田朝陽(yáng)，劉守桃，荊 韜，張 欣，楊穎珊

(1.海南金港生物技術(shù)股份有限公司,?？?571100;2.蘇州藥明康德新藥開發(fā)有限公司,江蘇蘇州 215104)

研究報(bào)告

中老年食蟹猴血液生理和生化指標(biāo)測(cè)定與比較

田朝陽(yáng)1，劉守桃2，荊 韜2，張 欣2，楊穎珊1

(1.海南金港生物技術(shù)股份有限公司,海口 571100;2.蘇州藥明康德新藥開發(fā)有限公司,江蘇蘇州 215104)

目的 提供中老年實(shí)驗(yàn)食蟹猴的一般生理指標(biāo)、血液生理生化指標(biāo)的參考值。方法 選取119只11～16歲食蟹猴,雄性80只,雌性39只,分別檢測(cè)其一般生理指標(biāo)(體重、體長(zhǎng)和腰圍)、血液學(xué)指標(biāo)和血液生化學(xué)指標(biāo),并進(jìn)行性別間比較。結(jié)果 雌雄動(dòng)物相比,一般生理指標(biāo)包括體重、體長(zhǎng)和腰圍差異有顯著性(P＜0.01);血常規(guī)指標(biāo)中NEUT#、LYMPH#、EO#、BASO#、NEUT%、LYMPH%、EO%、BASO%、MCV、MCH、RDW-CV、PCT、MONO%、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.05),其余差異無顯著性(P＞0.05);血生化指標(biāo)中TBIL、ALB、GLO、A/G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK、ALT、GGT差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.05),其余差異無顯著性(P＞0.05)。結(jié)論 本研究提供了中老年食蟹猴一般生理指標(biāo)、血液學(xué)和血液生化學(xué)的背景數(shù)據(jù),為其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用提供參考資料。

食蟹猴;體重;體長(zhǎng);腰圍;血液學(xué);血液生化學(xué)

非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物在親緣關(guān)系上和人最接近,與人類的遺傳物質(zhì)有75%～98.5%的同源性[1],在組織結(jié)構(gòu)、免疫、生理和代謝等方面與人類高度近似,是極其珍貴的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,其應(yīng)用價(jià)值遠(yuǎn)超過其他種屬的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物[2]。近年來,國(guó)外對(duì)非人靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的需求量逐年增加,國(guó)內(nèi)非人靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖企業(yè)每年出口實(shí)驗(yàn)猴約2萬只,約占美國(guó)市場(chǎng)份額的62%以上,歐洲市場(chǎng)份額的100%。此外,每年面向國(guó)內(nèi)銷售約1萬只。與此同時(shí),我國(guó)的實(shí)驗(yàn)猴養(yǎng)殖事業(yè)有了長(zhǎng)足的發(fā)展,據(jù)中國(guó)實(shí)驗(yàn)靈長(zhǎng)類養(yǎng)殖開發(fā)協(xié)會(huì)(CLPA)2012年底統(tǒng)計(jì)顯示全國(guó)實(shí)驗(yàn)獼猴和食蟹猴的總存欄量已超過29萬只,其中食蟹猴高達(dá)25萬多只[3]。伴隨著時(shí)間的推移,必將有大量的食蟹猴邁入中老年階段(年齡≥10歲為中年猴;年齡＞15歲為老年猴)[4],這就為人類慢性疾病研究所亟需的自發(fā)性靈長(zhǎng)類動(dòng)物疾病模型的篩選提供了豐富的資源基礎(chǔ)。

因而,建立中老年食蟹猴常規(guī)的臨床血液生理和生化指標(biāo)不僅對(duì)其應(yīng)用提供重要的參考意義,也為標(biāo)準(zhǔn)化的生產(chǎn)管理和日常疾病的診斷發(fā)揮著日益重要的作用。本研究對(duì)119只11～16歲的食蟹猴的一般生理指標(biāo)(體重、體長(zhǎng)和腰圍)、血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)進(jìn)行了全面系統(tǒng)的測(cè)定,并進(jìn)行了性別間的比較,為食蟹猴在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用提供參考信息。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

食蟹猴119只,雄性80只,雌性39只。級(jí)別:普通級(jí);年齡:11～16歲;動(dòng)物生產(chǎn)單位:海南金港生物技術(shù)股份有限公司【SCXK(瓊)2010-0001】。實(shí)驗(yàn)于海南金港生物技術(shù)股份有限公司的普通級(jí)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行【SYXK(瓊)2014-0017】。飼養(yǎng)條件:單籠飼料,飼喂膨化飼料,動(dòng)物自由飲水。1.2 測(cè)定方法

