楊家玥，李　靜，王　超，蘭鳳榮，徐麗敏

中藥“七皮飲”對(duì)銀屑病樣皮損大鼠模型不同組織β-內(nèi)啡肽的影響*

楊家玥1，李靜2，王超3，蘭鳳榮2，徐麗敏4

（1.天津市第四中心醫(yī)院，天津300140；2.天津市婦女兒童保健中心，天津300070；3.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193；4.天津市中醫(yī)藥研究院長(zhǎng)征醫(yī)院，天津300120）

［目的］研究中藥七皮飲對(duì)銀屑病樣皮損大鼠模型皮損及不同組織中β-內(nèi)啡肽（β-EP）含量的影響及其作用規(guī)律。［方法］復(fù)制銀屑病樣皮損大鼠模型，中藥七皮飲治療，每日治療1次，連續(xù)10 d。觀察皮膚組織病理變化、測(cè)定皮損Baker組織學(xué)得分及銀屑病面積與嚴(yán)重性指數(shù)（PASI）得分、放射免疫學(xué)方法檢測(cè)血漿、皮損及下丘腦中β-EP含量。［結(jié)果］中藥治療后大鼠皮損明顯改善，中藥組Baker組織學(xué)得分及PASI得分均明顯較模型組降低（P＜0.01）。與空白組比較，模型組血漿β-EP呈降低趨勢(shì)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組皮損β-EP升高（P＜0.05）；模型組下丘腦β-EP降低（P＜0.01）。與模型組比較，中藥組血漿β-EP含量無(wú)明顯變化；皮損處β-EP降低（P＜0.01）；下丘腦β-EP含量升高（P＜0.01）。［結(jié)論］中藥七皮飲對(duì)銀屑病樣皮損大鼠模型皮損有改善作用，其治療機(jī)制可能與降低皮損β-EP、升高下丘腦β-EP含量有關(guān)。

銀屑??；中藥；七皮飲；β-內(nèi)啡肽

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2015.11.10

銀屑病是一種常見(jiàn)的慢性、復(fù)發(fā)性、炎癥性皮膚病，受該病困擾的人數(shù)呈上升趨勢(shì)，西醫(yī)雖有一定的療效，但毒副作用大，易復(fù)發(fā)。在總結(jié)多年臨床經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用以清熱解毒、涼血消斑、解郁安神為基本治法的七皮飲治療銀屑病，經(jīng)臨床運(yùn)用觀察，發(fā)現(xiàn)具有減少炎癥、抑制表皮過(guò)度角化及止癢等肯定療效。為了探討七皮飲對(duì)銀屑病的干預(yù)機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)選用5%心得安長(zhǎng)期外涂復(fù)制大鼠銀屑病樣皮損模型，觀察七皮飲對(duì)銀屑病的治療作用及機(jī)制，為臨床治療銀屑病提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1主要材料將5 g的心得安原料（由天津力生制藥有限公司饋贈(zèng)）加入95 g的乳劑基質(zhì)配成5%心得安乳劑；七皮飲（由地骨皮、桑白皮、合歡皮、大腹皮、牡丹皮、白鮮皮、陳皮組成，天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科加工成顆粒劑，溶于100 mL水中，相當(dāng)于每毫升含生藥1.8 g）；β-內(nèi)啡肽（β-EP）放免試劑盒購(gòu)自北京華英生物技術(shù)研究所；健康成年Wistar雄性大鼠24只，體質(zhì)量200～250 g，購(gòu)自北京維通利華有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［許可證號(hào)：SCXK（京）2002-0003］。

1.2動(dòng)物分組及處理將24只大鼠隨機(jī)數(shù)字表余數(shù)法分為正常組、模型組及中藥組，每組各8只。正常組不做任何處理；將模型組和中藥組大鼠背部剪出面積為1.5 cm2對(duì)稱(chēng)的無(wú)毛區(qū)，按照黃畋［1］及Gaylarde［2］的方法，將5%心得安乳劑涂于兩側(cè)被皮區(qū)（0.3 g/cm2），3次/d，連續(xù)21 d。第22天開(kāi)始對(duì)中藥組進(jìn)行治療，根據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》［3］按人與動(dòng)物體積表面積折算的等效劑量比值進(jìn)行換算，按體質(zhì)量灌胃給藥，以9 mL/kg的量，每日1次，連續(xù)10 d。

