李彩東，楊勇衛(wèi)，田鵬飛，李惠軍，吳　　斌

慢性乙型肝炎病毒感染者血清MIF、IL-17和IL-10水平變化*

李彩東，楊勇衛(wèi)，田鵬飛，李惠軍，吳斌

【摘要】目的探討HBV感染者外周血巨噬細(xì)胞移動抑制因子（MIF）、IL-17和IL-10水平變化的臨床意義。方法收集60例慢性無癥狀HBV攜帶者、60例慢性乙型肝炎患者、60例乙型肝炎肝硬化患者、60例肝癌患者和50例健康對照者空腹血清，采用 ELISA法檢測血清MIF、IL-17和IL-10水平；采用熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA載量；采用全自動生化分析儀檢測血清肝功能指標(biāo)。結(jié)果與健康對照組［（1.9±1.4）ng/ml］比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血MIF水平均顯著升高［分別為（5.7±2.8）ng/ml、（10.5±4.1）ng/ml、（17.7±7.4）ng/ml、（19.8±9.9）ng/ml，P＜0.01］，其中HCC組最高，ASC組最低；與健康對照組［（4.4±2.2）ng/ml］比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-17水平均顯著升高［分別為（8.6±4.3）ng/ml、（20.7±6.6）ng/ml、（23.4±15.1）ng/ml、（16.0±8.7）ng/ml，P＜0.01或P＜0.05］，其中LC組最高，ASC組最低；與健康對照組［（12.9±4.6）ng/ml］比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-10水平均顯著升高 ［分別為（237.2±72.9）ng/ml、（184.68±59.0）ng/ml、（356.6±150.8）ng/ml、（287.9±88.8）ng/ml，P＜0.01］，其中LC組最高，CHB組最低。結(jié)論MIF、IL-17和IL-10在慢性HBV感染過程中可能起重要作用，檢測血清細(xì)胞因子水平可作為評估慢性乙型肝炎病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】慢性乙型肝炎；巨噬細(xì)胞移動抑制因子；白介素-17；白介素-10

乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus，HBV）感染人體后，在不同的感染者臨床轉(zhuǎn)歸存在較大的差異，其中免疫反應(yīng)可能起了重要的作用。多種細(xì)胞因子參與免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)，已有研究證實(shí)巨噬細(xì)胞移動抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor，MIF）參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展，在機(jī)體炎癥及免疫反應(yīng)中起炎癥介質(zhì)作用［1］。研究表明，白細(xì)胞介素-17 （Interleukin-17，IL-17）在自身免疫性肝病、脂肪性肝病及肝臟腫瘤中參與肝臟損傷及肝再生過程［2］。白細(xì)胞介素-10 （Interleukin-10，IL-10）被認(rèn)為是一種免疫和炎癥抑制因子，是導(dǎo)致乙型肝炎慢性化的重要因素［3］。本研究檢測了慢性無癥狀HBV攜帶者（Chronic asymptomatic carriers，ASC）、慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）患者、乙型肝炎肝硬化（Liver cirrhosis，LC）患者和肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）患者血清MIF、IL-17和IL-10水平，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1病例來源2012年2月～2013年12月我院住院及門診診治的ASC60例，男性32例，女性28例；年齡21～57歲，

平均年齡（37.28±12.08）歲。CHB患者60例，男性43例，女性17例；年齡28～63歲，平均年齡（41.45±13.17）歲。LC患者60例，男性43例，女性17例；年齡39～66歲，平均年齡（50.23±11.95）歲。肝癌患者60例，男性48例，女性12例；年齡43～69歲，平均年齡（53.72±9.84）歲。肝炎和肝硬化診斷符合2010年12月中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)會和感染病學(xué)會聯(lián)合修定的《慢性乙型肝炎防治指南》［4］的標(biāo)準(zhǔn)。常規(guī)檢查診斷肝癌。選擇健康體檢者50例，男性25例，女性25例；年齡23～58歲，平均年齡（32.15±8.46）歲，排除各型肝炎病毒感染，排除心肺疾病，肝功能正常。

1.2檢測方法采用熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA載量（湖南圣湘生物科技有限公司）；采用 ELISA法檢測血清MIF、IL-17和IL-10水平（美國RD公司）；采用貝克曼AU680全自動生化分析儀檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平（北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以（x±s）表示，對方差齊資料采用t檢驗(yàn)，對方差不齊資料采用校正t檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1臨床基本資料見表1。

