庭永君 陳德林 世 琨 楊 宇

遵義市118例手足口病的核酸檢測統(tǒng)計學(xué)分析

庭永君 陳德林 世 琨 楊 宇

目的 研究2011年遵義市爆發(fā)的手足口病核酸檢測與分型的關(guān)系，了解此次手足口病核酸檢測的臨床意義。方法 采用信號引物轉(zhuǎn)移定性聚合酶鏈反應(yīng)測定患者鼻咽分泌物、大便和痰標(biāo)本中的薩科奇病毒A16型（coxsackievirus，CA16）、腸道病毒71型（enterovirus71，EV71）和腸道病毒通用型(universal enterovirus，EV+）三種核酸RNA的載量，用全自動羅氏480PCR分析儀進行核酸陰陽性分析。結(jié)果 手足口病核酸RNA定性檢出陽性率為58.2%，這次流行以EV+為主占45.1%，其次EV71占31.1%，CA16占16.4%，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)。而且混合感染比例占31.1%，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 這次遵義市手足口病流行感染主要是以EV+為主，以及EV+與EV71或CA16混合感染的手足口病，其次是單純的EV+，EV71和CA16單一病毒感染的手足口病。

手足口病；腸道病毒通用型 EV+；柯薩奇病毒A16；腸道病毒71型 EV71

手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，多發(fā)于5歲以下兒童，主要表現(xiàn)有口痛、厭食、低熱[1-2]。手、足、口部可出現(xiàn)小皰疹或潰瘍。大部分患兒在一周左右自然愈合，少部分患兒會出現(xiàn)心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜炎等并發(fā)癥，病情嚴(yán)重者會導(dǎo)致死亡。由于地域性的差異，流行病的特點也有所不同[3]。因此，手足口病爆發(fā)時探究其病原體類型，分析其在該地的流行病學(xué)特點對后續(xù)的研究和防治具有十分重要的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇貴州省遵義市第一人民醫(yī)院兒科2011年9月～2013年5月收治的118例手足口病患者作為實驗組，其中男83例，女35例，年齡6個月～8歲，平均年齡為（7.31±1.25）歲；以無菌專用棉拭子采集患者鼻咽分泌物密封，加入3～5mL無菌生理鹽水，旋緊管蓋并密封送檢。對照組選取同期本院門診健康兒童鼻咽分泌物標(biāo)本78份，其中男38例，女40例，年齡6個月～9歲，平均年齡（7.12±2.13）歲；加入3～5mL無菌生理鹽水，旋緊管蓋并密封送檢。實驗組與對照組患者在性別、年齡方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 試劑 本次研究所用試劑包括：EV+RNA、EV71 RNA和CA16 RNA，所用試劑從中山大學(xué)達安基因股份有限公司生產(chǎn)的核酸柱中提取，均為批檢合格產(chǎn)品，于-2℃環(huán)境下儲存[4-5]。

1.3 儀器 Lightcycler?480(羅氏480)、eppendorf系列移液器、臺式高速離心機（型號centrifuge 5424）、金屬恒溫器（型號thermomixer compact）、生物安全柜（BIOSafe12）。

1.4 方法

1.4.1 按照實時熒光定量PCR操作規(guī)程和Lightcycler? 480(羅氏480)儀器操作規(guī)程進行檢測，利用每一個擴增檢測到達指數(shù)擴增期起始所需要的擴增循環(huán)數(shù)來進行定性檢測[6]。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和陰陽性質(zhì)控條件進行定性結(jié)果判定分析，確定檢測結(jié)果有效。以CA16（EV71、EV+）基因組編碼區(qū)的高度保守區(qū)為靶區(qū)域，設(shè)計特異性引物及熒光控探針，通過一步法RT-PCR擴增對CA16RNA（EV71RNA、EV+RNA）進行定性檢測。

