幾種泰山中草藥浸提物的抗疲勞作用研究

張 靜，楊 陽，趙新娟

1 研究對象與目的

通過對泰山四葉參、黃精、楤木復(fù)方的抗疲勞效果進(jìn)行研究，探討其組方效果，通過動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其抗疲勞性功效，制成對人體安全無害的制劑，以增強(qiáng)處于亞健康狀態(tài)的人群體質(zhì)，減輕甚至消除疲勞；也可用于運(yùn)動員的抗疲勞，提高運(yùn)動水平，進(jìn)而提高運(yùn)動成績。

泰山四葉參（見圖1）又名羊乳、泰山參，為泰山名藥之一。泰山四葉參含多種維生素、皂苷、多酮、齊墩果酸及50種揮發(fā)油，主要以根入藥，具有清熱解毒、強(qiáng)壯滋補(bǔ)、舒筋活血、健身補(bǔ)氣等作用。研究觀察泰山四葉參乙醇提取物、乙醇提取后的水提取物可明顯提高小鼠的抗疲勞能力［3］。泰山黃精（見圖2）是一種傳統(tǒng)的名貴中藥，具有寬中益氣、益腎添精、滋陰潤肺、生津補(bǔ)脾、安五臟、填精髓等功效，在抗菌、解毒、抗疲勞、抗衰老等方面均有較好效果［4］。其化學(xué)成分主要有：黃精多糖、甾體皂苷、蒽醌類化合物、生物堿、強(qiáng)心苷、維生素和多種對人體有用的氨基酸等化合物［5］。楤木（見圖3）所含的皂甙是人參的3倍，其藥理作用和使用價值都相當(dāng)可觀［6］。目前將這3種中草藥制成復(fù)方制劑研究小鼠的抗疲勞作用還未見報(bào)道。本文旨在探究3種中草藥的復(fù)方制劑對小鼠的抗疲勞作用，并為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

圖1 泰山四葉參

圖2 泰山黃精

圖3 楤木

2 實(shí)驗(yàn)材料與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

2.1.1 實(shí)驗(yàn)藥材

2.1.2 實(shí)驗(yàn)動物

昆明種雄性小白鼠（體重在18-22g）30只，隨機(jī)分為3個組，分別是高劑量組10只，低劑量組10只，對照組10只。

2.1.3 儀器與試劑

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料的處理

將四葉參、黃精切片在60℃烘干箱內(nèi)烘至恒重。楤木洗凈，取皮同樣在60℃烘干箱內(nèi)烘至恒重。將四葉參、黃精、楤木先后置中草藥粉碎機(jī)內(nèi)粉碎至15目。

2.2.2 四葉參、黃精、楤木浸提液的制備

原料浸泡：分別稱取加工好的四葉參180g、黃精90g、楤木30g，共計(jì)300g。（所占比例分別為60%、30%、10%）按照料水比為1:20的比例加水6 000ml放入3個2 000ml的燒杯內(nèi)，混合浸泡8h。

提取：將上述浸泡的藥物置微波爐內(nèi)，微波處理12min。

離心：將上述微波處理物置于離心機(jī)內(nèi)，設(shè)轉(zhuǎn)速為4 000r/min，離心15min，離心后留取上清液。殘?jiān)? 000ml酒精浸泡，用同樣的方法提取，離心，所得上清液與之前的混勻。

濃縮：將所得上清液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮，濃縮至600ml，相當(dāng)于每100ml溶液中含有50g生藥材。

2.2.3 實(shí)驗(yàn)劑量設(shè)置

實(shí)驗(yàn)分為高劑量組和低劑量組。高劑量組，藥物濃度為50%；低劑量組，藥物濃度為25%，同時設(shè)生理鹽水對照組。各組按每天0.4ml/10g（體重）經(jīng)口灌胃，30天后測定各項(xiàng)指標(biāo)。

2.2.4 小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)

