李朋朋 張繼穎 張 聰

(國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心,河南洛陽(yáng) 471003)

兩種復(fù)方磺胺嘧啶混懸液體外等效性研究

李朋朋 張繼穎 張 聰

(國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心,河南洛陽(yáng) 471003)

目的:為了評(píng)價(jià)自制復(fù)方磺胺嘧咤混懸液與進(jìn)口制劑速服寧是否具有體外等效性。方法:通過(guò)測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)(5、15、30、60、90、120、180、240、300、360min)兩種制劑在四種溶出介質(zhì)(pH=1.4、pH=4.5、pH=6.8及純化水)中的累積溶出量,計(jì)算二者在不同介質(zhì)中的相似因子(f2),考察二者體外溶出曲線的一致性,從而判斷二者是否具有體外等效性。結(jié)果:自制復(fù)方磺胺嘧咤混懸液與速服寧在四種溶出介質(zhì)中的溶出曲線具有一致性。結(jié)論:自制復(fù)方磺胺嘧咤混懸液與速服寧具有一致的體外溶出度表現(xiàn),說(shuō)明二者具有體外等效性。

復(fù)方磺胺嘧咤混懸液;溶出度;一致性

磺胺嘧啶是一種磺胺類抗菌藥物，其抗菌譜較廣，可用于革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌和許多原核生物感染。甲氧芐啶屬抗菌增效劑，其抗菌譜與磺胺類相似而效力較強(qiáng)。復(fù)方磺胺嘧啶混懸液是磺胺嘧啶和甲氧芐啶的復(fù)方制劑，它不僅能提高療效，縮短療程，同時(shí)還能減少耐藥菌株產(chǎn)生，獸醫(yī)臨床上主要用于防治雞大腸桿菌、沙門氏菌感染[1]。

仿制制劑與參比制劑的溶出曲線相似并不意味著二者一定具有生物等效性，但該法可降低二者出現(xiàn)臨床差異的風(fēng)險(xiǎn)。本文通過(guò)4種介質(zhì)溶出曲線的研究，采用合理數(shù)據(jù)分析，充分證明仿制制劑（洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司研制的復(fù)方磺胺嘧啶混懸液）與參比制劑（法國(guó)維克制藥集團(tuán)生產(chǎn)的速服寧）的體外溶出曲線具有同等性。

1 材料與方法

1.1 器材

溶出度測(cè)定儀，型號(hào)：RC-8DS，天津市新天光技術(shù)開發(fā)有限公司；透析袋，規(guī)格8000-14000；高效液相色譜儀，型號(hào)：e2695，美國(guó)Waters公司；酸度計(jì)，型號(hào)：SenenEasy，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；電子分析天平，型號(hào)：Ab-265S，梅特勒-托利多集團(tuán)公司。

1.2 藥品與試劑

速服寧，批號(hào)：4EUV，規(guī)格：100ml：磺胺嘧啶40g+甲氧芐啶8g，法國(guó)維克制藥集團(tuán)；

復(fù)方磺胺嘧啶混懸液，批號(hào)：20140901，規(guī)格：100ml：磺胺嘧啶40g+甲氧芐啶8g，洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司；

鹽酸、冰醋酸、醋酸鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、吐溫80等均為分析純。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 溶出介質(zhì)

各溶出介質(zhì)[2]及配制方法見表1。

表1 溶出介質(zhì)

1.3.2 半透膜前處理

將透析袋剪成10cm段，用純化水洗滌后煮沸10min，冷卻后放4℃保存，做為試驗(yàn)用半透膜。

1.3.3 體外溶出度試驗(yàn)方法

精密稱取1g速服寧與自制復(fù)方磺胺嘧啶溶液，分別置透析袋中，并加入9ml溶出介質(zhì)，透析袋兩端用透析夾夾緊，放入已預(yù)熱至37℃的溶出介質(zhì)中，溶出介質(zhì)體積為900ml，攪拌槳轉(zhuǎn)速為100r/min，分別于5、15、30、60、90、120、180、240、300、360min（pH1.4的溶出介質(zhì)采樣時(shí)間點(diǎn)為5、15、30、60、90、120min）取樣1ml，高效液相色譜法測(cè)定磺胺嘧啶含量。

1.3.4 色譜條件

Agilent HC-C18（150×4.5mm，5μm）色譜柱；以0.025mol/ L磷酸溶液-乙腈-甲醇=70：25：5為流動(dòng)相；流速0.75ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)235nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μl。

各時(shí)間點(diǎn)采集的樣品過(guò)濾，精密量取10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取磺胺嘧啶對(duì)照品，制成濃度為0.16mg/ml的溶液，精密量取10μl，注入液相色譜儀。以外標(biāo)法按峰面積計(jì)算樣品中磺胺嘧啶的含量。

1.3.5 溶出曲線相似性的比較與判定

自制復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧溶出曲線相似性的比較用非模型依賴法中的相似因子（f2）法，將自制復(fù)方磺胺嘧啶混懸液中磺胺嘧啶的平均溶出量與速服寧中磺胺嘧啶的平均溶出量進(jìn)行比較，計(jì)算公式如下。