1.4.2 質(zhì)量控制 陰性質(zhì)控品的增長曲線不是“S”型曲線或無CT值；陽性質(zhì)控品的增長曲線呈“S”型曲線且CT值≤30。結(jié)果判斷：（1）對于CA16：若無典型“S”型擴增曲線或CT值≥34.8，則判斷為CA16陰性；反之則判斷為CA16陽性。（2）對于EV71：與 CA16一致。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS14.0軟件進行統(tǒng)計分析，正態(tài)計量資料采用“±s”表示，組間比較采用t檢驗。計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，組間率（%）的比較采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 本次研究發(fā)現(xiàn)，實驗組的118例患者都來自臨床最終確診為手足口病，除1例死亡外，117例治愈出院。見表1。

表1 手足口病核酸檢測三種病毒EV+EV71 CA16陰性、陽性關(guān)系表[n(%)]

2.2 此次遵義市手足口病爆發(fā)流行以混合感染為主，腸道病毒通用型和腸道病毒71型同時陽性26例，占22.0%；腸道病毒通用型和腸道柯薩奇病毒A16同時陽性12例，占10.2%；腸道病毒通用型，腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16同時陽性2例，占1.7%。對照組78例全部為陰性。見表2。

表2 手足口病核酸檢測三種病毒混合感染及單種病毒感染關(guān)系表[n(%)]

3 討論

手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，腸道病毒感染可導(dǎo)致手足口病、皰疹性咽峽炎、病毒性腦炎、無菌性腦膜炎、心肌炎等，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡[4-5]。此次對遵義市爆發(fā)性流行的手足口病由于病情重，而且沒有采取皰疹液和大便進行檢測，進行RT-PCR檢測總的陽性率為60.1%，陽性率明顯高于唐彥等的報道[6]。

此次遵義市爆發(fā)性流行的手足口病來勢力兇猛，而且病情較重，以混合病原體感染為主，占33.7%，并非單一病原體所致。

我國手足口病大多呈現(xiàn)CA16和EV71交替流行趨勢[7]，但每次流行往往并非單一病原體感染，而此次遵義市手足口病流行單種病原體感染比例也較高占26.3%，以腸道病毒通用型EV+為主，其次腸道病毒71型，最后是腸道柯薩奇病毒A16，與陳慧等的報道[8]有區(qū)別。

綜上所述，遵義市此次手足口病有別于其它地方報道的手足口病流行，以混合感染為主，而且以腸道病毒通用型為主的病原體感染，此次爆發(fā)流行的手足口病以秋冬季節(jié)為高峰，加上疾病主要分布在市區(qū)為主，感染主要以嬰幼兒為主，在近年來醫(yī)療技術(shù)有了較大進步，因此得到了有效控制。

[1] 孫軍玲，張靜.手足口病流行病學(xué)研究進展[J].中華流行病學(xué)雜志，2009，30(9):973-975.

[2] 李暉，方苓，莫艷玲，等.2008年廣東兒童手足口病流行病學(xué)及病原學(xué)相關(guān)臨床特征分析[J].中華傳染病雜志，2009，27(12):753-755.

[3] 韓建康，張宏，姚文庭，等.113例實驗室確診手足口病流行病學(xué)特征和臨床特點分析[J].中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志，2009，23(6):464-466.

[4] 吳淑蓮，白琚.手足口病并發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染危險因素的回顧性分析[J].廣東醫(yī)學(xué)，2011，32(22):2976-2978.

[5] Kirtaniya BC，Sachdev V，Singla A，et al.Marsupialization: a conservative approach for treating dentigerous cyst in children in the mixed dentition[J].J Indian Soc Pedod Prev Dent，2010，28(3):203-208.

[6] 唐彥，候俊，徐軍，等.實時熒光PCR檢測手足口病病原體方法的建立及初步應(yīng)［J］.中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志，2011，5（8）：617-618.

[7] 王利花，李軍.手足口病的流行病學(xué)及病原學(xué)研究進展[J].中國衛(wèi)生事業(yè)管理，2010，6:419-421.

[8] 陳慧，馬江濤，馬學(xué)昱，等.寧夏手足口病患者病原學(xué)監(jiān)測分析［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2009，31（6）：515.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.6.108

貴州 563002 貴州省遵義市第一人民醫(yī)院檢驗科 （庭永君陳德林 世琨 楊宇）