袁新敏 青 松

(內(nèi)蒙古自治區(qū)食品藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

烏蘭十三味湯散是由土木香、苦參、懸鉤子木、山奈、訶子、川楝子、梔子、茜草、枇杷葉、紫草茸、橡子、紫草、金蓮花等13 味藥組成的復方蒙藥制劑。梔子為處方中治療熱病的主味藥，文獻記載［1］其中含有梔子苷、羥異梔子甙、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷、山梔苷等8 種以上活性成分，主要為梔子苷。因此本文對制劑中的梔子苷進行了HPLC含量測定方法研究。經(jīng)方法學考察及陰性對照試驗，表明此法專屬性強，可作為烏蘭十三味湯散的含量測定方法。

1 樣品來源

樣品由內(nèi)蒙古庫倫蒙藥廠(批號100315)、烏蘭浩特中蒙制藥有限公司(批號060304、060505)提供。

2 儀器與試藥

2.1 儀器：島津LC-10ATVP 泵SPD-10A 型檢測器，SCL-20A 色譜工作站。

2.2 試劑與試藥：梔子苷對照品(批號：110749-200714)購自中國食品藥品檢定研究院;甲醇為分析純和色譜純，乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

3 分析方法驗證

3.1 色譜條件：色譜柱：色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實驗研究采用Phenomenex C18 柱(250mm ×4.6mm，5μ)和Shim-packC18 柱(250 mm × 4.6mm，5μ)兩種品牌色譜柱;流動相：乙腈-水(15：85);流速：1mL/min;檢測波長為238nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計不得低于1500。

3.2 供試品溶液的制備：取本品約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率50Hz)30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，濾液用0.45μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.3 對照品溶液的制備：精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每1mL 約含60ug 的溶液，即得。

3.4 陰性對照試驗：取按處方量并以相同工藝制備的陰性對照(缺梔子)1g，按含量測定項下的方法操作，進樣量10μl。測得結(jié)果為：陰性對照色譜圖中在梔子苷對照品色譜圖中相對應的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)。表明其它成分對梔子苷的測定無干擾。見圖1 ～3。

圖1 陰性對照色譜圖

圖2 對照品色譜圖

圖3 供試品色譜圖

3.5 線性關(guān)系考察：精密稱取梔子苷對照品3.35mg，置25mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(濃度為0.134mg/mL)。分別精密吸取2、5、10、15、20μL 進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對進樣量進行回歸分析，結(jié)果梔子苷在242.8ng ～2428ng 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y =1515.7X-9962，r=0.99998。

3.6 穩(wěn)定性試驗：取同一份供試品溶液，分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h、進樣測定，結(jié)果表明梔子苷在24h 內(nèi)的面積積分值基本穩(wěn)定不變。RSD 為0.2(%)。

3.7 重復性試驗：取同一批號(批號100315)供試品6 份，各取約1.0g，分別按含量測定項下方法操作，測定每份含量，結(jié)果平均含量為6.1985mg/g，RSD 為0.7%。

3.8 加樣回收試驗：取供試品(批號100315，含量6.1985mg/g)6 份，各約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別依次精密加入梔子苷對照品3.00mg，再精密加入甲醇50 mL，搖勻，稱定重量，分別按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定每份含量，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 梔子苷加樣回收試驗結(jié)果

4 樣品含量測定

取本品按質(zhì)量標準［含量測定］項下的方法處理并測定，3 批樣品的測定結(jié)果見表2。

表2 樣品中梔子苷含量測定結(jié)果

5 討 論

5.1 提取效率：取5 份樣品分別超聲處理(功率為400w，頻率為40KHZ)10 min 、20 min、30 min、40 min、50 min，按上述色譜條件測定，結(jié)果超聲處理30min 后，梔子苷的總含量基本不再增加，故確定超聲時間為30min。

5.2 檢測波長的選擇：取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每1mL 含0. 060mg 的溶液，通過二極管陣列檢測器，自190nm ～700nm 進行光譜掃描，結(jié)果梔子苷在238nm 處有最大吸收并無干擾。結(jié)合《中國藥典》2010 年版一部梔子藥材項下含量測定方法，采用238nm 作為檢測波長。

5.3 換不同廠家、不同型號的色譜柱，按確定的色譜條件進行測定，結(jié)果分離效果好，測的結(jié)果一致。

5.4 運用HPLC 法測定烏蘭十三味湯散中梔子苷的含量，方法簡便、分離良好、結(jié)果準確，為全面客觀地建立烏蘭十三味湯散質(zhì)量標準提供了依據(jù)。

［1］常全新，丁麗霞.中藥活性成分分子手冊［M］.下冊.學苑出版社，2002：1997.

［2］國家藥典委員會.中國藥典［S］. 一部.2010.