1.2.1 一般生理指標(biāo)(體重/body weight、體長(zhǎng)/ crown-rump length和腰圍/waist circum ference)測(cè)定:動(dòng)物空腹時(shí)間＞16 h,上午8:00～11:00稱重,稱重前肌注舒泰50(0.1 mL/kg BW)進(jìn)行麻醉,采用嬰兒秤進(jìn)行稱量;體長(zhǎng)和腰圍測(cè)定均采用皮尺,測(cè)定時(shí)把已麻醉好的動(dòng)物側(cè)躺,自然伸直,體長(zhǎng)測(cè)量是自頭頂部順著背部中線自然延伸至尾根部,腰圍測(cè)量是皮尺自肚臍處環(huán)繞一周,松緊適中即可。

1.2.2 血液生理指標(biāo)測(cè)定:如1.2.1所述進(jìn)行動(dòng)物的空腹、麻醉和采集靜脈血2 mL。應(yīng)用邁瑞B(yǎng)C-5500全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及配套試劑進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè),檢測(cè)項(xiàng)目為:白細(xì)胞數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞數(shù)目(NEUT#)、淋巴細(xì)胞數(shù)目(LYMPH#)、單核細(xì)胞數(shù)目(MONO#)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目(EO#)、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)目(BASO#)、中性粒細(xì)胞百分比(NEUT%)、淋巴細(xì)胞百分比(LYMPH%)、單核細(xì)胞百分比(MONO%)、嗜酸性粒細(xì)胞百分比(EO%)、嗜堿性粒細(xì)胞百分比(BASO%)、紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、RBC平均體積(MCV)、RBC平均血紅蛋白含量(MCH)、RBC平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(RDW-CV)、紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差(RDW-SD)、血小板總數(shù)(PLT)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、血小板壓積(PCT)。

1.2.3 血液生化指標(biāo)測(cè)定:如1.2.1所述進(jìn)行動(dòng)物的空腹、麻醉和采集靜脈血3 mL,離心取血清,應(yīng)用東芝120全自動(dòng)生化儀及上海科華檢測(cè)試劑盒進(jìn)行血液生化學(xué)檢測(cè),檢測(cè)項(xiàng)目為:谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、白球比(A/G)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、葡萄糖(GLU)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、總膽固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)。

1.3 結(jié)果處理

應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,結(jié)果以Mean±SD表示,采用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法,比較各測(cè)定指標(biāo)雌雄間差異,顯著性差異水平α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 一般生理指標(biāo)

雌、雄性動(dòng)物的體重、體長(zhǎng)和腰圍指標(biāo)差異極顯著(P＜0.01),雄性高于雌性(表1)。

表1 中老年食蟹猴一般生理指標(biāo)Tab.1 The general physiological index ofmiddle and old-aged cynomolgusmonkey

2.2 血液學(xué)指標(biāo)

雄性動(dòng)物的NEUT#、LYMPH#、EO#、BASO#、NEUT%、LYMPH%、EO%、BASO%、MCV、MCH、RDW-CV、PCT與雌性動(dòng)物相比差異極顯著(P＜ 0.01),MONO%、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV與雌性動(dòng)物相比差異極顯著(P ＜0.05),僅有WBC、MONO#、RBC、PLT、PDW與雌性動(dòng)物相比差異不顯著(P＞0.05)(表2)。

表2 中老年食蟹猴血液常規(guī)指標(biāo)Tab.2 The hematology value ofmiddle and old-aged cynomolgusmonkey

2.3 血液生化學(xué)指標(biāo)

雄性動(dòng)物的 TBIL、ALB、GLO、A/G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK與雌性動(dòng)物相比差異極顯著(P＜0.01),ALT、GGT與雌性動(dòng)物相比差異極顯著(P＜0.05),僅有AST、TP、LDH與雌性動(dòng)物相比差異不顯著(P ＞0.05) (表3)。

3 討論

藥物的藥效學(xué)研究、臨床前安全性評(píng)價(jià)研究是新藥研發(fā)的核心內(nèi)容。積累動(dòng)物的背景資料諸如體重及常規(guī)血液生理生化指標(biāo)等就顯得尤為重要,5歲以下的研究結(jié)果已發(fā)表[5],但有關(guān)中老年食蟹猴(＞10歲以上)的相關(guān)背景資料卻鮮見報(bào)道。

表3 中老年食蟹猴血液生化學(xué)指標(biāo)Tab.3 The blood biochemistry parameters ofmiddle and old-aged cynomolgusmonkey