1.3取材及檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1大鼠一般狀況及皮損局部銀屑病面積與嚴(yán)重性指數(shù)（PASI）評(píng)分觀察大鼠的皮毛色澤、行為活動(dòng)、神態(tài)、體質(zhì)量、飲食、局部及全身遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)等情況。參考Van de Kerkh［4］制定的經(jīng)典PASI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)皮損表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)分。

1.3.2大鼠皮損組織蘇木精-伊紅（HE）染色及組織病理評(píng)分實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取皮膚組織一塊，10%中性甲醛水溶液進(jìn)行固定，脫水，透明浸蠟后包埋，石蠟切片，常規(guī)HE染色，參照通用的Baker［5］評(píng)分方法，對(duì)各組大鼠皮膚的組織病理學(xué)改變進(jìn)行定量評(píng)估。1.3.3血漿、皮損、下丘腦β-EP含量測(cè)定各組大鼠迅速斷頭取血2 mL，注入預(yù)先加好抗凝劑（10%乙二胺四乙酸30 μL、抑肽酶20 μL）的試管中，混勻，4～8℃放置15min后，迅速低溫離心（3 500 r/min，5 min）去上清，取血漿放入EP管內(nèi)，-20℃以下保存待檢。迅速在冰上取皮損組織一塊及下丘腦，入沸生理鹽水中煮5 min，滅活酶；稱(chēng)質(zhì)量后，置于玻璃勻漿管內(nèi)，分別加入1 mol/L冰醋酸及鹽酸（HCl）各1 mL，在冰浴上充分勻漿后移入塑料離心管中，加入1mol/L氫氧化鈉（NaOH）1 mL中和；低溫離心（4 000 r/min，20 min），取上清，-20℃以下保存待檢。放射免疫法測(cè)定血漿、皮損、下丘腦中β-EP含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理運(yùn)用SPSS18.0軟件分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組計(jì)量資料組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠一般狀況及皮損觀察模型組大鼠較正常組表現(xiàn)急躁，毛發(fā)晦暗雜亂、無(wú)光澤，飲食減少，大便稀薄，體質(zhì)量下降，搔抓皮損，可見(jiàn)明顯的紅斑丘疹，鱗屑，表皮肥厚浸潤(rùn)；中藥組上述表現(xiàn)明顯改善，反應(yīng)靈敏，皮毛有光澤，體質(zhì)量增加，紅斑、鱗屑基本消退，表皮變薄，見(jiàn)圖1。皮損臨床癥狀PASI評(píng)分顯示中藥組明顯低于模型組（P＜0.01），見(jiàn)表1。

圖1　不同組大鼠皮膚表現(xiàn)Fig.1 Performance of rats skin in different groups

表1　模型與中藥組大鼠皮損PASI評(píng)分比較（±s）Tab.1　Comparison of the PASI score between the model and Chinese traditional medicine group（±s）分

表1　模型與中藥組大鼠皮損PASI評(píng)分比較（±s）Tab.1　Comparison of the PASI score between the model and Chinese traditional medicine group（±s）分

注：與模型組相比，*P＜0.01。

分組動(dòng)物數(shù)PASI得分模型組88.500±1.604*中藥組82.500±0.527*

2.2皮損組織病理觀察空白組：角質(zhì)層薄，顆粒層約為2～4層，棘層約2～3層。模型組：不同程度的彌漫或灶性角化過(guò)度及角化不全、可見(jiàn)少數(shù)中性白細(xì)胞的聚集、顆粒層減少、棘層肥厚、真皮乳頭上延、皮突下延呈杵狀、真皮淺層毛細(xì)血管擴(kuò)張充血、淋巴及組織細(xì)胞的浸潤(rùn)。中藥組：表皮變薄，基本接近正常皮，角化不全和角化過(guò)度基本消失，顆粒層增多，真皮乳頭毛細(xì)血管擴(kuò)張充血等表現(xiàn)減輕，見(jiàn)圖2。皮損組織病理評(píng)分顯示中藥組明顯下降，較模型組明顯減輕（P＜0.01），見(jiàn)表2。

圖2　不同組大鼠皮膚組織病理改變（HE染色×40）Fig.2Histopathology in different groups of rats skin tissue（HE×40）

表2　模型與中藥組大鼠皮膚組織病理評(píng)分比較（±s）Tab.2　 Comparison of the histology score between the model and Chinese traditional medicine group（±s）分

表2　模型與中藥組大鼠皮膚組織病理評(píng)分比較（±s）Tab.2　 Comparison of the histology score between the model and Chinese traditional medicine group（±s）分

