萆術(shù)硝痛顆粒提取工藝研究

張文娓，崔 闊，謝 明，楊爽爽，宗可昕，范卓文

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，哈爾濱150040;2.北京秦脈醫(yī)藥咨詢有限責(zé)任公司，北京100038)

近年來(lái)痛風(fēng)的發(fā)病率逐漸升高，發(fā)病年齡提前，已成為危害人類健康的一種嚴(yán)重的代謝性疾病.萆術(shù)硝痛顆粒是由白術(shù)、土蟲(chóng)、萆薢等多味藥材配伍而成，具有利濕濁、祛風(fēng)濕、破瘀血的作用，臨床用于治療痛風(fēng)具有良好療效.方中白術(shù)具有抗炎、利尿作用[1－2].萆薢是治療痛風(fēng)和高尿酸血癥的代表藥物，萆薢提取物有顯著的降尿酸作用[3－4].由于湯劑在臨床應(yīng)用中受到限制，因此在原方的基礎(chǔ)上，以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，利用現(xiàn)代科技方法，選取正交實(shí)驗(yàn)，多指標(biāo)綜合考察，優(yōu)化制劑的提取工藝[5－6]，為其成為中藥成方制劑工藝研究奠定基礎(chǔ).

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

高效液相色譜儀(Waters1515，美國(guó)Waters公司);電熱恒溫減壓干燥箱(DNP－9052，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE－3000A，上海亞容生化儀器廠);電子分析天平 (ESJ142－4，沈陽(yáng)龍騰電子有限公司);電熱恒溫水浴鍋(BC1，北京中西集團(tuán)公司);超聲波清洗儀SK250LH(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司).

1.2 試 藥

尿囊素(批號(hào)100431201203);甲醇(分析純，天津天力化學(xué)試劑廠);甲醇(色譜純，美國(guó)迪馬公司);乙醇(分析純);二乙胺(天津博迪化工股份有限公司).

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 考察指標(biāo)的測(cè)定

在一定實(shí)驗(yàn)因素和水平下，選擇出膏率、浸出物和尿囊素及揮發(fā)質(zhì)量濃度為考察指標(biāo).

2.1.1 出膏率測(cè)定

精密量取正交試驗(yàn)項(xiàng)下溶液40 mL，置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，100℃干燥至恒重，計(jì)算干膏得率.

2.1.2 浸出物測(cè)定

將上述所得干膏研細(xì)，精密稱定，按照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄ⅩA醇溶性浸出物測(cè)定法測(cè)定[7].

2.1.3 尿囊素質(zhì)量濃度測(cè)定

色譜條件:色譜柱為AgilentExtend ODS反相柱(4.6 ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇 － 水(90︰10);流速為1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為205 nm;柱溫35℃.

對(duì)照品溶液:精密稱取尿囊素對(duì)照品4.0 mg，加50%甲醇溶液制成每1 mL含尿囊素0.4 mg的儲(chǔ)備液.

供試品溶液:取正交試驗(yàn)項(xiàng)下的提取液10 mL，用石油醚(30～60℃)振搖提取2次，每次20 mL，合并石油醚提取液，低溫蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，定量轉(zhuǎn)移于25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得.

線性關(guān)系:精密吸取尿囊素對(duì)照品溶液10 μL進(jìn)入高效液相色譜儀，測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，尿囊素線性回歸方程為:Y=591.60X －37.509，r=0.999 1，線性范圍是:2.0 ～12.0 μg.

精密度考察:精密吸取尿囊素對(duì)照品溶液10 μL，進(jìn)入高效液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差).

穩(wěn)定性考察:將供試樣品室溫放置，分別在0、1、2、4、8、12、24、48 h 時(shí)精密吸取 10 μL 進(jìn)樣，測(cè)定尿囊素的峰面積，計(jì)算RSD值.

重現(xiàn)性考察:精密吸取同一供試樣品溶液10 μL進(jìn)樣，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定尿囊素的峰面積，計(jì)算RSD值.

加樣回收率考察:精密稱取5份供試品溶液，分別加入一定量的尿囊素對(duì)照品，測(cè)定并計(jì)算加樣回收率，加樣回收率=((實(shí)測(cè)量－樣品量)/加標(biāo)量)×100%.

2.1.4 揮發(fā)油質(zhì)量濃度測(cè)定

取正交試驗(yàn)項(xiàng)下提取液50 mL，按照2010年版《中國(guó)藥典》附錄XD揮發(fā)油測(cè)定法(甲法)測(cè)定.

2.2 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)

按1/2處方量稱取藥材約50 g，浸泡40 min，依據(jù)煎膏劑提取工藝的影響因素，以預(yù)試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，選擇L9(34)正交設(shè)計(jì)表，按正交試驗(yàn)順序提取，合并每次提取液，濾過(guò)，即得.確定考察因素、水平及實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1、2.

表1 水提正交試驗(yàn)因素水平表

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1 正交試驗(yàn)結(jié)果

出膏率、浸出物、尿囊素及揮發(fā)油質(zhì)量濃度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

3.2 方差分析結(jié)果

將正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，出膏率、浸出物百分含量、尿囊素及揮發(fā)油質(zhì)量濃度方差分析結(jié)果分別見(jiàn)表3～6.

表3 出膏率的方差分析結(jié)果表

表4 浸出物方差分析表

表5 尿囊素質(zhì)量濃度方差分析表

表6 揮發(fā)油質(zhì)量濃度方差分析表

依據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，方差分析結(jié)果表明:揮發(fā)油測(cè)定方法中，A、B因素差異顯著(P＜0.05)，在尿囊素質(zhì)量濃度測(cè)定方法中，優(yōu)組合為A3B3C2，優(yōu)水平為A＞C＞B.在出膏率測(cè)定方法中，提取次數(shù)(B)對(duì)試驗(yàn)指標(biāo)影響較大，浸出物質(zhì)量濃度測(cè)定方法中，優(yōu)組合為A3B3C2，優(yōu)水平為 C＞A＞B.故綜合考慮本實(shí)驗(yàn)的優(yōu)組合為A3B3C2，即萆術(shù)硝痛顆粒最佳提取工藝研究為:水提取次3次，第1次加水量為處方量的12倍，回流時(shí)間為1.5 h，第2次加10倍量水，回流時(shí)間為1 h，第3次加8倍量水，回流時(shí)間為0.5 h.

4 結(jié)語(yǔ)

萆術(shù)硝痛顆粒為治療痛風(fēng)的臨床經(jīng)驗(yàn)方劑，經(jīng)多年加減運(yùn)用，已經(jīng)取得良好療效.本制劑中藥物組成為白術(shù)、土鱉蟲(chóng)、萆薢等，依據(jù)組成藥物的有效化學(xué)成分及性質(zhì)，尿囊素質(zhì)量濃度測(cè)定方法簡(jiǎn)便，靈敏度高，重復(fù)性好，無(wú)干擾，方中白術(shù)主要成分為揮發(fā)油，土鱉蟲(chóng)、萆薢中也含有部分揮發(fā)油成分，故采用揮發(fā)油測(cè)定方法(甲法)進(jìn)行測(cè)定，方法簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性好，故選用尿囊素及揮發(fā)油質(zhì)量濃度作為測(cè)定指標(biāo)具有一定的代表性和可控性，綜合考慮出膏率、浸出物含量，優(yōu)化提取工藝.試驗(yàn)結(jié)果表明，該提取工藝條件和方法穩(wěn)定可行，適合大生產(chǎn)需求，為確保制劑穩(wěn)定性及制備規(guī)?；於▽?shí)驗(yàn)基礎(chǔ).

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