本研究測(cè)得的中老年食蟹猴(11～16歲)一般生理指標(biāo)(體重、腰圍、體長(zhǎng))表現(xiàn)出極顯著的性別差異。結(jié)合李冰[6]的研究結(jié)果,我們可以得出,隨著年齡的增長(zhǎng)食蟹猴雌雄間體重的差異性會(huì)越來越顯著。這就要求我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)方案制定時(shí)注意不同年齡段雌雄間一般生理指標(biāo)的差異。

本研究測(cè)得的中老年食蟹猴血液學(xué)以及血液生化學(xué)指標(biāo)結(jié)果表明雌雄間在NEUT#、LYMPH#、EO #、BASO#、NEUT%、LYMPH%、EO%、BASO%、MCV、MCH、RDW-CV、PCT、MONO%、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV和TBIL、ALB、GLO、A/G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK、ALT、GGT等指標(biāo)方面存在顯著性差異。李巖[7]等研究顯示4～7歲食蟹猴在WBC、ALP、CHO、CRE和GLU指標(biāo)上有性別差異,唐賢麗[8]等研究顯示3～5歲食蟹猴僅有GLU存在性別差異,石巧娟[5]等研究結(jié)果顯示UREA、CK值與性別有密切關(guān)系,結(jié)合本研究可以得出伴隨著年齡的增長(zhǎng)這種性別差異依然存在,并且存在著如上所述更多血液生理生化指標(biāo)的性別差異。說明隨著食蟹猴年齡的增長(zhǎng),雌雄個(gè)體間血液生理生化指標(biāo)的差異更多且顯著。

通過與已有報(bào)道相比較,發(fā)現(xiàn)在RBC、PLT、GLU和TP等重要血液生理生化指標(biāo)上沒有年齡相關(guān)性,各年齡結(jié)果基本一致,而WBC、HGB和TC等指標(biāo)則出現(xiàn)中老年動(dòng)物比青壯年的偏低,而中老年雌性動(dòng)物TG高于其他年齡段的動(dòng)物。

進(jìn)一步與中老年人相關(guān)血液生理生化的關(guān)鍵指標(biāo)比較可知,人類的GLU、TCH和TG比中老年食蟹猴的偏高,WBC、RBC和PLT則偏低,而HGB則基本一致[9-11]。

已有研究表明,伴隨著年齡的增長(zhǎng),猴自發(fā)性動(dòng)物疾病模型的發(fā)生率就會(huì)增加[12],并且自發(fā)性動(dòng)物模型在研究人類疾病時(shí)具有重要價(jià)值[13],尤其是自然衰老靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型在特征和發(fā)生機(jī)制方面能較全面的反映人類衰老基本清況[14],這就為中老年食蟹猴動(dòng)物疾病模型的篩選和開發(fā)利用提供了較為基礎(chǔ)的研究背景資料。

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Com parative study on values of blood physiological and biochem ical for m iddle and old-aged cynomolgusmonkey

TIAN Chao-yang1,LIU Shou-tao2,JING Tao2,ZHANG Xin2,YANG Ying-shan1
(1.Hainan Jingang Biotech Co.,Ltd,Haikou 571100,China;2.Wuxi AppTec(Suzhou) Co.,Ltd,Jiangsu Suzhou 215104,China)

Objective To provide reference of the general physiological index,blood physiology and biochemistry formiddle and old-aged cynomolgusmonkey.M ethods 119 cynomolgusmonkey aged from 11～16(80 weremales and 39 were females)were involved in the study.We detected the general physiological index(body weight,the crown-rump length and waist circum ference),hematology and blood biochemistry parameters respectively and compared these parameters betweenmales and females.Results Between males and females,there were significant differences in Body weight,the crown-rump length and Waist circumference of the general physiological index(P＜0.01),NEUT#、LYMPH#、EO#、BASO#、NEUT%、LYMPH%、EO%、BASO%、MCV、MCH、RDW-CV、PCT、MONO%、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV of hematology(P＜0.01 or P＜0.05)and TBIL、ALB、GLO、A/G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK、ALT、GGT of blood biochemistry(P＜0.01 or P＜0.05).There were no significant differences in other parameters(P ＞0.05).Conclusion Itprovides reference ofgeneral physiological index,blood physiology and biochemistry parameters of cynomolgusmonkey and basis for their application in biomedical domain.

Cynomolgus monkey;Body weight;Crown-rump length;Waist circumference;Hematology;Blood biochemistry

R332

A

1671-7856(2015)03-0013-05

10.3969.j.issn.1671.7856.2015.003.03

2014-12-01

2012年海南省重點(diǎn)科技計(jì)劃項(xiàng)目(ZDXM20120041)。

田朝陽(yáng)(1981-),男,碩士,從事靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科研工作。E-mail:chaoyangtian@163.com。