魏文龍,黃林芳
(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所,北京 100193)
·中藥農(nóng)業(yè)·
市售不同加工方法當歸的GC-MS分析△
魏文龍,黃林芳*
(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所,北京 100193)
目的:開展不同加工方法對市售當歸藥材中揮發(fā)油含量影響的研究,為建立當歸藥材合理的加工工藝提供科學(xué)依據(jù)。方法:收集不同加工處理的當歸藥材,運用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)測定揮發(fā)油含量,應(yīng)用含量數(shù)據(jù)進行主成分分析(PCA)。結(jié)果:煙熏和曬干處理的當歸品質(zhì)較優(yōu),硫熏和酒炙品質(zhì)較差;硫熏、酒炙和曬干三種加工處理的當歸藥材能夠明顯區(qū)分開,煙熏與曬干較接近;揮發(fā)油中鑒定出22個化合物,其主要成分藁本內(nèi)酯、鄰苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內(nèi)酯A的相對含量分別為53.55%、23.66%、3.89%、4.20%、2.06%、2.88%。結(jié)論:該研究探究不同加工方法對當歸藥材揮發(fā)油含量影響,為硫熏工藝規(guī)范化奠定基礎(chǔ)。
當歸;加工方法;成分含量;GC-MS
當歸為傘形科植物當歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根,性溫,味甘、辛,具有補血活血調(diào)經(jīng)止痛潤腸通便之功效[1]。苯酞類化合物為當歸揮發(fā)油中主要活性成分,現(xiàn)代藥理實驗研究表明此類化合物具有抗血栓、平喘、鎮(zhèn)痛、抑制平滑肌痙攣等廣泛藥理作用[2-4]。藥材生產(chǎn)加工工藝會對藥材質(zhì)量產(chǎn)生很大影響,從而影響臨床療效。不同的種植戶采用不同的方法干燥,除傳統(tǒng)煙熏外,還有曬干、陰干等方法,其產(chǎn)地加工無規(guī)范的指南,存在一定的盲目性和隨意性。近年來發(fā)現(xiàn),在當歸的主要產(chǎn)區(qū)甘肅,當?shù)厮庌r(nóng)在加工過程中為了使藥材色澤潔白和防腐,采用硫磺熏制的現(xiàn)象較為普遍[5-6],而硫磺熏蒸會使藥材中的化學(xué)成分發(fā)生改變,并伴有SO2殘留,會嚴重影響到用藥安全性[7-8]。本實驗收集甘肅岷縣當歸藥材市場上硫熏、煙熏、曬干、酒炙的藥材,應(yīng)用氣象色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)對其中的揮發(fā)性成分進行分析,測定藥材中4種苯酞類成分含量,考察不同加工方法對藥材化學(xué)成分的影響,從而為當歸質(zhì)量控制提供參考。
1.1 儀器及試藥
安捷倫6890氣相色譜儀;氫火焰離子化檢測器;HP-5石英毛細管氣相色譜柱(HP公司,30 m×0.25 mm);乙酸乙酯(分析純,北京化工廠),對照品,藁本內(nèi)酯Ligustilide(批號:MUST-11072416)、正丁基苯酞n-Butylphthalide(批號:MUST-12020706)、丁烯基苯酞Butylidenephthalide(批號:MUST-12071103)、洋川芎內(nèi)酯A senkyunolide A(批號:MUST-10102309)均購于成都曼思特生物科技有限公司,純度經(jīng)高效液相色譜分析大于98%。
當歸藥材統(tǒng)一購自甘肅省岷縣當歸城藥材市場(見表1),藥材上部主根圓柱形,下部分出多條支根,表面棕黃色或黃褐色,斷面黃白色或淡黃色,具油性,氣芳香,味甘微苦,無須根、雜質(zhì)、蟲蛀、霉變。硫熏當歸外表色澤金黃,聞起來有明顯的硫磺味;曬干當歸呈土褐色,無異味;煙熏當歸表面黃褐色,香氣濃;酒炙當歸切面深黃色,味甘、微苦,香氣濃厚,有酒香氣(見表2)。
表1 不同加工方法當歸藥材列表
表2 不同加工處理當歸外觀及氣味比較
1.2 對照品溶液制備
稱取洋川芎內(nèi)酯A,正丁基苯酞、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯酞6 mg于10 mL棕色容量瓶中,乙酸乙酯定容至刻度,混勻。
1.3 供試品溶液的制備
