補腎益沖丸延緩大鼠卵巢早衰實驗研究

寧曄，劉小婷，寧艷，單志群，許志芃

深圳市中醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518033

補腎益沖丸延緩大鼠卵巢早衰實驗研究

寧曄，劉小婷，寧艷，單志群，許志芃

深圳市中醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518033

目的：研究補腎益沖丸對卵巢早衰大鼠動物的干預(yù)作用。方法：建立卵巢早衰大鼠動物模型，在上述模型基礎(chǔ)上，相應(yīng)給藥，監(jiān)測空白對照組、中藥組、倍美力組、造模對照組大鼠的情況及檢測血清激素［促卵泡生成素（FSH）、促黃體生成素（LH）、雌二醇（E2）］、抗卵巢抗體水平。結(jié)果：造模第10天開始，中藥組、倍美力組、造模對照組3組大鼠均不同程度出現(xiàn)容易激惹、大便干結(jié)，毛無光澤，體毛蓬松，脫毛的癥狀，動情周期紊亂等，有的陰道涂片僅有動情間期的白細胞。灌胃后30天，中藥組、倍美力組FSH、LH降低，E2升高，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。灌胃后30天，中藥組血清抗卵巢抗體下降，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：補腎益沖丸對卵巢早衰模型大鼠的FSH、LH、E2有改善作用，亦可調(diào)節(jié)免疫功能，改善機體免疫狀態(tài)，恢復(fù)卵巢功能，而達到治療卵巢早衰的功效。

卵巢早衰；補腎益沖丸；動物實驗；大鼠

卵巢早衰（POF）是指婦女在40歲以前由于卵巢功能衰退而引起月經(jīng)失調(diào)、不孕、性功能降低、更年期綜合征等一系列癥狀的疾病。因此，探討POF的有效治療方法十分必要。中醫(yī)藥具有整體調(diào)控和多靶點、多方式調(diào)節(jié)的特點，特別是能提高卵巢對促性腺激素的反應(yīng)性和卵巢中性激素受體的含量，促使卵巢功能恢復(fù)和改善，且與西藥相比無任何毒副反應(yīng)，安全而有效，因而對女性卵巢功能失調(diào)類疾病的防治顯示出優(yōu)勢［1］。

補腎益沖丸是取得廣東省藥監(jiān)局批準文號的科研制劑，研究表明，該藥可提高排卵和妊娠率，對接受試管嬰兒助孕技術(shù)患者胚胎著床、成功妊娠的療效肯定［2］。在本院臨床上長期用于治療月經(jīng)失調(diào)，不孕癥等病癥。近年來隨著POF患者的日益增多，本藥被用于此病腎虛型患者的治療，臨床療效明顯?，F(xiàn)擬通過POF動物模型的實驗研究，揭示補腎益沖丸對POF的作用機理。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級雌性成熟未交配過的SD大鼠40只，12周齡，體重250～270 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2 藥物 中藥制備：補腎益沖丸由廣東省藥監(jiān)局批準、深圳市中醫(yī)院制劑室提供（2000年深衛(wèi)制劑第3P-036號，2003年廣東省藥監(jiān)局批準文號：粵藥制字ZO3O3OO12），每10 g含生藥21.9 g，組成：熟地黃，當歸、白芍、山茱萸、黃精、紫河車粉，鹿角膠、續(xù)斷、菟絲子、巴戟天、淫羊藿、香附。用法：實驗時按所需分量將藥丸配置成混懸液備用。倍美力溶液制備：每片0.625m g［由美國惠氏艾爾斯特制藥公司艾爾斯特藥廠制造，惠氏制藥有限公司分裝，生產(chǎn)批號0502090，國藥準字（2001）J-51（2）號］，生理鹽水溶解定容。

1.3 造模方法 所有雌性大鼠每天進行陰道細胞涂片檢查，選擇動情周期4～5天的大鼠，隨機分為中藥組、倍美力組、造模對照組、空白對照組。中藥組、倍美力組、造模對照組以雷公藤多甙片50m g/kg灌胃造模，每天1次，連續(xù)灌胃14天［3］?？瞻讓φ战M：連續(xù)生理鹽水2m L/kg灌胃14天。中藥組：造模結(jié)束后24 h用補腎益沖丸混懸液（按成人等效劑量8倍于成人劑量）24 g/kg灌胃，每天1次，連續(xù)30天。倍美力組：造模結(jié)束后24 h用倍美力0.075m g/kg灌胃，每天1次，連續(xù)30天。造模對照組：造模結(jié)束后24 h用生理鹽水2 m L/kg灌胃，每天1次，連續(xù)30天?？瞻讓φ战M：繼續(xù)生理鹽水灌胃2m L/kg灌胃，每天1次，連續(xù)30天。

1.4 一般情況觀察 活動：有無活動抑制、嗜睡、厭食、旋轉(zhuǎn)、輕癱等行為異常。糞便、尿液或身體其他排出物有無帶血。有無立毛、體毛篷松、脫發(fā)，腫脹、腫塊、損傷等情況。若有動物死亡，記錄死亡數(shù)量及原因，考慮中途因灌藥/喂養(yǎng)不當?shù)人劳鲈颉?/p>

