三步止瀉手法對兔脾虛證動物模型的血清免疫的實驗研究

楊麗秋

摘要：目的觀察脾虛證小兔模型的癥狀、血清免疫功能治療前后變化情況，探求三步止瀉治療小兒腹瀉的客觀依據(jù)，為臨床應(yīng)用推廣該療法提供科學依據(jù)。方法采用喂服生大黃粉的造模方法制作脾虛證小兔動物模型30只，隨機分為3組（即實驗組10、對照組10、模型組10只）實驗小兔。實驗組采用三步止瀉手法治療，對照組給予思密達藥物灌服治療，模型組給飼料喂養(yǎng)，治療組予推拿治療.通過對癥狀改變，血清免疫功能方面比較，進一步探索三步止瀉手法治療脾虛證動物模型的作用機理。結(jié)果 實驗兔腹瀉后推拿治療對血液中CPR、IgA、IgM濃度影響較思密達組更為明顯，對IgG影響無明顯不同。結(jié)論推拿手法比思密達治療對實驗兔血清免疫功能影響更明顯。

關(guān)鍵詞：動物模型；血清C反應(yīng)蛋白；三步止瀉法

中圖分類號：R244.1

文獻標志碼：A

文章編號：1007 - 2349（ 2015） 04 - 0068 - 02小兒腹瀉亦稱小兒泄瀉，屬于小兒消化不良，是小兒常見的消化系統(tǒng)疾病，脾虛證以腹瀉為主要癥狀，發(fā)病年齡3歲以下多見，發(fā)病時間一年四季均可發(fā)病，尤以季節(jié)更替時明顯.它是由于小兒脾常不足，脾胃功能容易因外邪或內(nèi)因?qū)е率д{(diào)，故出現(xiàn)以大便次數(shù)增多并且糞質(zhì)改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn).病情較重者可出現(xiàn)脫水及電解質(zhì)紊亂或危及生命，臨床中非常重視。小兒推拿療法是以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，根據(jù)小兒的生理病理特點，存其體表特定的穴位或部位以推拿手法為主治療疾病，強身健體或助長益智的一種外治療法。該課題組三步止瀉法相對簡單易掌握，臨床觀察療效顯著。國內(nèi)外目前關(guān)于手法研究在于使用單一手法治療脾虛證動物模型對免疫方面的研究，李鐵浪[1]研究捏脊療法可通過降低血清MOT的含量，改善脾虛證家兔的胃腸運動，達到治療作用；郭爭鳴[2]指出推拿明顯影響機體的免疫功能。關(guān)于脾虛證動物模型制作方面，李志強[3]采用大黃復(fù)制脾虛大鼠作研究；薛麗莉[4]一采用大黃復(fù)制脾虛泄瀉大鼠；有關(guān)動物穴位定位方面研究，多為成人十二經(jīng)絡(luò)穴位，尚無小兒推拿特定穴位方面的研究，我課題組定穴方法參考鄭利巖等[5]《實驗家兔常用經(jīng)穴的客觀檢測與標定》。故本課題脾的取穴定位于小兔拇指掌面，腹取穴定位即為小兔腹部，上七節(jié)骨為小兔骶尾骨正中線。本課題組開展動物實驗研究，先完成脾虛證動物模型的造模，后設(shè)立實驗組和對照組，觀察三步止瀉治療、西藥思密達治療前后脾虛證動物模型癥狀的改善、血清中免疫功能的改變。1 研究內(nèi)容與方法1.1研究方案 采用喂服生大黃粉的造模方法（參考李志強[3]采用大黃復(fù)制脾虛大鼠作研究的方法，方法有改動）制作脾虛證小兔動物模型30只，隨機分為3組（即實驗組10、對照組10、病模型組10只）實驗小兔。實驗組采用三步止瀉手法治療，對照組給予思密達藥物灌服治療，空模型組給飼料喂養(yǎng)。在造模后和治療后觀察癥狀，抽取血清測定免疫功能C反應(yīng)蛋白，IgA，IgM，lgE。1.2研究步驟1.2.1動物造模材料：（1）動物：昆明家兔40只（云南省中醫(yī)學院動物中心提供），斷乳仔兔，雌雄不限。實驗前在水、飼料供應(yīng)充足的條件下單籠飼養(yǎng)1周，觀察記錄正常大便及飲食情況。（2）藥物：大黃由云南省中醫(yī)院藥劑科提供，研磨成粉備用。采用ELISA免疫測定方法，（云南省中醫(yī)院中心實驗室聯(lián)系提供）。1.2.2方法：（1）預(yù)實驗：預(yù)備4只按照小兔制作動物模型，通過喂服生大黃粉（與飼料拌食）連續(xù)灌服14天，出現(xiàn)7天以上，腹瀉癥狀，大便形狀改變，體重下降等脾虛癥狀；預(yù)實驗成功后行下而實驗。