甜葉菊組培快繁與工廠化育苗技術(shù)

劉家勝 高曉慧 賴桂秀 梁益華

(江西省大余縣林盛木業(yè)有限責(zé)任公司 江西贛州 341500)

甜葉菊(Stevia rebaudiana.Bertoni),又名甜菊、甜草、甜茶,是菊科類草本植物,是純天然含高糖甙的制糖原料。原產(chǎn)巴拉圭和巴西。以甜葉菊干葉為原料,提取精制甜葉菊糖甙,系純天然、高甜度、低熱能甜味劑,其甜度約為蔗糖的300－400倍,熱量卻為蔗糖的1/300,近年來,廣泛用于飲料、食品、醫(yī)藥和日用化工等用糖行業(yè)中,可以防治糖尿病、肥胖癥、高血壓、小兒齲齒等疾病。

因甜葉菊種子結(jié)實(shí)率低,種子小、極易喪失活力,發(fā)芽率低,遺傳性狀不穩(wěn)定,從而使甜葉菊優(yōu)良品種推廣受到限制。采用組培方法可保持優(yōu)良品種的性狀,使優(yōu)良品種快速進(jìn)入市場(chǎng)。據(jù)此,2010年筆者對(duì)甜葉菊優(yōu)良母株進(jìn)行了組培快繁并工廠化育苗200多萬株。

1 材料與方法

1.1 材料

采用優(yōu)良品種“菊隆5號(hào)”甜葉菊植株為材料,其特征總甙含量高,其中的RA含量也高,甜葉菊干鮮比1:3,一般干葉兩茬畝產(chǎn)量250-300公斤。材料由江西省菊隆高科技實(shí)業(yè)有限公司提供。

1.2 外植體滅菌

將外植體剪成1.2－1.5cm長的莖段,再放低濃度的洗潔精水浸泡3－5分鐘,用流水沖洗1－2個(gè)小時(shí)后放置于超凈工作臺(tái)上進(jìn)行消毒處理。外植體的消毒采用75%酒精10秒鐘,再在0.1%的升汞溶液再浸泡10分鐘,無菌水沖洗4－5次。將單芽莖段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基,每瓶接種一個(gè)莖段。誘導(dǎo)培養(yǎng)基①M(fèi)S+6BA1.0mg/L+NAA0.2～0.5mg/L;②MS+6BA1.2mg/L+NAA0.2～0.5mg/L;③MS+6BA1.5mg/L+NAA0.2～0.5mg/L,以篩選出最佳的激素配比。培養(yǎng)基加蔗糖30g/L,卡拉膠6.8g/L,PH值5.8。

每處理接種50瓶,3次重復(fù),將接種瓶放入培養(yǎng)室培養(yǎng),培養(yǎng)溫度24－28℃,光照時(shí)間14h/d,光照強(qiáng)度2000－3000lx。

1.3 繼代增殖培養(yǎng)

將側(cè)芽誘導(dǎo)獲得的2－6cm長的無菌苗切成2cm長帶2－3片葉的莖段,接種到增殖培養(yǎng)基中,增殖培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基,添加激素組合6－BA(0.6、0.8、1.0 mg/L)、(NAA0.1、0.2 mg/L)的增殖培養(yǎng)基,共6個(gè)處理:①M(fèi)S+6BA0.6mg/L+NAA0.1mg/L;②MS+6BA0.6mg/L+NAA0.2mg/L;③MS+6BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L;④MS+6BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L;⑤MS+6BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;⑥MS+6BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L。其他同誘導(dǎo)培養(yǎng)基,接種7d后觀察生長狀況。

1.4 生根培養(yǎng)

將增殖培養(yǎng)基獲得的叢生芽單株切下,接到生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基:①1/4MS+NAA0.1mg/L;②1/4LMS+NAA0.2mg/;③1/2MS+NAA0.1mg/L;④1/2MS+NAA0.2mg/L。其他等同誘導(dǎo)培養(yǎng)基,每處理接種50瓶,7d后觀察生長狀況。

1.5 馴化移栽

甜葉菊喜光植物,條件適宜,生長快。當(dāng)生根數(shù)條后,高度5cm長時(shí)就應(yīng)移到大棚煉苗。

2 結(jié)果分析

2.1 芽的誘導(dǎo)產(chǎn)生

外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基③,7d后,側(cè)芽開始萌動(dòng),10d開始生長,15d后主芽長5-8cm。接種于其他培養(yǎng)基上的,10d后腋芽開始生長,生長較慢。試驗(yàn)表明:MS+6BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L效果較理想,側(cè)芽在該培養(yǎng)基上萌發(fā)快,且芽長勢(shì)粗壯、正常。

培養(yǎng)基中BA和NAA的激素配比恰當(dāng),有利于芽的萌動(dòng)和生長。

2.2 不定芽的增殖

在甜葉菊培養(yǎng)基中,不同的激素配比、芽的增殖效果不同。6BA濃度高,增殖率高,但經(jīng)過2－3代增殖后,玻璃化相當(dāng)嚴(yán)重,對(duì)大規(guī)模生長產(chǎn)生影響,過低分化率低。綜合以上因素MS+6BA0.6mg/L+NAA0.2mg/L用于甜葉菊增殖最好,增殖系數(shù)4-6,增殖周期15-20d。

2.3 根的誘導(dǎo)形成

將生長健壯的3cm以上的叢生苗單芽切下,接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)。結(jié)果在1/4 MS+NAA0.2mg/L的培養(yǎng)基中生根效果最好。10d左右可見莖段有多條根生成,20d后可生根10－20條,生根率100%。

3 工廠化育苗

3.1 馴化煉苗:

組培苗煉苗技術(shù)是否適宜對(duì)甜葉菊的移栽成活率影響相當(dāng)大。如何培育矮壯、根系發(fā)達(dá)、葉色濃綠的苗,煉苗是關(guān)鍵。為此,筆者總結(jié)出:當(dāng)瓶苗生根初期就要移到大棚,讓其在相當(dāng)于自然條件下生長,這樣莖葉的生長速度放緩了,根同樣生長良好,確保移栽成活率。

3.2 洗苗

經(jīng)過20－30d的大棚煉苗,將苗高7cm以上的小苗洗掉根部的培養(yǎng)基,并用1000倍的多菌靈浸泡10分鐘。

3.3 移栽與管理

將洗好的苗移栽到黃泥土苗床或消毒好的沙質(zhì)土壤中。移栽好后及時(shí)澆好定根水,噴1:1000的托布津,蓋上薄膜和蔭網(wǎng),每7d澆水一次,保持土壤濕度70－80%,10d左右就有新根長出來,成活率在90%以上。

[1]黃蘇珍,韓玉林,謝明云,等.甜葉菊“中山一號(hào)”快速繁殖研究[J].南特產(chǎn)研究,1999.

[2]李啟任,劉娟,董立華,等.甜葉菊莖尖組織培養(yǎng)快繁技術(shù)[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),1992.