李兵，盧汝梅，黃志其，潘立衛(wèi)，閻莉

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南寧 530001；2.河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，河池 546300)

·藥物制劑與藥品質(zhì)量控制·

九龍盤藥材質(zhì)量控制*

李兵1，盧汝梅1，黃志其1，潘立衛(wèi)2，閻莉1

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南寧 530001；2.河池學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，河池 546300)

目的 建立壯藥九龍盤藥材的質(zhì)量控制方法。方法 采用薄層色譜法對九龍盤進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜(HPLC)法測定其中沒食子酸的含量，色譜柱為Aichrom Reliasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸(4：96)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長270 nm，柱溫26 ℃。結(jié)果 九龍盤藥材薄層色譜鑒別特征明顯，專屬性強(qiáng)；沒食子酸進(jìn)樣量在0.08～0.56 μg之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=1.000 0)，平均加樣回收率101.12%，RSD 2.20% (n=6)。結(jié)論 所建立的定性定量測定方法簡單可行，準(zhǔn)確可靠，可用于九龍盤藥材的質(zhì)量控制參考。

九龍盤；沒食子酸；質(zhì)量控制

壯藥九龍盤為蓼科植物金線草[Antenoronfiliforme(Thunb.)Roberty et Vautier]的全草，具有涼血止血、清熱利濕、散瘀止痛之功效。主治咳血、吐血、便血、血崩、痢疾、胃痛、經(jīng)期腹痛、跌打損傷、風(fēng)濕痹痛、癰腫等癥[1-2]。九龍盤在廣西壯族自治區(qū)多有分布，是壯醫(yī)臨床常用解毒藥。該藥具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗凝血等藥理作用[3]，但其化學(xué)成分的研究筆者未見報(bào)道。文獻(xiàn)顯示，同屬植物短毛金線草中含有沒食子酸、(-)-兒茶-精、(-)-表兒茶精、(-)-表兒茶精-3-O-沒食子酸酯、原矢車菊素等酚類成分[2]。筆者通過化學(xué)成分初步研究，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的九龍盤藥材中均含有沒食子酸，該成分味澀，具有收斂、止血、抑制白念珠菌生物膜[4]等作用，與九龍盤的藥效具有一定的相關(guān)性，如臨床上常用的涼血止血藥地榆飲片就測定沒食子酸的含量來控制質(zhì)量[5]。目前沒食子酸的測定方法較多，主要是通過高效液相色譜(HPLC)法測定，如阿米樂努西達(dá)日蜜膏中沒食子酸的含量測定[6]、反相高效液相色譜法測定柿蒂中沒食子酸的含量[7]等。筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用沒食子酸對照品，用薄層色譜法對不同產(chǎn)地九龍盤藥材進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法測定其中沒食子酸的含量，建立九龍盤藥材的質(zhì)量控制方法，以期為其質(zhì)量控制和制劑開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-20A高效液相色譜儀(紫外檢測器)；Aichrom Reliasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。Millipore Simplicity- 185 超純水儀( 美國密里博公司)。天平(德國塞多利斯BP211D，感量：0.1 mg)。

1.2 試藥 沒食子酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110831-200803，含量≥98%)；水為自制超純水，甲醇(色譜純，批號：A452-4)、乙腈(色譜純，批號：A998-4)均購買于西隴化工股份有限公司。廣西不同產(chǎn)地九龍盤藥材(表1)，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定為蓼科植物金線草[Antenoronfiliforme(Thunb.)Roberty et Vautier]的全草，標(biāo)本保存于廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥化學(xué)教研室。

表1 10批不同產(chǎn)地九龍盤藥材及其沒食子酸含量測定結(jié)果

Tab.1 Determination results of galli acid content in 10 batches ofAntenoronfiliformefrom different origins

