陳海蘭，李曉華，初洪波，于洋，劉同彥，高越，劉同帥，邱智東，位鴻*

(1.長春中醫(yī)藥大學，吉林 長春 130117；2.吉林敖東集團力源制藥股份有限公司，吉林 133700)

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穿山龍配方顆粒質(zhì)量標準研究△

陳海蘭1，李曉華1，初洪波1，于洋1，劉同彥2，高越1，劉同帥1，邱智東1，位鴻2*

(1.長春中醫(yī)藥大學，吉林 長春 130117；2.吉林敖東集團力源制藥股份有限公司，吉林 133700)

目的：建立穿山龍配方顆粒質(zhì)量標準。方法：采用薄層色譜法(TLC)對穿山龍配方顆粒進行定性鑒別；用高效液相色譜法(HPLC)對其中的薯蕷皂苷進行含量測定。結(jié)果：薄層色譜鑒別特征斑點清晰，專屬性強；薯蕷皂苷進樣量在0.604 8～7.560 0 μg與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.999 9，平均回收率為97.46%，RSD為1.84%(n=6)。結(jié)論：本試驗建立的定性及定量方法簡單可行、重復(fù)性好，能有效地控制穿山龍配方顆粒的質(zhì)量。

穿山龍配方顆粒；薄層鑒別法；高效液相色譜法；質(zhì)量標準

穿山龍為薯蕷科植物穿龍薯蕷DioscoreanipponicaMakino的干燥根莖[1]，為《中華人民共和國藥典》2010版收錄藥材，氣微，味苦澀，性溫。具有祛風止痛、舒筋活血、止咳化痰的功能。臨床上用于風濕痛、風濕關(guān)節(jié)痛、筋骨麻木、大骨節(jié)病、跌打損傷、咳嗽喘息、氣管炎等疾病的治療。中藥配方顆粒又稱免煎中藥，主要通過對單味中藥進行加工提取，將其有效成分制成新劑型[2]。臨床應(yīng)用及相關(guān)藥理實驗研究表明，單味中藥配方顆粒和傳統(tǒng)的水煎劑具有基本相同的療效和藥理作用，且中藥配方顆粒具有體積小、易于攜帶保存、質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點[3]。穿山龍配方顆粒是穿山龍飲片經(jīng)水提、濃縮、干燥、制粒等工序制成的單味中藥配方顆粒劑。據(jù)報道[4-6]，薯蕷皂苷為穿山龍具有止咳、祛痰、脫敏、消炎用的甾體皂苷類活性成分。本試驗采用HPLC[7-10]測定制劑中薯蕷皂苷含量，并參考《中華人民共和國藥典》一部穿山龍項下鑒別內(nèi)容，進行穿山龍配方顆粒質(zhì)量標準研究，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(日本島津，LC-2010A)；紫外檢測器，CLASS-VP色譜數(shù)據(jù)工作站，色譜柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；KQZ3200E型超聲波清洗機(天鵬電子新技術(shù)有限公司)；DIF-6050型真空干燥箱(上海一恒實驗儀器廠)；數(shù)碼照相機(索尼公司，型號：DSC-RX100)；硅膠G板(青島海洋化工有限公司)。

1.2 試藥

薯蕷皂苷元對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111539-200612，供含量測定用，規(guī)格：20 mg)；薯蕷皂苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，規(guī)格：20 mg)；穿山龍對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：121378-200401，供鑒別用，規(guī)格：5.0 g)；3批穿山龍配方顆粒中試樣品(批號分別為20130401，20130402，20130403)；乙腈、甲醇為色譜純(美國Fisher公司)；娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司)；其他試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 對照品溶液制備

按照《中華人民共和國藥典》2010年版一部穿山龍飲片【鑒別】項下規(guī)定，取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。

