朱南南，孫志蓉，楊春寧，程麗麗，周　楊，楊　薇

金釵石斛干鮮品的質(zhì)量比較研究*

朱南南，孫志蓉，楊春寧，程麗麗，周楊，楊薇

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京100102）

［目的］對(duì)金釵石斛干鮮品的化學(xué)成分及抗氧化活性進(jìn)行比較研究，了解兩者的差別，為金釵石斛干鮮品的區(qū)別應(yīng)用提供依據(jù)。［方法］采用氣相色譜法和紫外-可見分光光度法進(jìn)行成分含量測(cè)定比較。采用比色法及試劑盒測(cè)定干鮮品對(duì)羥自由基的清除作用及抗氧化能力。利用傅利葉變換紅外光譜法對(duì)干鮮品粉末樣品的全息化學(xué)特征譜進(jìn)行比較。［結(jié)果］金釵石斛鮮品的總生物堿和多糖含量及其對(duì)羥自由基的清除率和抗氧化能力均顯著高于干品。金釵石斛干品與鮮品的紅外譜圖相似，在1 630 cm-1、1 506 cm-1、1 243 cm-1處，貴州赤水的官渡、長(zhǎng)期與紅花3個(gè)基地的金釵石斛鮮品峰強(qiáng)均大于干品，各個(gè)產(chǎn)地金釵石斛鮮品的圖譜與多糖對(duì)照品圖譜的相關(guān)系數(shù)均大于干品。［結(jié)論］金釵石斛干品與鮮品在化學(xué)成分及抗氧化活性方面存在著一定的差異。

金釵石斛；干鮮品；化學(xué)成分；抗氧化活性

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2015.11.13

中藥在臨床應(yīng)用上常有生品、熟品及鮮品之分，現(xiàn)代研究表明，多種中藥的干品和鮮品在化學(xué)成分和藥理作用上存在差異［1-4］，其用途也不同。金釵石斛為蘭科石斛屬植物金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl．）的新鮮或干燥莖，為歷版藥典收載的石斛主要品種。鮮石斛性寒，對(duì)熱證的療效優(yōu)于石斛干品［5］。隨著石斛資源量的恢復(fù)及人們保健意識(shí)的增強(qiáng)，越來(lái)越多的人開始使用石斛鮮品進(jìn)行治療與保健，石斛鮮條、鮮榨汁、凍干粉受到青睞，但目前尚未見石斛干鮮品質(zhì)量比較方面的研究報(bào)道。冷凍干燥方法對(duì)物料原有結(jié)構(gòu)、形狀和成分的破壞程度最小，能較好地保持鮮品的品質(zhì)［6］，是目前中藥鮮品處理和保存中常采用的方法。文章采用烘干法和冷凍干燥法處理金釵石斛新鮮莖條獲得干品和鮮品，對(duì)兩者的化學(xué)成分含量進(jìn)行測(cè)定比較，同時(shí)對(duì)兩者的抗氧化能力及紅外譜圖進(jìn)行比較分析，從多個(gè)層面揭示金釵石斛干品與鮮品之間存在的差異，為金釵石斛干鮮品的區(qū)別應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1樣品來(lái)源金釵石斛的2年生新鮮莖條于2013年3月采自道地產(chǎn)區(qū)貴州赤水鴨嶺、官渡、長(zhǎng)期、紅花4個(gè)規(guī)范化生產(chǎn)基地，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)孫志蓉副教授鑒定為金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl.）。鮮品為新采摘鮮莖經(jīng)冷凍干燥（-60℃、1 pa下預(yù)凍7 h，干燥10 h）后粉碎處理得到。干品為同批采摘的鮮莖經(jīng)55℃鼓風(fēng)烘干，分別粉碎，過(guò)60目篩，裝入塑料封口袋，置于干燥器中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2儀器與試劑LGJ-12冷凍干燥機(jī)（松源華興公司）；METTLER-AE240型1/100000電子分析天平（瑞士梅特勒公司）；U-3010紫外-可見分光光度計(jì)（日本）；安捷倫7890A型氣相色譜儀，安捷倫7683B自動(dòng)進(jìn)樣器（美國(guó)安捷倫公司）；Spectrum GX FTIR紅外光譜儀（美國(guó)Perkin Elmer），DTGS檢測(cè)器；Epoch酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek）?？偪寡趸═AC）試劑盒（Bioassay，DTAC-048），溴化鉀（KBr）純度為99.9%；無(wú)水葡萄糖（批號(hào)110833-201205）、石斛堿（批號(hào)111876-201102）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；乙醇、苯酚、濃硫酸均為分析純（北京化工廠）。金釵石斛粗多糖對(duì)照品為實(shí)驗(yàn)室自制（熱回流提取，濾液烘干打粉）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1石斛堿含量測(cè)定按照《中國(guó)藥典》2010年版一部石斛項(xiàng)下的金釵石斛含量測(cè)定方法進(jìn)行，每份樣品重復(fù)測(cè)定3次。