注：與模型組相比，*P＜0.01。

分組動(dòng)物數(shù)PASI得分模型組85.063±1.178*中藥組81.100±0.459*

2.3各組大鼠不同組織中β-EP水平的變化模型組、中藥組大鼠血漿β-EP含量均降低，與空白組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；與空白組比較，模型組大鼠皮損處β-EP明顯升高（P＜0.05），中藥治療后使升高的β-EP明顯降低，與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；模型組大鼠下丘腦β-EP含量較空白組明顯降低，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），中藥治療后含量顯著升高，與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)表3。

表3　不同組間大鼠血漿、皮損、下丘腦中β-EP含量變化的比較（±s）Tab.3　Comparison of the β-EP contents between different groups in plasma，skin lesions and hypothalamus（±s）ng/L

表3　不同組間大鼠血漿、皮損、下丘腦中β-EP含量變化的比較（±s）Tab.3　Comparison of the β-EP contents between different groups in plasma，skin lesions and hypothalamus（±s）ng/L

注：與空白組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.01。

分組動(dòng)物數(shù)血漿β-EP含量皮損β-EP含量下丘腦β-EP含量空白組899.34±49.13093.08±27.53433.48±63.58模型組887.66±20.49118.11±20.07*312.69±30.55**中藥組880.94±22.94085.19±17.79#485.73±65.72#

3　討論

中醫(yī)認(rèn)為銀屑病“皆是風(fēng)濕邪氣，客于腠理，復(fù)值寒濕，與血?dú)庀嗖保?］，其發(fā)生多因素體陽(yáng)盛，感受外邪，或進(jìn)食辛辣，或心情煩擾，七情內(nèi)傷等，使血熱內(nèi)蘊(yùn)，耗傷陰血，生風(fēng)致燥，引起血燥；燥熱使血受熱煎熬成塊，瘀熱互結(jié)形成瘀血，致肌膚失養(yǎng)，瘀阻經(jīng)絡(luò)，影響氣血營(yíng)運(yùn)，使原有的血瘀進(jìn)一步加重，使銀屑病患者長(zhǎng)期處于一種因熱而燥，因瘀而熱，因熱而瘀的虛實(shí)夾雜不良循環(huán)中［7］。本病病因在血，病位在肌表，在此基礎(chǔ)上自擬七皮飲，以達(dá)到清熱解毒、涼血消斑、解郁安神。本方由《六科準(zhǔn)繩》五皮飲化裁而來(lái)，而五皮飲是《三因極一病癥方論》中的名方，后世很多醫(yī)家取其化裁應(yīng)用于皮膚病的治療［8］，取其“以皮達(dá)皮”之意。方中地骨皮、桑白皮泄肺熱而清皮毛；牡丹皮涼血化斑消瘀；合歡皮解郁安神、養(yǎng)心寧神；白鮮皮清熱燥濕，祛風(fēng)止癢，專(zhuān)走皮膚，幾乎為皮膚科所專(zhuān)用；大腹皮、陳皮理氣行滯，通理中焦氣機(jī)。全方共收清熱解毒、涼血消斑、解郁安神之效，使熱去血平，血?dú)w常道，氣機(jī)得暢，恢復(fù)正常。通過(guò)對(duì)大鼠一般情況、皮損PASI評(píng)分及組織病理學(xué)評(píng)分進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)中藥七皮飲能明顯使銀屑病樣皮損呈良性改善，接近正常大鼠。

銀屑病的發(fā)病機(jī)制目前尚不十分清楚，近年來(lái)隨著神經(jīng)內(nèi)分泌、免疫調(diào)節(jié)概念的建立和發(fā)展，皮膚和血漿中某些神經(jīng)肽與銀屑病的關(guān)系已引起了人們的重視，認(rèn)為心理應(yīng)激、神經(jīng)肽能影響銀屑病的病情及病程［9-12］。神經(jīng)肽β-EP作為重要的應(yīng)激調(diào)節(jié)因子，不僅在表皮、真皮外周神經(jīng)纖維上有μ-阿片肽受體表達(dá)，甚至在皮膚中的免疫活性細(xì)胞上也有β-EP及其受體的表達(dá)，部分外周神經(jīng)纖維還能產(chǎn)生β-EP［13］，在神經(jīng)和皮膚的直接交流中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，對(duì)皮膚的病理生理有不同程度的影響。