2.2 對照藥材溶液制備

取穿山龍對照藥材0.5 g，加甲醇25 mL，超聲處理(功率：250 W，頻率：40 kHz)30 min，濾過，濾液蒸干。殘渣加濃度為3 mol·L-1的鹽酸溶液20 mL，使其溶解，置水浴中加熱水解30 min，放冷，再加入三氯甲烷30 mL，加熱回流15 min，濾過，取三氯甲烷液蒸干。殘渣加三氯甲烷-甲醇(1∶1)的混合溶液2 mL，使其溶解，作為對照藥材溶液。

2.3 供試品溶液制備

另取3批中試樣品的配方顆粒各2 g，研細，同2.2項下方法制成供試品溶液。

2.4 薄層色譜鑒別

照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(20∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。配方顆粒與對照藥材顯示相同的斑點。結(jié)果見圖1。

注：1.薯蕷皂苷元對照品；2.穿山龍對照藥材；3.一批樣品；4.二批樣品；5.三批樣品。圖1 三批穿山龍配方顆粒中試樣品薄層鑒別圖

3 薯蕷皂苷含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(43∶57)；柱溫為室溫；體積流量：1.0 mL·min-1；檢測波長：203 nm；進樣體積：10 μL。陰性對照品、薯蕷皂苷對照品和供試品的HPLC 圖譜見圖2。

3.2 樣品溶液制備

3.2.1 對照品溶液的制備 取薯蕷皂苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.302 4 mg·mL-1含的溶液。

3.2.2 供試品溶液的制備 取穿山龍配方顆粒粉末(過四號篩)，約3.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入65%乙醇25 mL，稱定重量，超聲處理(功率：250 W，頻率：40 kHz)30 min，放冷，用65%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.2.3 陰性對照品溶液的制備 取色譜甲醇適量，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

3.3 方法學考察

3.3.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取薯蕷皂苷對照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μL，注入液相色譜儀，測定，以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程：Y=315 320X+5372，r=0.999 9，表明薯蕷皂苷在0.604 8～7.560 0 μg與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，見圖3。

注：A.薯蕷皂苷對照品；B.穿山龍配方顆粒；C.陰性對照品。圖2 薯蕷皂苷HPLC圖譜

圖3 薯蕷皂苷標準曲線

3.3.2 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，RSD為1.24%，表明儀器精密度良好，結(jié)果見表1。

3.3.3 重復(fù)性試驗 取本品同一批次樣品6份，按3.2.2項下方法操作，按3.1色譜條件測定薯蕷皂苷平均質(zhì)量分數(shù)為2.26 mg·g-1，RSD為1.33%，表明該方法重復(fù)性良好。見表2。

表1 精密度試驗

表2 重復(fù)性試驗

3.3.4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取上述供試品溶液10 μL，分別在0、4、8、10、12、24 h進樣，按3.1色譜條件測定，RSD為0.68%，色譜峰面積在24 h內(nèi)基本無變化，說明穩(wěn)定性較好，結(jié)果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗

3.3.5 回收率試驗 取本品1.5 g(含薯蕷皂苷3.39 mg)，研細，精密稱定，精密加入薯蕷皂苷對照品4.04 mg，按3.2.2項下方法制備供試品溶液，平行6份，測定薯蕷皂苷含量，結(jié)果平均回收率為97.46%，RSD為1.84%，結(jié)果見表4。

表4 回收率試驗結(jié)果

3.3.6 樣品測定 取3批樣品(不同批次的穿山龍飲片制備而成)，按3.2.2項下方法制備供試品，按3.1色譜條件測出峰面積，采用外標法計算薯蕷皂苷的含量。結(jié)果見表5。