1.2.2總生物堿、多糖含量測(cè)定總生物堿、多糖的含量測(cè)定參照文獻(xiàn)［7］方法進(jìn)行，多糖含量為相對(duì)粗多糖含量，每份樣品重復(fù)測(cè)定3次。

1.2.3抗氧化活性測(cè)定1）樣品制備：精密稱取1 g金釵石斛（干品與鮮品）粉末，加50 mL水，浸泡30 min。加熱回流提取1 h，抽濾?；厥辗勰?，加30 mL水進(jìn)行2次回流提取30 min，抽濾。合并兩次濾液，定容至25 mL容量瓶?jī)?nèi)（生藥濃度為40 mg/mL），置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?）對(duì)羥自由基清除率的測(cè)定：參考郭紅英［8］的方法，稍作改變。硫酸亞鐵與雙氧水混合產(chǎn)生羥基自由基，它能夠氧化水楊酸，得到的產(chǎn)物在510 nm處會(huì)有吸光度，吸光度越大，證明羥基自由基越多，樣品抗氧化能力越強(qiáng)，則產(chǎn)生的羥基自由基越少，吸光度則越少。在離心管中依次加入2 mL的6 mmol/L的硫酸亞鐵溶液，2 mL的2.4 mmol/L的雙氧水（H2O2）溶液，不同濃度的樣品溶液2 mL（將上述制備好的樣品溶液稀釋至生藥濃度為30 mg/mL），混勻，靜置10 min，再加入2 mL的6 mmol/L水楊酸溶液，混合均勻，37℃水浴0.5 h，離心后取上清液在510 nm下測(cè)定。空白組用蒸餾水代替樣品溶液，對(duì)照組用蒸餾水代替水楊酸。清除率（%）計(jì)算公式：羥基清除率（%）=［A空白-（A樣品-A對(duì)照）］/A空白×100%。3）TAC的測(cè)定：將上述制備好的樣品溶液稀釋至生藥濃度為20 mg/mL，采用總抗氧化試劑盒（DTAC-048）測(cè)定。

1.2.4紅外光譜測(cè)定采用溴化鉀壓片法，對(duì)壓片進(jìn)行掃描，獲得樣品的紅外譜圖。掃描條件：光譜測(cè)量范圍（400～4 000）cm-1，光譜分辨率為4 cm-1，掃描次數(shù)為16次，鄰苯二胺（OPD）速度為0.2/（cm·s），掃描時(shí)實(shí)時(shí)扣除水和二氧化碳（CO2）的干擾。采用Perkin-Elmer公司的SpectrumV6.3.5操作軟件，對(duì)樣品進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和圖譜預(yù)處理，預(yù)處理過(guò)程包括基線校正和比對(duì)。

1.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用方差分析，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)系數(shù)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　不同基地金釵石斛干鮮品中石斛堿、總生物堿、多糖含量比較（x±s）Tab.1　 Comparison of the contents of dendrobine，total alkaloids and polysaccharide of fresh and driedDendrobium nobileLindl.（x±s）%

2　結(jié)果與分析

2.1化學(xué)成分含量比較由表1可見，4個(gè)基地金釵石斛干品與鮮品的多糖含量之間的差異有顯著性（P＜0.01），鮮品的多糖含量（7.31%）高于干品（5.773%），其中官渡的金釵石斛多糖含量較高。金釵石斛干品與鮮品的總生物堿含量差異有顯著性（P＜0.05），而石斛堿含量差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。

2.2抗氧化活性比較由表2可見，4個(gè)基地金釵石斛干品與鮮品對(duì)羥基清除率及抗氧化能力之間均具有顯著性差異（P＜0.05），而各基地鮮品對(duì)羥基的清除率及抗氧化能力均明顯高于干品。

表2　金釵石斛干品與鮮品的抗氧化能力Tab.2　Antioxidative activities of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.

