HPLC法測定地膚子凝膠中地膚子皂苷Ic的質(zhì)量分?jǐn)?shù)*

羅國平，孟會寧，陳 程，張存勞，王小寧，趙 寧

(1.西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，陜西 西安 710021；2.山東步長醫(yī)藥銷售有限公司，山東 菏澤 274418)

地膚子為藜科植物地膚(Kochia scoparia L Schrad)的干燥成熟果實，我國大部分地區(qū)均有分布。其性寒、味甘苦，用于小便澀痛、陰癢帶下、風(fēng)疹、濕疹、皮膚瘙癢等癥[1]。地膚子凝膠劑主含地膚子皂苷，具有清熱利濕、祛風(fēng)止癢等功效，用于治療瘙癢、濕疹等皮膚科疾病[2]。據(jù)報道，地膚子皂苷Ic為地膚子皂苷中抗瘙癢，抗炎和抗過敏作用的主要有效成分之一[3-6]。為此，在制定地膚子凝膠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，筆者選取地膚子皂苷Ic作為其定量控制指標(biāo)。

據(jù)查，地膚子皂苷Ic 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定方法主要有：比色法、薄層色譜法、高效液相色譜-紫外檢測器法和高效液相色譜-二極管陣列檢測器法等[7-10]。筆者選取高效液相色譜-紫外檢測器法，色譜條件為色譜柱填充劑為十八烷基硅烷化鍵合硅膠，流動相為甲醇-冰醋酸溶液混合溶劑，檢測器為紫外檢測器，檢測波長為208 nm。該法具有分離效率高、選擇性好、分析速度快、檢測靈敏度高和操作簡單的特點，可用于地膚子凝膠中地膚子皂苷Ic的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

地膚子皂苷Ic對照品：批號201203，上?；菡\生物科技有限公司；地膚子凝膠劑：批號20131101，20131102，20131103，自制；甲醇：色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；冰醋酸：分析純，天津市耀華化學(xué)試劑有限責(zé)任公司；水：超純水，自制。

高效液相色譜儀：1260型，安捷倫科技有限公司；紫外可見分光光度計：UV-2012型，尤尼柯(上海)儀器有限公司；酸度計：PB-10型，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司；超聲波清洗器：KQ-5200E型，昆山市超聲儀器有限公司；精密電子天平：ALC-210.4型，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 溶液的配制

1.2.1.1 地膚子皂苷Ic對照品溶液的配制

取地膚子皂苷Ic對照品約6 mg，精密稱量，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，得到ρ(地膚子皂苷Ic)=246.0 μg/mL的對照品溶液。

1.2.1.2 供試品溶液的配制

稱取地膚子凝膠約5 g，精密稱量，置25 mL容量瓶中，加50%(體積分?jǐn)?shù)，后同)甲醇溶液，超聲30 min，充分溶解，放冷，用體積分?jǐn)?shù)50%甲醇溶液定容至刻度，搖勻，過濾，取濾液，即得。

1.2.1.3 空白對照溶液的配制

取空白基質(zhì)約0.5 g，置25 mL容量瓶中，照“1.2.1.2”項下方法處理，即得。

1.2.2 檢測波長的確定

將“1.2.1.1”項下的地膚子皂苷Ic對照品溶液適當(dāng)稀釋后，用紫外分光光度計進行掃描，波長范圍為200～400 nm。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-φ(冰醋酸)=1.3%水溶液(體積比85∶15)；柱溫20 ℃，流速1.0 mL/min，檢測波長208 nm，進樣量20 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的確定

紫外掃描圖譜見圖1。

λ/nm圖1 地膚子皂苷Ic紫外掃描圖

由圖1可以看出，地膚子皂苷Ic溶液在波長208 nm處有最大吸收，故以該波長作為質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定的檢測波長。