表5 3批樣品中薯蕷皂苷含量測定 /mg·g-1

4 討論

本試驗以有效成分薯蕷皂苷為評價指標，分別通過TLC、HPLC進行定性和定量鑒別。

依照《中華人民共和國藥典》2010年版一部穿山龍藥材鑒別方法對穿山龍配方顆粒進行定性鑒別。供試品色譜中，配方顆粒與對照藥材顯示相同的斑點。

根據(jù)配方顆粒的工藝特點，依照《中華人民共和國藥典》2010年版一部HPLC對樣品中的薯蕷皂苷含量進行檢測，本品3批中試樣品含量測定數(shù)據(jù)平均為2.432 mg·g-1。含量限度按測定結(jié)果平均值的80%計算，為1.946 mg·g-1，因此暫定含量限度為每1 g穿山龍配方顆粒含薯蕷皂苷不得少于1.95 mg。

以上結(jié)果表明，本方法科學、準確，可以作為穿山龍配方顆粒的質(zhì)量控制標準。對于穿山龍配方顆粒的質(zhì)量控制，在完成有效成分或指標成分的量化研究后，臨床療效指標方面的研究有待進一步深入。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：250.

[2] 吳鏑，趙忠慧.中藥配方顆粒的應(yīng)用與研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，25(8)：10-11.

[3] 諸明娜.免煎中藥配方顆粒與傳統(tǒng)中藥飲片的比較[J].湖北中醫(yī)雜志，2004，26(11)：55.

[4] 徐雄良，張志榮，柯尊洪.RP-HPLC法測定穿山龍中薯蕷皂苷元的含量[J].中國中藥雜志，2003，28(9)：885-887.

[5] 都述虎.RP-HPLC法測定穿龍薯蕷總皂苷中薯蕷皂苷元的含量[J].中國藥科大學學報，2001，32(1)：37-38.

[6] LI Xiaofei，QIN Peiwen，HU Shiwei.Components Analysis of Amino Acids and Mineral Elements in Rhizoma Dioscorea cirrhosae[J].Medicinal Plants，2010，23(1)：25-29.

[7] 楊文遠，熊楚明，張振秋.反相高效液相色譜法測定中草藥中薯蕷皂苷元的含量[J].分析實驗室，2002，21(1)：74-75.

[8] 胡湘春，魚紅閃，金鳳燮.穿山龍薯蕷皂苷的分離提純[J].大連輕工業(yè)學院學報，2004，23(1)：25-29.

[9] SHEN Zhi，ZHANG Wenting，ZHAO Weiliang.Simultaneous Determination of Four Major Steroidal Saponins in Seven Species of Dioscorea L.by HPLC-ELSD[J].Chinese Herbal Medicines，2010，23(2)：112-117，131.

[10] 魯鑫焱，趙懷清.薯蕷皂苷元的提取與分離分析方法[J].沈陽藥科大學學報，2003，20(6)：465-468.

ResearchonQualityStandardofRhizomaDioscoreaeNipponicaeFormulaGranules

CHENHailan1，LIXiaohua1，CHUHongbo1，YUYang1，LIUTongyan，GAOYue1，LIUTongshuai1，QIUZhidong1，WEIHong2*

(1.ChangchunUniversityofTCMChangchun130117，China；2.JilinaodongGroupLiyuanPharmaceuticalCo.Ltd.Jilin133700，China)

Objective：To establish quality standard for Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules.Methods：TLC was used for qualitative identification of Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules，the content of the main active constituent dioscin was determined by HPLC.Results：The characteristic spots in TLC identification were clear and specific.There was a good linear relationship between the peak area and quantity of dioscin at the range of 0.604 8-7.560 0 μg，r=0.999 9，and the average recovery rate was 97.46%，RSD was1.84%(n=6).Conclusion：By the study，the established qualitative and quantitative methods are simple and feasible，reproducible，and suitable for the qualitycontrol of Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules effectively.

Rhizoma Dioscoreae Nipponicae formula granules；TLC；HPLC；quality standard

2015-01-13)

吉林省科技支撐計劃項目(20130201009ZY)

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位鴻，主任藥師，研究方向：中藥配方顆粒關(guān)鍵技術(shù)研究；E-mail：641538498@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.7.016