表1　慢性HBV感染者和健康人肝功能和HBV DNA水平（x±s）比較

2.2慢性HBV感染者與健康人外周血MIF、IL-17和IL-10水平比較與健康對照組比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血MIF水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.749，t=3.544，t=10.264，t=8.537，P＜0.01）。HCC組MIF水平最高，與CHB組和ASC組比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.088，t=8.363，P＜0.01），而與LC組比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與健康對照組比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-17水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.716，t=2.074，t=5.009，t=3.723；P＜0.01或P＜0.05）。ASC 組IL-17水平最低，與CHB組、LC組和HCC組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.166，t=4.326，t=3.065；P＜0.01）；與健康對照組比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-10水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.700，t=7.889，t=13.949，t=7.785；P＜0.01）。CHB組IL-10水平最低，與LC組和HCC組比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.409，t=3.411；P＜0.01，表2）。

表2　慢性HBV感染者與健康人外周血MIF、IL-17和IL-10水平（ng/ml，x±s）比較

3　討論

乙型肝炎是一種免疫介導(dǎo)的疾病，機(jī)體免疫系統(tǒng)在HBV感染后被激活，免疫細(xì)胞釋放多種細(xì)胞因子，進(jìn)而形成一個復(fù)雜的免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，促進(jìn)肝臟炎癥反應(yīng)，介導(dǎo)肝細(xì)胞損傷，并誘導(dǎo)各類細(xì)胞分化增殖，使慢性肝臟炎癥持續(xù)存在。有研究顯示MIF參與了乙型肝炎、肝硬化、肝癌等的發(fā)病過程，其變化與肝臟組織損害程度相關(guān)［5］。Th17細(xì)胞參與了多種肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展［6］，其產(chǎn)生的IL-17作為一種強(qiáng)致炎因子與HBV感染后的肝臟炎性損傷有著密切的關(guān)系，且大部分的HBV感染者肝內(nèi)IL-17水平與血清ALT水平或HBV DNA載量呈正相關(guān)［7］。有研究表明IL-17與慢性乙型肝炎的發(fā)病有關(guān)，并且IL-17的血清水平與肝損傷程度呈正相關(guān)［8］。Arnaud et al［9］及Wasmuth et al［10］認(rèn)為IL-10的產(chǎn)生可能影響HBV感染者的臨床轉(zhuǎn)歸，高水平的IL-10不利于HBV的清除，可能與HBV感染慢性化有關(guān)。Li et al［11］研究發(fā)現(xiàn)在慢性乙型肝炎患者，HBcAg介導(dǎo)Th17細(xì)胞參與免疫應(yīng)答，并同時刺激IL-10分泌，IL-10通過下調(diào)維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt來抑制特異性Th17細(xì)胞功能，并且IL-10作用于未成熟的樹突狀細(xì)胞，可誘導(dǎo)T細(xì)胞失去功能，減弱了對病毒的細(xì)胞免疫清除作用，這可能是HBV感染慢性化的主要途徑［12］。

本研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血MIF水平顯著升高，其中HCC組MIF水平最高，說明MIF參與了乙型肝炎、肝硬化、肝癌等肝病的發(fā)病過程，且與肝病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。

最近的一項(xiàng)研究顯示，在急性肝衰竭發(fā)病過程中，IL-17等細(xì)胞因子起至關(guān)重要的作用［13］。我們的研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組血清IL-17水平顯著升高，推測血清IL-17隨著乙型肝炎病程的進(jìn)展其水平也增高，IL-17對肝臟炎癥的進(jìn)展和細(xì)胞的癌變有一定的促進(jìn)作用。

有研究顯示，肝硬化患者尤其是失代償期肝硬化患者外周血IL-10水平明顯高于健康對照組，并且這種增高隨肝硬化病情的加重而越發(fā)明顯，說明IL-10參與了肝纖維化的發(fā)生發(fā)展［14］。我們的研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-10水平均顯著升高，其中LC組外周血IL-10水平明顯高于其它組，推測IL-10參與了肝病的相關(guān)進(jìn)程以及肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。另外，ASC組IL-10水平高于CHB組，推測內(nèi)源性IL-10可以降低HBV感染對肝臟的損害，對肝臟有一定的保護(hù)作用，而當(dāng)IL-10等抗炎因子生成減少，將無法抑制肝臟受到炎性損傷［15］。

本研究通過比較慢性HBV感染者外周血MIF、IL-17和IL-10水平變化，初步闡明這幾種細(xì)胞因子在HBV感染慢性化、肝細(xì)胞損傷以及疾病進(jìn)展中的作用，提示檢測血清MIF、IL-17和IL-10水平可作為評估慢性乙型肝炎病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。

【參考文獻(xiàn)】

［1］Mitchell RA.Mechanisms and effectors of MIF dependent promotion of tumourigenesis.Cell Signal，2004，16（1）:13-19.