2.3紅外譜圖比較分析貴州赤水4個(gè)基地金釵石斛干品與鮮品的一維紅外疊加譜圖如下圖所示（圖1～5）。由圖1可見，3 400 cm-1為O-H伸縮振動(dòng)吸收峰，2 927 cm-1為亞甲基C-H反對(duì)稱伸縮振動(dòng)吸收峰；1 739 cm-1處為酯羰基C=O伸縮振動(dòng)吸收峰；1 630 cm-1處可能同時(shí)包含芳香環(huán)骨架伸縮振動(dòng)吸收以及共軛羰基C=O伸縮振動(dòng)吸收峰；1 506 cm-1為芳香環(huán)骨架伸縮振動(dòng)吸收峰；1 461 cm-1附近的吸收峰可能包括多種成分，如芳香環(huán)骨架伸縮振動(dòng)和CH彎曲振動(dòng)；1 373 cm-1是C-H彎曲振動(dòng)吸收峰；1 243、1 155、1 077、1 036 cm-1處為各類C-O的伸縮振動(dòng)峰；在950 cm-1以下，為糖環(huán)骨架振動(dòng)吸收等多個(gè)指紋特征峰［9］。以上各種振動(dòng)吸收峰也與已有金釵石斛中所含的主要成分為生物堿、多糖、酚類、聯(lián)芐類、菲類、芴酮類等研究結(jié)果相一致［10-11］。

各產(chǎn)地金釵石斛干品與鮮品的一維紅外譜圖在整體上比較相似（圖2～5灰線為鮮品，黑線為干品），但在一些細(xì)節(jié)處還是存在差異的。在1 630 cm-1附近，長(zhǎng)期和官渡的金釵石斛鮮品峰強(qiáng)均大于干品，而紅花和鴨嶺則相反；在（1 500～1 300）cm-1范圍內(nèi)，長(zhǎng)期的金釵石斛鮮品峰強(qiáng)均大于干品，而官渡則相反，紅花和鴨嶺的干鮮品差異較??；在1 154 cm-1處，長(zhǎng)期、紅花與鴨嶺3個(gè)基地的金釵石斛鮮品峰強(qiáng)均大于干品。

圖1　長(zhǎng)期基地金釵石斛干品的一維紅外譜圖Fig.11D-IR of dried Dendrobium nobile Lindl.in Changqi plantation base

圖2　長(zhǎng)期基地金釵石斛干鮮品一維紅外譜圖比較Fig.2Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Changqi plantation base

圖3　官渡基地金釵石斛干鮮品一維紅外譜圖比較Fig.3Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Guandu plantation base

圖4　紅花基地金釵石斛干鮮品一維紅外譜圖比較Fig.4Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Honghua plantation base

圖5　鴨嶺基地金釵石斛干鮮品一維紅外譜圖比較Fig.5Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Yaling plantation

表3　金釵石斛干鮮品與金釵石斛多糖對(duì)照品紅外光譜相似度分析Tab.3　Infrared spectrum similarity analysis of polysaccharide reference spectrum and fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.

對(duì)于純化合物來(lái)說(shuō)，只有結(jié)構(gòu)一樣的分子才可能具有相同的紅外光譜；結(jié)構(gòu)越相似的分子，其紅外光譜也越相似。相關(guān)系數(shù)可反映樣品所含成分的相對(duì)含量高低［12］，采用紅外相關(guān)系數(shù)法對(duì)不同產(chǎn)地金釵石斛干鮮品與粗多糖的紅外光譜進(jìn)行相關(guān)系數(shù)比對(duì)，結(jié)果與特征峰強(qiáng)度呈正相關(guān)，結(jié)果見表3。鮮品中相關(guān)系數(shù)均大于干品相關(guān)系數(shù)，表明金釵石斛鮮品比干品多糖含量高。

