楊連榮，常惟志，段升東，閆玉芹，姜立麗，李彥冰，張哲鋒

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150040;2.哈爾濱溢康中醫(yī)藥研究所，哈爾濱150036;3.黑龍江省獸藥飼料監(jiān)察所，哈爾濱150069)

頸椎1號(hào)膠囊原處方是臨床驗(yàn)方，具有活血化瘀，補(bǔ)腎強(qiáng)骨;祛風(fēng)除濕，通絡(luò)止痛的功效.經(jīng)文獻(xiàn)查閱，巖白菜素是落新婦的主要成分，具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，且處方量相對(duì)較大，水提取易檢出，故以巖白菜素質(zhì)量比為指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定，為頸椎1號(hào)膠囊的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù).

1 儀器、試劑、試藥

高效液相色譜儀(Waters 2695－2996美國Waters公司);Hypersil ODS2(4.6mm ×200 mm，5 μm)色譜柱(大連依利特分析儀器有限公司);指針式電熱恒溫水浴鍋(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠);電子分析天平(AB－204N，上海梅特勒－托利多儀器有限公司);數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司KQ－250DE);甲醇(色譜純，分析純均購自西隴化工股份有限公司);娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈有限公司);蒸餾水(哈爾濱道外北齊玻化精教儀器經(jīng)銷商);巖白菜素對(duì)照品(中國藥品生物制品鑒定所，200202);頸椎1號(hào)膠囊(實(shí)驗(yàn)室自制).

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 溶液的配置

標(biāo)準(zhǔn)溶液:精密稱取巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)品3.18 mg，放置于50 mL容量瓶中，加入色譜甲醇40 mL，超聲振蕩30 min，加入色譜甲醇定容至刻度，巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)品溶液質(zhì)量濃度為 63.6 μg/mL[1－2].

供試品溶液:精密稱取頸椎1號(hào)膠囊內(nèi)容物1.8 g，放置于25 mL棕色容量瓶中，加入色譜甲醇20 mL，超聲處理 30 min，放冷，定容，搖勻，用 0.45 μm微孔濾膜過濾，續(xù)濾液作為供試品溶液[3].

陰性對(duì)照品溶液:按照處方比例，去除落新婦，以最優(yōu)工藝提取藥材，遵照供試品溶液的制備方法，制備陰性對(duì)照藥材.

2.2 色譜條件

色譜柱:Hypersil ODS2(4.6 mm ×200 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 －水(20∶80);流速:1 mL/min;柱溫:25℃;檢測(cè)波長:275 nm.(巖白菜素標(biāo)準(zhǔn)品、供試品、陰性對(duì)照?qǐng)D見圖1)

圖1 巖白菜素高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液 5、10、15、20、25 μL，進(jìn)樣，記錄峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程:Y=1 696 570.4+29 107.39，R2=0.999 8，結(jié)果表明巖白菜素在0.32～1.59 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系.(見表1、圖2)

表1 進(jìn)樣量與峰面積值關(guān)系

2.3.2 精密度測(cè)定

取同一標(biāo)準(zhǔn)品溶液，精密吸取10 μL，按2.2項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得平均峰面積為1 136 491，RSD 值為 0.92%，n=5，結(jié)果表明精密度良好.(見表2)

圖2 巖白菜素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，重新制備一組頸椎1號(hào)膠囊，精密稱取其內(nèi)容物1.800 3 g，按2.1項(xiàng)下的要求配制供試品溶液，分別在4、8、10、12 h進(jìn)樣 10 μL，測(cè)得平均峰面積 1 411 132，RSD 為 2.64%，表明頸椎1號(hào)膠囊供試品溶液在12 h以內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性.(見表3)

表3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.3.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱定頸椎1號(hào)膠囊內(nèi)容物約1.8 g，共6份，按照2.1項(xiàng)下的要求配制供試品溶液，進(jìn)樣10 μL，分別測(cè)得相應(yīng)的峰面積，結(jié)果為平均質(zhì)量比1.13 mg/g，RSD為1.07%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好.(見表4)

表4 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.3.5 加樣回收試驗(yàn)

精密稱定頸椎1號(hào)膠囊內(nèi)容物約0.9 g，共6份，分別加入質(zhì)量濃度為63.6 μg/mL的巖白菜素溶液8 mL，定容至25 mL容量瓶中，操作參考供試品溶液制備項(xiàng)下，制備成待測(cè)溶液，分別進(jìn)樣10 μL，按照2.2項(xiàng)下的色譜條件操作，記錄峰面積，推算質(zhì)量比，結(jié)果平均加樣回收率為97.03%，RSD為2.11%(n=6)，表明該方法準(zhǔn)確.(見表5)

表5 加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 質(zhì)量比測(cè)定

分別量取3個(gè)批次頸椎1號(hào)膠囊內(nèi)容物約為1.8 g，精密稱定，每個(gè)批次重復(fù)3次，共9份，按照2.1項(xiàng)下供試品溶液制備方法，分別制成供試品溶液.精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液與供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按照2.2項(xiàng)下色譜條件操作，用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算質(zhì)量比，三個(gè)批次質(zhì)量比分別是 1.13、1.04、1.08 mg/g，平均質(zhì)量比是 1.08 mg/g.以質(zhì)量比的80%計(jì)算，每克膠囊中內(nèi)容物含落新婦以巖白菜素計(jì)，不得少于0.86 mg/g.(見表6)

表6 質(zhì)量比測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 結(jié)語

采用HPLC法測(cè)定巖白菜素質(zhì)量比，方法完整、簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好.確定了制劑中巖白菜素質(zhì)量比的最低限度，提高了藥品的可控性.

[1]雷 冰.落新婦化學(xué)成分及藥理活性研究[D]吉林:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012

[2]楊 珺.落新婦止痛顆粒制備工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].哈爾濱:黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2012

[3]王 強(qiáng)，張玉寶，梁宏斌，等.電子束輻照對(duì)黃連有效成分影響的研究[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2014，30(6):655－658.