Glinski等［14］通過(guò)比較尋常型銀屑病患者及正常人血清中β-EP水平，發(fā)現(xiàn)銀屑病患者β-EP水平明顯增高，并發(fā)現(xiàn)β-EP水平與銀屑病疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，提示炎癥可能是引起銀屑病β-EP的產(chǎn)生因素。國(guó)內(nèi)學(xué)者［15-16］用同樣方法檢測(cè)銀屑病患者血漿和皮損中β-EP的含量，結(jié)果均高于正常人。最近Hollo等［17］觀察同時(shí)接受光療和浴療治療的銀屑病患者，發(fā)現(xiàn)癥狀改善的患者血液中β-EP的水平并無(wú)顯著變化。認(rèn)為血液中的β-EP水平與皮膚所處的病理狀態(tài)并不一致，銀屑病病灶處的炎癥可能不是由血液中β-EP直接介導(dǎo)的。由于β-EP的免疫調(diào)節(jié)作用有中樞和外周兩種機(jī)制，所以本實(shí)驗(yàn)在檢測(cè)血漿、皮損中β-EP含量的同時(shí)，對(duì)中樞下丘腦中的β-EP也進(jìn)行觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組中血漿β-EP含量未見(jiàn)升高，與正常組之間無(wú)明顯變化，這與Hollo［17］的結(jié)果一致；而模型組皮損處β-EP含量明顯升高，中藥治療后使之降低，與空白組無(wú)差異；對(duì)于下丘腦來(lái)說(shuō)，中藥可促進(jìn)模型組降低的β-EP含量升高，且與空白組無(wú)差異。皮損、下丘腦中β-EP含量的變化可能與銀屑病的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系，并且經(jīng)七皮飲治療后皮損、下丘腦中β-EP含量基本得到恢復(fù)；而血漿中β-EP的變化與皮損病理狀態(tài)不一致，對(duì)銀屑病關(guān)系未見(jiàn)明顯的影響。

由此可見(jiàn)，無(wú)論β-EP在銀屑病中如何作用，但其在數(shù)量的增加和功能上的異常，參與了銀屑病的發(fā)病機(jī)制，中藥七皮飲可下調(diào)皮損處β-EP、上調(diào)下丘腦中β-EP，通過(guò)對(duì)不同組織中β-EP含量的調(diào)節(jié)發(fā)揮治療作用。

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（本文編輯：馬英，滕曉東）

Effects of“Qipiyin”decoction on the contents of beta-endorphine in different tissues on the rat model with psoriasis-like lesion

YANG Jia-yue1，LI Jing2，WANG Chao3，LAN Feng-rong2，XU Li-min4
（1.Tianjin Fourth Centre Hospital，Tianjin 300140，China；2.Tanjin Women and Children’s Health Center，Tianjin 300070，China；3. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；4.Changzheng Hospital of Tianjin Academy of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital，Tianjin 300120，China）

［Objective］To study on the influence of Chinese drug Qipiyin on the rat model with psoriasis-like lesion and the contents of beta-endorphine in different tissues.［Methods］The rat model with psoriasis-like lesion were prepared，and they were treated with Chinese drug once each day.After treatment of 10 days，changes of the skin histopathology were observed，and its Baker，and scores were determined and the contents of beta-endorphine in different tissues（plasma，skin，hypothalamus）were detected with radioimmunoassay.［Results］After treatment the skin Baker，s scores were decreased in the Chinese drug group as compared with those in the model group（P＜0.01）.Compared as normal group，the β-EP level in plasma of the rat model with psoriasis-like lesion decreased，but its level in skin increased（P＜0.05）and decreased in hypothalamus（P＜0.01）.After Chinese drug，there were no change in β-EP of plasma，but in skin the β-EP level were lower（P＜0.01）and higher in hypothalamus（P＜0.01）.［Conclusion］The rat model with psoriasis-like lesion can be improved by Chinese drug.The mechanism is possibly related with the down-regulation of β-EP in skin and up-regulation of β-EP in hypothalamus.

psoriasis；Chinese drug；Qipiyin；beta-endorphine

R758.63

A

1672-1519（2015）11-0675-04

天津市中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合科研專(zhuān)項(xiàng)資金課題（07027）。

楊家玥（1981-），男，醫(yī)學(xué)碩士，主治醫(yī)師，主要研究方向?yàn)獒樉耐颇脤W(xué)。

徐麗敏，E-mail：lijing_med@163.com。

（2015-06-04）