［2］Ge J，Wang K，Meng QH，et al.Implication of Thl7 and Thl cells in patients with chronic active hepatitis B.J Clin Immunol，2010，30（1）:60-67.

［3］Ouyang W，Rutz S，Crellin NK，et al.Regulation and functions of the IL-10 family of cytokines in inflammation and disease. Annu Rev Immunol，2011，29:71-109.

［4］中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會和感染病學(xué)分會.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）.實(shí)用肝臟病雜志，2011，14（2）：81-89.

［5］Heinrichs D，Knauel M，Offermanns C，et al.Macrophage migration inhibitory factor（MIF）exerts antifibrotic effects in experimental liver fibrosis via CD74.Proc Natl Acad Sci USA，2011，108（42）:17444-17449.

［6］晁康，龔曉蓉，陳旻湖，等.Th17細(xì)胞在肝臟疾病中的免疫病理作用.實(shí)用肝臟病雜志，2010，13（3）:224-227.

［7］Zhang JY，Zhang Z，Lin F，et al.Interleukin-17-producing CD4 （+）T cells increase with severity of liver damage in patients with chronic hepatitis B.Hepatology，2010，51:81-91.

［8］任勁松，潘修成，李麗，等.慢性乙型肝炎患者外周血Th17細(xì)胞和IL-17檢測及其臨床意義.中華臨床醫(yī)師雜志，2011，5: 4264-4267.

［9］Arnaud V，Li J，Wang Y，et al.Regulatory role of interleukin-10 and interferon-gamma in severe hepatic central and peripheral fibrosis in humans infected with Schistosoma japonicum.J Infect Dis，2008，198:418-426.

［10］Wasmuth HE，Kunz D，Yagmur E，et al.Patients with acute on chronic liver failure display“sepsis-like”immune paralysis.J Hepatol，2005，42:195-201

［11］Li J，Wu W，Peng G，et al.HBcAg induces interleukin-10 production，inhibiting HBcAg-specific Th17 responses in chronic hepatitis B patients.Immunol Cell Biol，2010，88:834-841.

［12］曹憶嶸，彭利軍，歐陽陽陽，等.乙型肝炎病毒感染患者肝硬化發(fā)生相關(guān)臨床危險因素評價.肝臟，2013，18（4）:211-215.

［13］趙攀，畢振華，王春亞.急性肝衰竭患者血清炎性細(xì)胞因子水平分析.實(shí)用肝臟病雜志，2014，17（1）:63-64.

［14］李晨，邢少軍，段學(xué)章，等.乙型肝炎肝硬化患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率及血清IL-1β、IL-6和IL-10水平的變化.實(shí)用肝臟病雜志，2012，15（3）:244-246.

［15］孫彤，陳凱紅，裴豪，等.康艾注射液對代償期肝硬化患者多種細(xì)胞因子的影響.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2012，22:210-214.

（收稿：2014-09-03）

（本文編輯：陳宗炳）

第一作者：李彩東，女，45歲，博士，主任藥師。主要從事慢性乙型肝炎發(fā)病機(jī)制及治療學(xué)研究。 E-mail：lzlicaidong@163.com

DOI：10.3969/j.issn.1672-5069.2015.01.018

*基金項(xiàng)目：蘭州市科技發(fā)展指導(dǎo)性計(jì)劃項(xiàng)目（編號：2013-ZD-07）

作者單位：730046甘肅省蘭州市第二人民醫(yī)院肝病研究所

Changes of serum macrophage migration inhibitory factor，IL-17 and IL-10 levels in patients with chronic hepatitis BLi Caidong，Yang Yongwei，Tian Pengfei，et al.Institute of Liver Diseases，Second People’s Hospital，Lanzhou 730046，Gansu Province，China

【Key words】Chronic hepatitis B；Macrophage migration inhibitory factor；Interleukin-17；Interleukin-10