1.5 采血檢測 灌胃后第1天及處死當天各組大鼠，乙醚吸入麻醉后，眼眶下靜脈叢取血。取血3m L注入干燥管，離心，取血清，儲存于-20℃冰箱備用，用以檢測血清激素［促卵泡生成素（FSH）、促黃體生成素（LH）、雌二醇（E2）］水平。采用羅氏電化學(xué)發(fā)光法測定。將血清放入測定管后由Elecsys 2010 Roche全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（瑞士Roche公司）自動完成。用間接ELISA方法檢測抗卵巢抗體，試劑盒由上海玉蘭生物技術(shù)研究所提供，每次實驗均按試劑盒說明書操作。血清按1∶20稀釋，結(jié)果以酶標儀讀數(shù)判斷。

1.6 卵巢檢測 處死各組大鼠后，觀察雙側(cè)卵巢大體解剖，并取下雙側(cè)卵巢組織，用10%（體積分數(shù)）的甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，待做HE染色及免疫組織化學(xué)分析，光鏡觀察卵巢的組織形態(tài)改變、卵泡的大小發(fā)育情況。

2 實驗結(jié)果

2.1 一般形態(tài) 造模第10天開始，中藥組、倍美力組、造模對照組3組大鼠均不同程度出現(xiàn)容易激惹、大便干結(jié)，毛無光澤，體毛蓬松，脫毛的癥狀，動情周期紊亂等，有的陰道涂片僅有動情間期的白細胞。

2.2 各組大鼠血清激素變化比較 見表1。造模結(jié)束后30天，中藥組、倍美力組FSH、LH降低，E2升高，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組大鼠血清激素變化比較±s）

表1 各組大鼠血清激素變化比較±s）

與空白對照組比較，①P＜0.05

組別空白對照組中藥組倍美力組造模對照組n FSH（mIU/mL） LH（mIU/mL） E2（pg/mL）10 10 10 10造模結(jié)束后第1天11.05±1.36 13.25±1.67①13.83±2.01①13.71±1.62①造模結(jié)束后第30天11.26±1.85 11.20±1.74 12.94±1.15 13.68±2.53①造模結(jié)束后第1天8.16±1.39 8.85±1.26①8.74±1.31①8.95±2.03①造模結(jié)束后第30天8.08±1.92 8.02±0.87 8.26±1.26 8.56±1.73①造模結(jié)束后第1天754.39±80.47 602.75±68.46①608.76±89.43①612.58±76.17①造模結(jié)束后第30天748.41±88.02 725.59±82.48 738.29±65.47 638.59±74.39①

2.3 各組大鼠血清抗卵巢抗體變化比較 見表2。造模結(jié)束后30天，中藥組血清抗卵巢抗體下降，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 各組大鼠血清抗卵巢抗體變化比較±s） OD

表2 各組大鼠血清抗卵巢抗體變化比較±s） OD

與空白對照組比較，①P＜0.05

組別空白對照組中藥組倍美力組造模對照組n 10 10 10 10造模結(jié)束后第1天1.49±0.18 1.92±0.25①1.95±0.33①1.93±0.27①造模結(jié)束后第30天1.50±0.25 1.61±0.38 1.91±0.24①1.89±0.19①

3 討論

POF為臨床常見病、疑難病，其發(fā)病率逐年增加，其發(fā)生率約為1%，卵巢狀態(tài)與正常絕經(jīng)后相似，嚴重影響婦女身心健康。其發(fā)病原因尚不明確，有學(xué)者認為可能與自身免疫、遺傳因素，促性腺激素及其受體傳導(dǎo)缺陷，原始卵泡儲備少，以及物理化學(xué)因素等有關(guān)［4］。探討POF的有效治療方法十分必要。本研究探討補腎益沖丸對POF大鼠動物的干預(yù)作用，初步闡明了作用機理。實驗結(jié)果表明，補腎益沖丸對POF造模大鼠的FSH、LH、E2有改善作用，亦可調(diào)節(jié)免疫功能，改善機體免疫狀態(tài)，恢復(fù)卵巢功能，而達到治療POF的功效。

［1］張蕾，曲季芬.卵巢早衰的中醫(yī)藥治療研究進展［J］.中醫(yī)藥信息，2009，26（2）：10-12.

［2］許爽君，楊水清，王建萍，等.補腎益沖丸的毒理學(xué)實驗研究［J］.中國中醫(yī)急癥，2007，16（7）：852-853.

［3］高慧，楊涓，夏天，等.補腎調(diào)沖方對卵巢早衰大鼠卵巢相關(guān)因子TNF-α、IFN-γ蛋白和基因表達的影響［J］.國醫(yī)論壇，2008，23（3）：38-39.

［4］王迪華，梁雪雯，周紅.逍遙助卵煎對卵巢早衰患者血清性激素水平的影響［J］.中國婦幼保健，2007，22（33）：4687-4688.

（責(zé)任編輯：駱歡歡）

R711.75

A

0256-7415（2015）06-0268-02

10.13457/j.cnki.jncm.2015.06.126

2014-12-30

深圳市科技計劃項目（201102200）

寧曄（1974-），女，主管護師。