3　討論

金釵石斛干品與鮮品的粉末色澤存在差異，干品呈黃色，鮮品呈青綠色。這與物料干燥的溫度有關(guān)，干燥溫度越高，樣品的褐變情況就越嚴(yán)重。對(duì)道地產(chǎn)區(qū)貴州赤水4個(gè)基地的金釵石斛干品和鮮品的石斛堿、總生物堿、多糖含量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)不同基地金釵石斛干品與鮮品的石斛堿含量各有高低，但經(jīng)過(guò)配對(duì)t檢驗(yàn)處理，發(fā)現(xiàn)整體上差異不顯著，而錢桂敏等［13］采用冷凍干燥法將金釵石斛新鮮莖脫水后，與采用烘干法獲得的樣品做比較，所得鮮品石斛堿含量比干品高0.022%。鑒于測(cè)定的樣品量有限，筆者認(rèn)為這方面還需進(jìn)一步研究確定。另外，本實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的總生物堿含量數(shù)值普遍低于石斛堿含量，分析原因可能是由于石斛堿含量由氣相色譜法測(cè)得，精確性高，而測(cè)定總生物堿含量的溴甲酚綠酸性染料比色法雖然為目前常用的方法［14-15］，但其操作步驟繁瑣，實(shí)驗(yàn)誤差較大，因此今后還需尋找更精確的金釵石斛總生物堿含量測(cè)定方法。紅外譜圖研究結(jié)果表明，金釵石斛鮮品中所含的芳香類物質(zhì)較干品多，這些物質(zhì)可能是一些揮發(fā)油成分或者是芳香類生物堿化合物、黃酮類、酚類等成分，產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因可能是金釵石斛鮮莖在烘干過(guò)程中由于受熱，芳香類物質(zhì)不穩(wěn)定而分解損失；相關(guān)系數(shù)結(jié)果表明不同產(chǎn)地金釵石斛鮮品的多糖含量均大于干品。抗氧化活性方面，金釵石斛鮮品對(duì)羥基自由基的清除率和總抗氧化能力均高于干品。由文獻(xiàn)［16-17］得知，植物色素多為黃酮類及酚類成分，具有很好的抗氧化作用，金釵石斛干品與鮮品具有明顯的色澤差異，推測(cè)可能鮮品較好地保存了色素，起到了一定的抗氧化作用。

石斛在古代常會(huì)使用鮮藥，清熱療效頗佳。然而由于儲(chǔ)存、攜帶不便，現(xiàn)代鮮藥應(yīng)用較少，且目前對(duì)中藥鮮藥也缺少深入系統(tǒng)的研究。但科學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及中藥材大規(guī)模的人工種植，都為鮮藥開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。鮮藥的優(yōu)質(zhì)性不僅僅是某些活性成分含量的變化，而是同加工、炮制一樣，可能改變藥性，最終影響療效。文章研究結(jié)果表明，金釵石斛干鮮品的化學(xué)成分及抗氧化能力方面均存在差異，今后還應(yīng)對(duì)金釵石斛干鮮品的藥效進(jìn)行深入研究，為金釵石斛干鮮品的正確使用提供理論依據(jù)。

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（本文編輯：高杉，滕曉東）

Study on the quality of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.

ZHU Nan-nan，SUN Zhi-rong，YANG Chun-ning，CHENG Li-li，YANG Wei
（Beijing University of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100102，China）

［Objective］To compare the component of chemical components and antioxidative activities of fresh and dried Denelrobium nobile Lindl.，understand the difference of them，and provide reference for reasonable application of Denelrobium nobile Lindl.［Methods］GC-MS and UV spectrophotometry was carried out for chemical components analysis；the salicylic acid colorimetry and kit assay were used for determination of the scavenging effects on hydroxyl radical and TAC，respectively；the Fingerprint Features of Denelrobium nobile Lindl.were studied by Fourier Transform Infrared Spectroscopy（FT-IR）.［Results］We found the content of total alkaloids，polysaccharide and hydroxyl radical and total antioxidant capacity in fresh Denelrobium nobile Lindl were significantly higher than dried one. There were some similarity infrared spectrum features for both Denelrobium nobile Lindl.At1 630 cm-1，1 506 cm-1，and 1 243 cm-1，the peak height of fresh Denelrobium nobile Lindl.was higher than dried Denelrobium nobile Lindl.in Guandu，Changqi，Honghua plantation base of Guizhou province.The infrared correlation coefficient with polysaccharide reference spectrum of the fresh Denelrobium nobile Lindl.was higher than dried one in all origins.［Conclusion］There is a certain difference in the component of chemical components and antioxidative activities in fresh Denelrobium nobile Lindl.and dried one.

Denelrobium nobile Lindl.；dried and fresh herb；chemical component；antioxidative activity

R223.11

A

1672-1519（2015）11-0689-04

貴州赤水石斛產(chǎn)業(yè)科技合作項(xiàng)目［赤中藥科合（2013）號(hào)］；北京中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)生科研課題（201210026060）。

朱南南（1989-），女，碩士研究生，主要從事中藥質(zhì)量與開發(fā)研究。

孫志蓉，E-mail：zrs67@126.com。

（2015-07-20）