在給藥第30天，灌藥0.5h后，于小鼠尾根部負(fù)荷8%體重的鉛絲，置于水深（30±1）cm，水溫（25±1）℃游泳箱內(nèi)進(jìn)行游，從放入水中開始計(jì)時，觀察小鼠游泳至力竭下沉?xí)r（在水下10s不能上?。?，記錄時間，這段時間為小鼠的游泳時間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 主要儀器

表2 主要試劑

2.2.5 肝糖原測定

采用蒽酮法測定，末次給予受試物30min后處死動物，取肝臟，清洗吸干，制備成1.00%肝糖原檢測液；空白管測定管及標(biāo)準(zhǔn)管分別加蒽酮顯色液2.0ml，混勻后置沸水浴中煮5min，冷卻后于波長620nm處比色，測定各管OD值，計(jì)算肝糖原含量。

2.2.6 肌糖原測定

采用蒽酮法測定，末次給予受試物30min后處死動物，取腓腸肌，清洗吸干，制備成5.00%肌糖原檢測液；空白管測定管及標(biāo)準(zhǔn)管分別加蒽酮顯色液2.0ml，混勻后置沸水浴中煮5min，冷卻后于波長620nm處比色，測定各管OD值，計(jì)算肌糖原含量。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

由SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，常規(guī)方法計(jì)算均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s），進(jìn)行t檢驗(yàn)，確定差異的顯著。

3 研究結(jié)果與分析

3.1 對小鼠負(fù)重游泳時間的影響

經(jīng)計(jì)算得小鼠負(fù)重游泳時間數(shù)據(jù)樣本方差齊，因此進(jìn)一步分析。經(jīng)口給予小鼠不同劑量受試物30天后，各組動物游泳時間總體上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。經(jīng)t檢驗(yàn)分析，高、低劑量小鼠負(fù)重游泳時間都長于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01），特別是低劑量小鼠負(fù)重游泳時間要明顯長于對照組（見表 3）。

表3 抗疲勞中藥對小鼠負(fù)重游泳時間的影響

3.2 對小鼠肝糖原含量的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量受試物30d后，各劑量組動物肝糖原含量總體上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。經(jīng)t檢驗(yàn)分析，經(jīng)口給予小鼠不同劑量受試物30d后，高、低劑量小鼠肝糖原含量顯著高于對照組（P＜0．05），低劑量組與對照組的差異更明顯一些（見表4）。

表4 抗疲勞中藥對小鼠肝糖原含量的影響

3.3 對小鼠肌糖原含量的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量受試物30天后，經(jīng)t檢驗(yàn)分析，低劑量小鼠肌糖原含量顯著高于對照組（P＜0.001），而高劑量小鼠肌糖原含量與對照組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （p>0.05）（見表 5）。

表5 抗疲勞中藥對小鼠肌糖原含量的影響

3.4 實(shí)驗(yàn)分析

運(yùn)動性疲勞是指機(jī)體生理功能不能持續(xù)在特定水平，或不能維持預(yù)期的運(yùn)動負(fù)荷強(qiáng)度，致使體力和運(yùn)動耐力下降，造成工作能力和效率的降低，屬于一種復(fù)雜的生理狀態(tài)，主要由體內(nèi)能量消耗過多和尿素氮乳酸等代謝物質(zhì)的累積而導(dǎo)致疲勞［8］。運(yùn)動性疲勞也與體內(nèi)的糖原（肝糖原和肌糖原）儲備密切相關(guān)。疲勞主要體現(xiàn)為運(yùn)動耐力下降，而負(fù)重游泳時間則可作為反映運(yùn)動耐力的重要指標(biāo)［9］。

本研究表明，抗疲勞中藥復(fù)方制劑能明顯延長小鼠負(fù)重游泳時間，表明其可以有效提高小鼠的運(yùn)動以及肌肉抗疲勞能力。分析原因可能是，3種中草藥的復(fù)方制劑有效的增加了小鼠體內(nèi)的糖原儲備，糖原儲備的提高可有效的增加運(yùn)動時的血糖水平，一定程度上提高運(yùn)動能力，延緩疲勞的發(fā)生。