Rt為t時(shí)間參比制劑平均溶出量；Tt為t時(shí)間仿制制劑平均溶出量；n為取樣時(shí)間點(diǎn)的個(gè)數(shù)。

自制復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧的溶出曲線只要滿足下列（1）中任何一個(gè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)[3]，即可判定二者的溶出曲線具有“相似性”，但至少在其中的一個(gè)溶出介質(zhì)中，參比制劑在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)平均溶出率達(dá)85%以上；只要滿足下列（2）中的任何一個(gè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，即可判定二者溶出曲線具有“同等性”。

（1）相似性

參比制劑在規(guī)定時(shí)間內(nèi)平均溶出率達(dá)85%以上時(shí)，f2因子大于42；

參比制劑在規(guī)定時(shí)間內(nèi)平均溶出率達(dá)50%以上但未達(dá)85%時(shí)，f2因子大于46；

參比制劑在規(guī)定時(shí)間內(nèi)平均溶出率未達(dá)50%時(shí)，f2因子大于53；

（2）同等性

參比制劑在規(guī)定時(shí)間內(nèi)平均溶出率達(dá)85%以上時(shí)，f2因子大于50；

參比制劑在規(guī)定時(shí)間內(nèi)平均溶出率達(dá)50%以上但未達(dá)85%時(shí)，f2因子大于55；

參比制劑在規(guī)定時(shí)間內(nèi)平均溶出率未達(dá)50%時(shí)，f2因子大于61；

2 結(jié)果與分析

自制復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧在四種溶出介質(zhì)中的溶出試驗(yàn)結(jié)果見表2，二者在四種溶出介質(zhì)中溶出曲線的相似性判定結(jié)果見表3。復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧中磺胺嘧啶在四種溶出介質(zhì)中的溶出曲線見圖1。

表3 自制復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧的溶出曲線在四種介質(zhì)中的相似性判定結(jié)果

由試驗(yàn)結(jié)果可知，復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧中磺胺嘧啶在pH=6.8的溶出介質(zhì)中，溶出曲線具有相似性，在其余三種溶出介質(zhì)中，溶出曲線均具有同等性，因此二者體外具有等效性。

3 討論

3.1 加藥方法設(shè)計(jì)

自制復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧均為混懸液體制劑，不能將藥物直接加入溶出杯中，因此采用半透膜法，將混懸液加入透析袋內(nèi)，通過(guò)測(cè)定一定時(shí)間內(nèi)從透析袋中擴(kuò)散出的藥量來(lái)考察兩制劑的溶出度，結(jié)果表明該方法可用于檢測(cè)混懸劑的溶出度。

3.2 溶出介質(zhì)及轉(zhuǎn)速的選擇

《普通口服固體制劑溶出曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原則》中提到在多種介質(zhì)中至少要有一種溶出介質(zhì)中的溶出量要達(dá)85%以上，在前期試驗(yàn)摸索過(guò)程中，磺胺嘧啶在四種溶出介質(zhì)中的溶出量均達(dá)不到規(guī)定。之后嘗試通過(guò)添加表面活性劑及酶物質(zhì)來(lái)提高溶出量，結(jié)果顯示溶出介質(zhì)中加入酶物質(zhì)未能提高磺胺嘧啶的溶出量，而加入0.05%的吐溫-80后溶出量提高了56.6%，之后調(diào)整攪拌槳轉(zhuǎn)速為100r/min，在純水中溶出6h后，磺胺嘧啶的溶出量可達(dá)87.2%，大于85%，符合上述指導(dǎo)原則規(guī)定，因此選定的溶出介質(zhì)及攪拌槳轉(zhuǎn)速可用于測(cè)定自制復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧溶出曲線的測(cè)定。

3.3 體外等效性評(píng)價(jià)方法探索

仿制藥是與被仿制藥具有相同的活性成分、劑型、給藥途徑和治療作用的替代藥品，能降低用藥成本，提高藥物普及性及社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。國(guó)內(nèi)制劑與國(guó)外參比制劑無(wú)論在原料來(lái)源還是工藝上都有一定的差異，因此進(jìn)行二者的等效性評(píng)價(jià)能確保自研制劑的有效性與安全性，在制劑效果不明確的情況下直接進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)的生物等效性評(píng)價(jià)易造成試驗(yàn)失敗及浪費(fèi)，若能在生物等效性之前用體外的方法評(píng)價(jià)二者的等效性，可以提高制劑研究的成功率及工作效率，但此部分工作仍無(wú)明確標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)，因此筆者參考人用普通口服固體制劑的評(píng)價(jià)方法[4][5]，通過(guò)對(duì)比溶出曲線的一致性，對(duì)自制復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧進(jìn)行了體外等效性評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示二者具有體外等效性。但這并不意味著其生物等效，需要進(jìn)一步進(jìn)行生物等效性研究。

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圖1 自制復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧在四種溶出介質(zhì)中的溶出曲線

表2 自制復(fù)方磺胺嘧啶混懸液與速服寧在四種溶出介質(zhì)中的溶出率結(jié)果

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