有機溶劑超聲提取法:取干燥當歸藥材粉碎,過四號篩,精密稱取粉末1 g于100 mL具塞錐形瓶中,加50 mL乙酸乙酯溶劑超聲提取30 min,過濾,重復(fù)提取一次,合并提取液,離心上清液用定容于100 mL量瓶中,用0.22 μm微孔濾膜過濾,備用。
1.4 色譜條件
安捷倫6890氣相色譜儀:50 ℃開始保留2 min,以10 ℃/min升至250 ℃,保留10 min,進樣量1.0 μL,分流比1∶10;載氣高純N2,尾吹氣高純N2,氣化室溫度250 ℃,檢測室溫度250 ℃。
2.1 線性關(guān)系考察
取標準品溶液至進樣瓶中,分別進樣1、2、3、4、5 μL進行測定,以峰面積為縱坐標,以進樣量為橫坐標繪制標準曲線。結(jié)果表明,范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(見圖1)。
2.2 精密度試驗
取0.1 mg·mL-1標準品溶液,進樣量1 μL,連續(xù)進樣6次,4種苯酞類化合物峰面積RSD值為0.21%,表明儀器精密度良好。
2.3 重現(xiàn)性實驗
取同一批次的甘肅岷縣當歸樣品,按供試品溶液制備方法制備,按上述色譜條件測定,各對照品色譜峰的峰面積在0.52%~1.84%范圍內(nèi),表明此方法的重現(xiàn)性良好。
2.4 穩(wěn)定性實驗
取上述供試品溶液,分別在0、2、4、8、12、24、36 h,按前述測定方法進行測定,記錄峰面積,各對照品色譜峰的峰面積對應(yīng)的濃度的RSD值在0.76%~2.25%范圍內(nèi),表明樣品至少在36 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.5 加樣回收率實驗
取已測知含量的同一批次(甘肅岷縣-DG1)樣品6份,每份約0.5 g,精密稱定,分別精密加入一定量(相當于樣品中的量)4種對照品,按供試品溶液的制備方法操作,按上述色譜條件測定。4種成分的回收率在98.33%~102.22%,RSD值在1.16%~4.72%之間[9-10]。
圖1 苯酞類成分的標準曲線
2.6 樣品測定
取9種不同加工處理方法的市售當歸樣品,按1.3項下方法制備供試品溶液,精密吸取5 uL進樣,平行測定3次,計算當歸中洋川芎內(nèi)酯A、正丁基苯酞、藁本內(nèi)酯的含量[11-12],色譜分離圖(見圖2),結(jié)果見表3和圖3。
表3 苯酞類成分的含量測定結(jié)果 /mg·g-1
圖2 不同加工方法當歸藥材GC-MS指紋圖譜
2.7 結(jié)果分析與成分鑒定
9種市售當歸藥材GC-MS指紋圖譜(如圖2)所示。結(jié)合表3、圖3分析,不同加工方法當歸藥材及飲片中,正丁基苯酞質(zhì)量分數(shù)排序為:傳統(tǒng)煙熏≈酒炙>曬干>硫熏。丁烯基苯酞質(zhì)量分數(shù)排序為:曬干>傳統(tǒng)煙熏>酒炙>硫熏。洋川芎內(nèi)酯A質(zhì)量分數(shù)排序為:酒炙>曬干>傳統(tǒng)煙熏>硫熏。蒿本內(nèi)酯質(zhì)量分數(shù)排序為:傳統(tǒng)煙熏>曬干>硫熏>酒炙。煙熏、曬干、硫熏、以及酒炙當歸四者進行比較,硫熏與酒炙當歸含量較低,而曬干當歸與煙熏當歸較為相似且較高。將硫熏與曬干當歸比較分析,當歸經(jīng)硫熏后四種苯酞類成分的含量均呈降低趨勢,其中藁苯內(nèi)酯降低最為明顯,含量下降58%,正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內(nèi)酯A分別下降49%、38%和27%。將含量測定結(jié)果導(dǎo)入Simca-P軟件,進行PCA分析,2個主成分累計解釋率達88.69%,發(fā)現(xiàn)硫熏、曬干、酒炙三種不同加工處理的當歸藥材能夠明顯區(qū)分開來(見圖3),且煙熏與曬干較接近。
圖3 不同加工方法當歸藥材PCA分析
利用氣相色譜-質(zhì)譜(GC/MS)聯(lián)機分析,經(jīng)計算機譜庫(WILEY)檢索及與標準圖譜對照,采用面積歸一法共鑒定出22種化合物[13-14]。其中主要成分為藁本內(nèi)酯、鄰苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內(nèi)酯A,相對含量分別為53.55%、23.66%、3.89%、4.20%、2.06%、2.88%(見表4)。
表4 當歸主要揮發(fā)油的化學(xué)成分及相對含量