此外，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示在高劑量和低劑量水平上，受試組小鼠游泳時間顯著延長，肝糖原和肌糖原水平顯著升高，且低劑量組升高最為顯著。分析原因可能是中藥復(fù)方制劑富含多種糖類物質(zhì)如淀粉、氨基酸、多糖等。作為外源性糖類物質(zhì)，促進(jìn)了糖原的合成，使糖原含量有所增加。而且楤木中所含有的皂甙是人參的3倍，人參皂貳可以提高乳酸脫氫酶的活性，加速糖異生的生成，增強(qiáng)機(jī)體對葡萄糖的攝取和利用。體力活動時，葡萄糖為骨骼肌主要能量來源，糖原的儲備量直接影響機(jī)體的運(yùn)動能力。當(dāng)耐力運(yùn)動中消耗大量能量時，肝糖原首先分解入血，輸送到肌肉中提供能量并維持血糖正常水平，避免低血糖引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)疲勞感［10］。另外肌糖原的酵解作用是糖類供給能量的另一種方式。當(dāng)機(jī)體突然需要大量能量，而又供氧不足（如劇烈運(yùn)動時），則糖原的酵解作用能暫時滿足能量消耗的需要，糖原的含量能間接說明疲勞發(fā)生的快慢或程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：服用中藥復(fù)方制劑能顯著增加小鼠肝糖原和肌糖原含量，提高機(jī)體運(yùn)動能力，延緩運(yùn)動性疲勞的發(fā)生。肌糖原是肌肉中糖的儲存形式，在劇烈運(yùn)動消耗大量血糖時，肌糖原分解供能，肌糖原不能直接分解成葡萄糖，必須先分解產(chǎn)生乳酸，經(jīng)血液循環(huán)到肝臟，再在肝臟內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚍纸獬善咸烟牵?1］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：高劑量組小鼠肌糖原含量沒有低劑量組高，且與生理鹽水對照組并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這說明該中藥復(fù)方制劑必須在一定的劑量范圍內(nèi)使用才能收到良好的效果。負(fù)重游泳試驗(yàn)陽性以及2項(xiàng)生化指標(biāo)如肝糖原和肌糖原含量為陽性，即可判定受試物具有抗疲勞活性。

因此，本次實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：抗疲勞中藥復(fù)方制劑具有明顯的抗疲勞作用，主要通過提高機(jī)體對運(yùn)動負(fù)荷的適應(yīng)能力，提高運(yùn)動耐力和減少代謝廢物產(chǎn)生的途徑來實(shí)現(xiàn)的。對該藥物能否應(yīng)用到人體，還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

4 小結(jié)

泰山四葉參、黃精、楤木都是泰山的名貴藥材。泰山四葉參的主要功效為補(bǔ)虛通乳、排膿解毒、舒筋活血、健身補(bǔ)氣等作用；泰山黃精是一種傳統(tǒng)的名貴中藥，具有抗疲勞、抗衰老、降血糖、抗氧化等作用；楤木所含有的皂甙是人參的3倍，其藥理作用和使用價值都相當(dāng)可觀。這3種中草藥制成的復(fù)方制劑對小鼠的抗疲勞作用都有顯著功效，一方面，該中藥復(fù)方制劑的有效成分富含多種糖類物質(zhì)，如淀粉、氨基酸、多糖等，為小鼠的耐力性運(yùn)動提供了必要的糖原補(bǔ)充；另一方面，該抗疲勞中藥復(fù)方制劑使糖異生途徑相關(guān)酶免受自由基損傷，加強(qiáng)糖異的代謝途徑，從而抑制肝糖原、肌糖原和血糖含量的下降。

泰山四葉參、黃精、楤木浸提液能有效防止小鼠肝糖原、肌糖原在運(yùn)動中的過度利用和促進(jìn)肝糖原、肌糖原的恢復(fù)。本次實(shí)驗(yàn)研究表明：該中藥復(fù)方制劑具有顯著抗疲勞的藥理作用，且低劑量的中藥復(fù)方制劑更有助于緩解小鼠的運(yùn)動性疲勞，但是關(guān)于該藥的不同劑量對抗疲勞的作用機(jī)制及能否制成中藥方劑用于人類尚待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

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