid cancer onset and development, and there were correlation among the three indexes. Therefore, combined detection of ER, PR, PCNA in the diagnosis and treatment of differentiated thyroid cancer has important value.

Differentiated thyroid cancer; Estrogen receptor;Progesterone receptor ; Proliferating cell nuclear antigen; Expression; Value

432000 湖北省孝感市中心醫(yī)院腫瘤科(黃霞、劉景麗、吳健松、李向榮)； 430064 武警湖北總隊(duì)醫(yī)院消化內(nèi)科(陳亮)

陳亮，E-mail:15337126775@163.com

10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.06.011

2014-12-16)