應(yīng)用GC-MS法測定當歸藥材,共鑒定出22種化合物。定性分析表明,其主要成分為藁本內(nèi)酯、鄰苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎內(nèi)酯A、二十三酸。不同加工方法的當歸品質(zhì)呈現(xiàn)差異。其中曬干和煙熏當歸質(zhì)量較優(yōu),硫熏當歸質(zhì)量較差。曬干當歸雖然質(zhì)量較好,但當歸藥材富含油脂類成分,在保存過程中容易引起蟲蛀,不宜長期保存。煙熏當歸是傳統(tǒng)產(chǎn)地加工方式,具有外觀品相欠佳,煙熏過程的溫度、時間及操作方式多依靠主觀經(jīng)驗等缺陷,且煙熏產(chǎn)生的煙塵顆粒物會使當歸藥材有效成分和無機元素的含量及分布發(fā)生變化。硫熏當歸是一種較為廣泛應(yīng)用的加工方法,雖具有殺菌、防蟲、容易操作、花費較低及色澤較好的優(yōu)點,但硫化物及砷有害殘留嚴重影響當歸藥材品質(zhì)[15]。已有學(xué)者報道通過控制硫熏過程中的含氧量、溫度和硫磺量等參數(shù)來保障藥材品質(zhì)[16]。目前,因曬干方法簡便,成本較低且能保障當歸品質(zhì),大部分栽種者仍采用此種方法,但曬干當歸較易引起蟲蛀,未能進行長期保存,未來尋求一種防蛀方法是當歸長久貯藏和品質(zhì)保障的重要先決條件,也將是當歸加工貯藏規(guī)范化、標準化的重點之一。
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StudiesonthedifferentprocessedcommercialRadixAngelicaSinensisbasedonGC-MSandChemometrics
WEIWenlong,HUANGLinfang*
(InstituteofMedicinalPlantDevelopment,ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege,Beijing100193,China)
Objective:the research for the difference of volatile oil content was carried out to establish a reasonable processing technology for RadixAngelicaSinensis.Method:nine different processed RadixAngelicaeSinensiswere collected,GC-MS was used to qualitatively and quantatively analyze the volatile oil content,and content data were applicated in the principal component analysis.Results:the quality of smoked and sun-dried samples was better than sulfur-fumigated and wine-processed samples;different processed samples were distinguished clearly;22 compounds were identified,and the relative contents of main compounds including ligustilide,dibutyl phthalate,n-Butylphathlide,butylidenephthalide,senkyunolide A and tricosanoic acid were 53.55%,23.66%,3.89%,4.20%,2.06%,2.88%.Conclusion:The study explored the difference of volatile oil content in processed RadixAngelicaeSinensis,and laid the foundation for standardization of sulfur-fumigation.
RadixAngelicaeSinensis;Processing method;Volatile oil;GC-MS
2014-12-18)
國家自然科學(xué)基金面上項目(81274013,81473315);國家自然科學(xué)基金重點項目(81130069)
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黃林芳,副教授,碩士生導(dǎo)師,研究方向:中藥資源與質(zhì)量評價研究;Tel:(010)57833197, E-mail:lfhuang@implad.ac.cn
10.13313/j.issn.1673-4890.2015.6.014