序號產(chǎn)地批號沒食子酸含量/(mg·g-1)JLP1廣西南寧市上林縣西燕鎮(zhèn)201106220．27JLP2廣西南寧市茅橋植物園201106170．71JLP3廣西南寧市武鳴縣大明山頂201107050．35JLP4廣西南寧市武鳴縣大明山腳201010270．72JLP5廣西玉林市桂平縣金田鄉(xiāng)201104111．21JLP6廣西桂林市金秀縣金秀鎮(zhèn)201105261．12JLP7廣西南寧市水街201107251．01JLP8廣西桂林市金秀縣圣塘山201107250．81JLP9廣西梧州市藤縣平福鄉(xiāng)201103201．68JLP10廣西桂林市金秀縣三角鄉(xiāng)201104101．28

2 方法與結(jié)果

2.1 九龍盤藥材的薄層色譜鑒別

2.1.1 對照品溶液的制備 取沒食子酸對照品2.1 mg，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取九龍盤藥材粉末(過2號篩網(wǎng))約2 g，置錐形瓶，加水50 mL，密塞，超聲提取30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤爰状? mL溶解，作為供試品溶液。

2.1.3 沒食子酸的薄層鑒別 按“2.1.2”項(xiàng)制備10批不同產(chǎn)地藥材的供試品溶液，在高效薄層硅膠G板(青島勝海精細(xì)硅膠化工有限公司)點(diǎn)樣，以三氯甲烷：乙酸乙酯：甲酸(5：4：1)為展開劑，噴5%氯化鐵(FeCl3)乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，重復(fù)性較好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。

2.2 九龍盤藥材中沒食子酸含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Aichrom Reliasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(4：96)；檢測波長：270 nm，流速：1.0 mL·min-1；柱溫：室溫。理論板數(shù)按沒食子酸計(jì)算應(yīng)不少于5 000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取沒食子酸對照品4.0 mg，精密稱定，加甲醇使溶解并稀釋至100 mL，搖勻，即得每毫升含40 μg的對照品溶液。

1.JLP-4；2.JLP-1 ；3.JLP-2；4.JLP-3；5.JLP-7；6.JLP-6；7.沒食子酸對照；8.空白溶劑；9.JLP-9；10.JLP-5；11.JLP-10；12.JLP-8

圖1 不同產(chǎn)地九龍盤藥材薄層色譜圖

1.JLP-4；2.JLP-1；3.JLP-2；4.JLP-3；5.JLP-7；6.JLP-6；7.Gallic acid standard；8.Blank solvent；9.JLP-9；10.JLP-5；11.JLP-10；12.JLP-8

Fig.1 TLC ofAntenoronfiliformefrom different origins

2.2.3 供試品溶液的制備 取九龍盤藥材粉末約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷稱質(zhì)量，用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 方法學(xué)考察

2.2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 在“2.2.1”項(xiàng)的色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，14.0 μL，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定，以對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，對應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=3×106X-6 070.9(r=1.000 0)，結(jié)果表明沒食子酸進(jìn)樣量在0.08～0.56 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對照品試液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.2.1” 項(xiàng)色譜條件分別測其峰面積值，計(jì)算得RSD值為2.35%，表明所用儀器精密度良好。

2.2.4.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批(批號：20110622)九龍盤藥材，按“2.2.3”項(xiàng)下的方法制備6份供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL進(jìn)行測定，沒食子酸的平均含量為0.28 mg·g-1，RSD為2.44%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.4.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一批(批號：20110622)九龍盤藥材，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，常溫保存，按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件，分別在放置0，2，4，6，8，12 h后進(jìn)樣10 μL測定。結(jié)果沒食子酸的平均含量為0.30 mg·g-1，RSD為4.48%(n=6)。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品約1 g(批號：20110622)，精密稱定，再分別精密加入0.31 mg·mL-1沒食子酸對照品溶液1 mL，按“2.2.3”項(xiàng)方法平行制備6份供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件，分別測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果平均加樣回收率為101.12%，RSD 2.20%。

2.2.5 樣品含量測定 取九龍盤藥材粗粉各約2 g，精密稱定，按“2.2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL進(jìn)行測定，以峰面積計(jì)算沒食子酸的含量。同一批次藥材平行測定3份，取平均值。對照品色譜圖及樣品色譜圖分別見圖2，3；10批不同產(chǎn)地九龍盤藥材的測定結(jié)果見表1。

