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      醋糟栽培對(duì)杏鮑菇胞外酶活性的影響

      2015-10-09 22:07:40楊曼曼等
      湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年17期
      關(guān)鍵詞:胞外酶

      楊曼曼等

      摘要:以醋糟為主料栽培杏鮑菇(Pleurotus eryngii Quei),并在其生長發(fā)育的不同階段測定了8種胞外酶的活性。結(jié)果表明,以醋糟為主料栽培杏鮑菇頭潮菇生物學(xué)效率可達(dá)80.8%;其纖維素酶系完整,β-葡萄糖苷酶、HC酶、CMC酶、FP酶、淀粉酶和果膠酶的活性在子實(shí)體生長發(fā)育時(shí)期較高,在幼菇期均出現(xiàn)峰值;漆酶和過氧化物酶在菌絲滿袋期活性出現(xiàn)峰值,隨后呈下降趨勢,過氧化物酶活性迅速下降,幼菇期和成熟期酶活性消失。

      關(guān)鍵詞:醋糟;杏鮑菇(Pleurotus eryngii Quei);生物學(xué)效率;胞外酶

      中圖分類號(hào):S646.1+9;S816.46 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2015)17-4214-03

      DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.17.027

      醋糟是固態(tài)發(fā)酵法釀造食醋過程中所產(chǎn)生的下腳料,其中含有大量的粗蛋白質(zhì)、粗纖維及礦物質(zhì)等成分[1],有較高的利用價(jià)值。目前,醋糟主要用于生產(chǎn)飼料[2]、有機(jī)肥[3]及植物無土栽培基質(zhì)[4,5],尚不能被充分利用,迫切需要進(jìn)一步挖掘其應(yīng)用潛力。為提高醋糟的綜合利用率,近年已有學(xué)者利用醋糟栽培食用菌做了一些研究[6]。為此,以醋糟為主料栽培杏鮑菇(Pleurotus eryngii Quei),并測定了杏鮑菇各生長期的8種胞外酶活性,以期對(duì)醋糟栽培食用菌的理論基礎(chǔ)進(jìn)行探索。

      1 材料與方法

      1.1 材料

      1)菌種。杏鮑菇由煙臺(tái)大學(xué)應(yīng)用微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

      2)試劑和材料。木聚糖、果膠、半乳糖醛酸和羧甲基纖維素鈉均為Sigma公司生產(chǎn),其他多為國產(chǎn)分析純。醋糟為江蘇鎮(zhèn)江恒順醋業(yè)提供,麥麩為市售。

      3)醋糟培養(yǎng)基。培養(yǎng)基配方:醋糟78%,麥麩20%,石膏1%,蔗糖1%,料水比為1∶1.4(m∶V)。

      1.2 方法

      1)栽培方法。培養(yǎng)料按比例加水?dāng)嚢杈鶆蚝笱b入17 cm×33 cm的聚丙烯塑料袋,每袋折合干料400 g,121 ℃高壓蒸汽滅菌1.5 h。接入原種約3 g,22 ℃恒溫培養(yǎng)。菌絲滿袋后移入溫度為15~18 ℃,濕度為85%~95%的菇房開袋出菇,出菇管理按常規(guī),試驗(yàn)只統(tǒng)計(jì)和測定了第一潮杏鮑菇的產(chǎn)量及胞外酶活性。

      2)粗酶液制備方法。在杏鮑菇生長發(fā)育的不同階段(半袋期、滿袋期、原基期、幼菇期、成熟期),分別取3個(gè)菌袋,將培養(yǎng)物取出后,每袋多點(diǎn)取樣2份,每份濕重7 g,然后把從3袋中取出的樣品(21 g)混勻,共得2份樣品。一份樣品加100 mL超純水,20 ℃浸提4 h,4層紗布過濾后,4 000 r/min離心10 min,上清液即為粗酶液;另一份樣品在80 ℃恒溫箱中烘至恒重,用于計(jì)算酶活力。

      3)酶活性的測定方法。淀粉酶、果膠酶參照王玉萬等[7]的方法;羧甲基纖維素酶(CMC)、濾紙纖維素酶(FP)參照Mandels等[8]的方法;β-葡萄糖苷酶、半纖維素酶(HC)、漆酶和過氧化物酶分別參照Sengupta等[9]、Shamala等[10]、潘迎捷等[11]和張志良等[12]的方法。