（2）動物分組：將30只家兔隨機分為治療組、對照組、病模型組，每組10只。（3）模型制備：采用通過喂服生大黃粉（與飼料拌食）方式，連續(xù)灌服14 d，每天3次，出現(xiàn)7天以上，腹瀉癥狀，大便形狀改變，體重下降等脾虛癥狀，予取兔耳靜脈血，靜脈血測定血清測定免疫功能IgA，IgM，lgE，C反應(yīng)蛋白。（4）治療組采用三步止瀉手法治療，脾，腹，及上七節(jié)骨穴位，手法與臨床總結(jié)一致。對照組采用思密達藥物灌服丁脾虛證小兔，病模型組飼料喂養(yǎng)。（5）治療后血清標本提取及處理：采集兔耳靜脈血各1次。剪家兔耳緣靜脈采JIIL2 ml，裝入試管中，放入37.2。C電熱恒溫水槽水浴1h，在3000r/rain，4。C低溫離心機中離心lOmin后，取上清裝入EP管中，置-70℃冰箱保存待測。（6）血清免疫功能的測定：云南省中醫(yī)醫(yī)院中心實驗室檢測，按MOT放免采用ELISA免疫測定方法，嚴格按試劑盒要求進行測定。（7）統(tǒng)計學方法使用SPSS17.0 for Windows軟件包進行處理。2血清檢測結(jié)果分析注：與思密達組相比，推拿組血液中CPR濃度水平更低，差異有顯著意義（P<0.05），推拿組血液中IgA濃度水平更高，差異有顯著意義（P<0.05），推拿組血液中IgG濃度水平，差異無顯著意義（P>0.05），推拿組血液中IgM濃度水平更高，差異有顯著意義（P<0.05）。3結(jié)果與分析實驗兔腹瀉后血液中CPR、IgA、IgG及IgM濃度均有變化，推拿治療對血液中CPR、IgA、IgM濃度影響較思密達組更為明顯，對IgG影響無明顯不同?？梢娡颇眉八幬飳π⊥闷⑻撟C腹瀉均有治療效果，但推拿更明顯。4討論三步止瀉法為筆者在12年臨床中從事小兒腹瀉推拿治療的臨床體會，三法是補脾，摩腹，推上七節(jié)骨，此為小兒腹瀉治療中最重要的三步。古籍關(guān)于小兒腹瀉的治療有許多，《幼科銑鏡》“大指脾面旋推，味似人參，白術(shù)。瀉之，則為灶土”。《小兒按摩經(jīng)》“脾土，曲指左旋為補，直推之為瀉”?！独逭茨σg(shù)》“大指脾胃，宜多補”。《幼科推拿秘書》：“七節(jié)骨，水瀉，從龜尾向上擦如數(shù)，立刻即止”?！独逭茨σg(shù)》”摩腹，用掌心團摩滿腹上，治傷乳食”?！肚Ы鹨矸健贰笆钞吥Ω鼓艹俨　?。臨床總結(jié)觀察補脾，摩腹，推上七節(jié)骨是治療小兒腹瀉的關(guān)鍵而義特效的穴位。另外小兒推拿手法要求輕柔輕快，速度也是操作要領(lǐng)之一。該方法應(yīng)用簡便易于操作，可以廣泛推廣于推拿醫(yī)生及患兒家屬，治療療程短，花費少，從長遠社會發(fā)展，此種獨特的綠色療法可在小兒身體保健治療方面有很重要的作用。本課題組在臨床實踐中廣泛應(yīng)用三步止瀉法治療腹瀉患兒，取得了很好療效，并且形成了規(guī)范化治療。該手法最主要的特點就是綠色療法，操作簡單、容易掌握、安全性高、臨床療效顯著。臨床中發(fā)現(xiàn)，該手法能明顯改善腹瀉患兒的臨床癥狀，止瀉快，恢復(fù)大便性狀，恢復(fù)患兒脾胃腸的正常功能。該課題證明該方法對于小兔脾虛證腹瀉有明顯優(yōu)于藥物組的療效。該方法應(yīng)用簡便易于操作，可以廣泛推廣于推拿醫(yī)生及患兒家屬，治療療程短，花費少，從長遠社會發(fā)展，此種獨特的綠色療法可在小兒身體保健治療方而有很重要的作用。參考文獻：[1]李鐵浪.捏脊療法對脾虛證家兔血清胃動索的影響[J].醫(yī)學研究雜志，2012，39（2）：2.[2]郭爭鳴.推拿按摩對免疫調(diào)節(jié)功能的研究概況[J].湖南中醫(yī)雜志，2010，26（4）：7[3]李志強.四君子湯對脾虛證大鼠血清性激素和甲狀腺激素水平的影響[J].河南中醫(yī)，2008，3.[4]薛麗莉，益脾止瀉對脾虛泄瀉大鼠的作用機制研究[J].中國中醫(yī)急癥，2009，8.[5]鄭利巖等.實驗家兔常用經(jīng)穴的客觀檢測與標定[J]. 上海針灸雜志，2003，1.（收稿日期：2014-12-15）