1.沒食子酸

3 討論

本實(shí)驗(yàn)含量測定的指標(biāo)成分為沒食子酸，考慮到?jīng)]食子酸呈酸性且極性較大，選用水溶液作為提取溶劑，將水提取液進(jìn)行HPLC分析，發(fā)現(xiàn)提取液較雜質(zhì)干擾少，分離較好，提取率高，且溶劑價(jià)廉易得，安全無毒，操作方便，故選擇水作為提取溶劑。

1.沒食子酸

Fig.3 HPLC chromatograms ofAntenoronfiliforme

從10批不同產(chǎn)地九龍盤中沒食子酸含量測定結(jié)果可以看出，產(chǎn)地對藥材中沒食子酸的含量有明顯影響，其中含量最高的為廣西梧州市藤縣平福鄉(xiāng)樣品(1.68 mg·g-1)，最低的為廣西南寧市上林縣西燕鎮(zhèn)樣品(0.27 mg·g-1)。

筆者在本實(shí)驗(yàn)所采用方法簡單可行，準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，重現(xiàn)性好，建立了壯藥九龍盤藥材的薄層鑒別和含量測定方法，可為九龍盤藥材的品質(zhì)評價(jià)和質(zhì)量控制提供指導(dǎo)。

[1] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志(第25卷)[M].北京：科學(xué)出版社，1995：106-108.

[2] 國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì).中華本草[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：627.

[3] 黃勇其，駱紅梅，陳秀芬，等.金線草藥理作用初步研究[J].中成藥，2004，26(11)：918-921.

[4] 汪長中，程惠娟，官妍，等.沒食子酸抑制白念珠菌生物膜作用的研究[J].中國中藥雜志，2009，34(9)：1137-1140.

[5] 孫立立，江波，袁振海，等.HPLC測定地榆飲片中沒食子酸的含量[J].中成藥，2006，28(8)：1144-1147.

[6] 希爾艾力·吐爾遜，曼爾丹·尼牙孜，庫爾班尼沙·買提卡思木，等.阿米樂努西達(dá)日蜜膏中沒食子酸的含量測定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，31(3)：350-352.

[7] 王初，胡曉煒，宋旭峰.反相高效液相色譜法測定柿蒂中沒食子酸的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2005，24(8)：728-729.

DOI 10.3870/yydb.2015.03.021

Quality Control ofAntenoronfiliforme

LI Bing1，LU Rumei1， HUANG Zhiqi1， PAN Liwei2， YAN Li1

(1.PharmaceuticalCollege，GuangxiUniversityofChineseMedicine，Nanning530001，China；2CollegeofChemistryandBiologicalEngineering,HechiUniversity，Hechi546300，China)

Objective To establish the quality control method forAntenoronfiliforme. MethodsAntenoronfiliformewas identified by TLC，and the content of gallic acid was determined by HPLC.The chromatographic conditions were as follows: Aichrom Reliasil C18column (4.6 mm×250 mm，5 μm) was used with mobile phase consisted of acetonitrle-0.1% phosphoric acid(4：96)，the flow rate was 1.0 mL·min-1，and the detection wavelength was 270 nm. Results TLC identification forAntenoronfiliformewas highly specific.Gallic acid content had a good linearity in the range of 0.08-0.56μg (r=1.000 0).The average recovery was 101.12% and RSD was 2.20% (n=6). Conclusion The method is simple， feasible，and reproducible，and can be used for the quality control ofAntenoronfiliforme.

Antenoronfiliforme;Gallic acid;Quality control

2014-03-07

2014-04-20

*廣西自然科學(xué)基金創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目“中藥新藥基礎(chǔ)研究”(2011GXNSFF018006)；廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局項(xiàng)目(MZY2010011)

李兵(1982-)，男，廣西梧州人，講師，碩士，主要從事中藥化學(xué)成分及質(zhì)量控制研究。E-mail：gxlb0910@163.com。

盧汝梅(1969-)，女，廣西陸川人，教授，博士，主要從事中藥化學(xué)成分和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：lrm1969@163.com。

R286；R927.1

B

1004-0781(2015)03-0358-03