      淀粉酶、CMC酶、β-葡萄糖苷酶和果膠酶的酶活力單位均為:1 U=1 mg葡萄糖/(30 min·g干培養(yǎng)物)。FP酶的酶活力單位為:1 U=1 mg葡萄糖/(60 min·g干培養(yǎng)物)。HC酶的酶活力單位為:1 U=1mg木糖/(30 min·g干培養(yǎng)物)。漆酶的酶活力單位為:1 g干培養(yǎng)物中的酶量每分鐘使OD600 nm改變0.01為一個(gè)活力單位。過氧化物酶的酶活力單位為:1 g干培養(yǎng)物中的酶量每分鐘使OD470 nm改變0.01為一個(gè)活力單位。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 杏鮑菇在醋糟培養(yǎng)基中的菌絲生長速度及生物學(xué)效率

      由試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析得出,杏鮑菇在醋糟培養(yǎng)基中生長發(fā)育過程中菌絲生長速度為0.49 cm/d,第一潮杏鮑菇平均每袋產(chǎn)量為323.2 g,生物學(xué)效率達(dá)80.8%。

      2.2 杏鮑菇在醋糟培養(yǎng)基中生長期間胞外CMC酶、FP酶和β-葡萄糖苷酶活性變化規(guī)律

      從圖1可以看出,在整個(gè)生長發(fā)育階段杏鮑菇3種胞外酶活性大小為β-葡萄糖苷酶>FP酶>CMC酶,但它們的活性變化趨勢大致相同,即在菌絲生長初期活性較低,滿袋期后3種酶活性逐漸上升,同時(shí)在幼菇期出現(xiàn)最高酶活性峰值,隨后進(jìn)入成熟期的過程中酶活性顯著下降。

      2.3 杏鮑菇在醋糟培養(yǎng)基中生長期間胞外HC酶、淀粉酶和果膠酶活性變化規(guī)律

      由圖2顯示,在菌絲生長的最初階段,杏鮑菇淀粉酶、果膠酶和HC酶活性較低,HC酶和淀粉酶活性在菌絲滿袋時(shí)期出現(xiàn)最低點(diǎn),果膠酶活性在原基時(shí)期出現(xiàn)最低點(diǎn),隨后3種酶活性迅速增長,并同時(shí)在幼菇期出現(xiàn)峰值,隨著生長培養(yǎng)基的降解,3種酶活性雖略有下降,但在子實(shí)體成熟過程中一直保持較高的酶活性水平。

      2.4 杏鮑菇在醋糟培養(yǎng)基中生長期間胞外漆酶和過氧化物酶活性變化規(guī)律

      由圖3得知,漆酶和過氧化物酶活性在菌絲生長的初期階段持續(xù)增長,在滿袋期和原基期一直維持在較高水平。原基形成后,漆酶酶活性呈下降趨勢;過氧化物酶活性迅速下降,幼菇期和成熟期酶活下降為0。

      3 小結(jié)與討論

      以醋糟為主料栽培杏鮑菇過程中可測得8種胞外酶活性,由此可推測杏鮑菇能分解利用醋糟中的纖維素、半纖維素、木質(zhì)素和淀粉等大分子碳源營養(yǎng)物質(zhì)。杏鮑菇在菌絲生長期間胞外纖維素酶系(CMC酶、β-葡萄糖苷酶和FP酶)、淀粉酶、HC酶和果膠酶變化較平穩(wěn),在生殖生長階段都有所提高,到幼菇期達(dá)到了頂峰。這說明杏鮑菇子實(shí)體發(fā)育階段需大量分解纖維素、半纖維素、淀粉等物質(zhì)以滿足其生殖生長和子實(shí)體形成的需要,這與其同屬的金頂側(cè)耳(P. citrinopileatus)[13]較相似。漆酶和過氧化物酶均屬于降解木質(zhì)素的酶類[14],由兩種酶活性變化趨勢可推斷,木質(zhì)素的降解速率與杏鮑菇在醋糟中各生長期相對(duì)應(yīng),菌絲生長初期木質(zhì)素降解速率較快,原基形成后降解速率下降。漆酶降解木質(zhì)素的組分所占比重較大[15],原基形成后過氧化物酶活性消失,但是木質(zhì)素降解仍在進(jìn)行??傮w來說,木質(zhì)素的降解隨杏鮑菇培養(yǎng)時(shí)間的增長而降低,這與巴西蘑菇(Agaricus blazei)[16]和金頂側(cè)耳(P. citrinopileatus)[13]等的情況相似。

      由以上結(jié)果得出結(jié)論,以醋糟為主料栽培杏鮑菇是可行的,并且第一潮菇生物學(xué)效率可達(dá)80.8%。下一步可結(jié)合木質(zhì)纖維素降解轉(zhuǎn)化的試驗(yàn)添加其他輔料,進(jìn)一步優(yōu)化其配方以提高生物學(xué)效率。

      參考文獻(xiàn):

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