2.2 供試品溶液制備溶劑的選擇

稱取地膚子凝膠5 g，分別加入水、體積分?jǐn)?shù)50%甲醇溶液和甲醇 3種溶劑各50 mL，超聲溶解并放置4 h，結(jié)果見表1。

表1 不同溶劑對地膚子凝膠劑的溶解性比較

實驗結(jié)果表明，地膚子凝膠劑在水、甲醇中均未完全溶解，而在φ(甲醇)=50%中溶解度較大，故采用體積分?jǐn)?shù)50%甲醇作為制備供試品溶液的溶劑。

2.3 專屬性確定

取“1.2.1”項下的地膚子皂苷Ic對照品溶液，供試品溶液和陰性對照溶液，按照“1.2.3”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，見圖2。

t/mina 對照品

t/minb 樣品

t/minc 空白樣品 圖2 對照品、樣品和空白樣品HPLC色譜圖

結(jié)果表明，在上述色譜條件下，供試品溶液中地膚子皂苷Ic的色譜峰與雜質(zhì)峰之間能得到很好的分離，且空白基質(zhì)對主藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定無干擾，方法專屬性良好，

2.4 線性關(guān)系的考察

精密量取“1.2.1.1”項下地膚子皂苷Ic 對照品溶液(質(zhì)量濃度為246.0 μg/mL)8、11、14、17、20 mL，分別置于20 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制備成一系列地膚子皂苷Ic對照品溶液，ρ(地膚子皂甙Ic)分別為98.4、135.3、172.2、209.1、246.0 μg/mL。精密吸取上述溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。以地膚子皂苷Ic對照品溶液的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，地膚子皂苷Ic峰面積(y)為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，回歸方程為：y=4.395 7x+310.87，r=0.999 5，ρ(地膚子皂苷Ic)在98.4～246.0 μg/mL呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實驗

取同一地膚子皂苷Ic 對照品溶液，進樣量為20 μL，重復(fù)進樣5次，按“1.2.3”項色譜條件下測定地膚子皂苷Ic的峰面積，計算地膚子皂苷Ic峰面積的RSD為0.95%，表明檢測儀器的精密度良好。

2.6 重復(fù)性實驗

取同一批地膚子凝膠5份，分別精密稱量，照“1.2.1.2”項下方法制備供試品溶液，依法進樣，進樣量為20 μL，按“1.2.3”項色譜條件測定其峰面積，并求w(地膚子皂苷Ic)，計算平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為662 μg/g，RSD為1.79%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗

分別取同一地膚子凝膠供試品溶液，分別于0，1，2，4，6，10 h，按“1.2.3”項下色譜條件進行測定，進樣量為20 μL，測定其峰面積，求得地膚子皂苷Ic 峰面積的RSD為2.12 %，表明供試品溶液中地膚子皂苷Ic在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率實驗

精密稱取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的地膚子凝膠供試品溶液9份，分別精密加入低、中、高濃度的3種地膚子皂苷Ic對照品溶液(每個濃度平行做3份)，按本方法測定，分別計算加樣回收率和RSD，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，地膚子皂苷Ic的回收率均在93.4%～100.6%，平均回收率為97.7%，說明方法的準(zhǔn)確性良好。

表2 加樣回收率實驗結(jié)果(n=3)

2.9 地膚子凝膠中w(地膚子皂苷Ic)測定

取地膚子凝膠3份，每份約5 g，精密稱量，照“1.2.1.2”項下方法分別制備供試品溶液，分別精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，照“1.2.3”項下色譜條件測定，記錄峰面積，計算地膚子凝膠劑中w(地膚子皂苷Ic)，結(jié)果見表3。

表3 樣品中藥物質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定(n=3)

3 結(jié) 論

采用高效液相色譜-紫外檢測器法測定地膚子凝膠中地膚子皂苷Ic的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，色譜條件為Agilent HC-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，甲醇-φ(冰醋酸)=1.3%水溶液(體積比85∶15)作為流動相，柱溫20 ℃，流速1.0 mL/min，檢測波長208 nm。此方法快速簡便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，重復(fù)性良好，可作為地膚子凝膠劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定量檢測方法。

[ 參 考 文 獻 ]

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