中藥干預(yù)對(duì)氣陰兩虛型系統(tǒng)性紅斑狼瘡PBMC凋亡及相關(guān)指標(biāo)的影響

胡曉琳

天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，天津 300193

中藥干預(yù)對(duì)氣陰兩虛型系統(tǒng)性紅斑狼瘡PBMC凋亡及相關(guān)指標(biāo)的影響

胡曉琳

天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，天津 300193

目的：觀察清熱化瘀滋陰方對(duì)氣陰兩虛型系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者外周單個(gè)核細(xì)胞（PMBC）凋亡及相關(guān)指標(biāo)的影響。方法：將60例氣陰兩虛型SLE患者隨機(jī)分為對(duì)照組與觀察組各30例。對(duì)照組給予常規(guī)激素治療；觀察組在對(duì)照組治療基礎(chǔ)上加用中藥干預(yù)。治療3月，觀察2組患者PMBC凋亡情況，記錄其臨床指標(biāo)的變化狀況。結(jié)果：治療后血白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血小板計(jì)數(shù)（BPC）、細(xì)胞凋亡率，2組治療前后比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療后觀察組各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后血沉（ESR）、補(bǔ)體C3、ANA、抗ds-DNA，2組治療前后比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療后2組各項(xiàng)指標(biāo)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后bcl-2、bax、fas、P53、C-myc觀察組與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：應(yīng)用中藥清熱化瘀滋陰方干預(yù)SLE患者，可降低細(xì)胞凋亡率，糾正患者的免疫調(diào)節(jié)作用，在改善病情方面有一定的效果。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；氣陰兩虛；中藥；激素；細(xì)胞凋亡

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的治療，西醫(yī)采取以免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素等藥物為主的方案治療［1］，也有報(bào)道顯示，患者長(zhǎng)期服用激素及免疫抑制劑類(lèi)藥物可能使其機(jī)體出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)［2］。近年來(lái)，據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)資料顯示，SLE活動(dòng)期以氣陰兩虛型多見(jiàn)，采取清熱化瘀滋陰方聯(lián)合傳統(tǒng)西藥激素治療，對(duì)改善患者的臨床指標(biāo)有重要的作用［3］。基于此，為進(jìn)一步證實(shí)中藥干預(yù)在氣陰兩虛型SLE患者中的臨床作用，評(píng)估其對(duì)患者外周單個(gè)核細(xì)胞（PMBC）細(xì)胞凋亡的影響，筆者對(duì)本院60例患者展開(kāi)了對(duì)照研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2012年1月—2014年1月本院收治的氣陰兩虛型SLE患者，共60例，隨機(jī)分為2組，各30例。對(duì)照組男12例，女18例；年齡19～61歲，平均（31.6±2.4）歲；病程1月～4年，平均（2.1±0.4）年；活動(dòng)期初發(fā)病例11例，已用常規(guī)西藥治療19例。觀察組男10例，女20例；年齡20～62歲，平均（30.9±1.9）歲；病程2月～5年，平均（2.0±0.3）年；其中活動(dòng)期初發(fā)病例12例，已用常規(guī)西藥治療18例。2組性別、年齡、病程等比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) ①符合美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，符合中醫(yī)內(nèi)科學(xué)氣陰兩虛型SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)；②血肌酐≤265.2μm ol/L；③排除合并心腦血管疾病、造血系統(tǒng)疾病患者；④排除合并干燥綜合征、皮肌炎、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者；⑤排除妊娠期婦女，排除合并嚴(yán)重感染等并發(fā)癥患者。

2 治療方法

2.1 對(duì)照組 給予常規(guī)西藥治療，強(qiáng)的松（浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)），每天30m g，3月為1療程。

2.2 觀察組 對(duì)照組治療基礎(chǔ)上給予中藥清熱化瘀滋陰方治療。組成：麥冬、赤芍、水牛角片、炒白術(shù)、連翹、牡丹皮、紫草、秦艽各10 g，青風(fēng)藤、金銀花各15 g，白花蛇舌草25 g。水煎服，分早晚2次服用，治療3月。

3 觀察指標(biāo)與統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3.1 觀察指標(biāo) ①凋亡細(xì)胞及凋亡基因產(chǎn)物檢測(cè)：分別于治療前與治療3月后檢測(cè)于清晨空腹取患者外周靜脈血清2 m L，放于試管，稀釋后，加入淋巴細(xì)胞分離液，離心后，取淋巴細(xì)胞層，稀釋洗滌，離心15m in后去上清，加入0.9%氯化鈉溶液，稀釋?zhuān)靹?，離心棄上清。采用流式細(xì)胞儀器檢測(cè)患者血淋巴細(xì)胞凋亡率。制備外周靜脈血淋巴細(xì)胞，行PBS洗滌，重懸細(xì)胞，控制濃度為1×106/m L，取適量細(xì)胞懸液放入流式管內(nèi)，加入碘化丙啶溶液，混合均勻后，避光孵育，15m in后，加入PBS洗滌液，并使流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。同時(shí)取100μL外周單個(gè)核細(xì)胞，加入鼠抗人bax、bcl-2、c-m yc與p53單克隆抗體，避光反應(yīng)0.5 h，行FCM檢測(cè)，記錄凋亡基因產(chǎn)物表達(dá)水平。②治療前后血常規(guī)及免疫學(xué)指標(biāo)檢測(cè)：晨起取靜脈血EDTA-2K抗凝2m L，枸櫞酸納抗凝1.6m L，普通干管2m L，分別進(jìn)行血白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血小板（BPC）計(jì)數(shù)以及血沉（ESR）、IgG、補(bǔ)體及自身抗體檢測(cè)。

3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以±s）表示，行t檢驗(yàn)。

4 結(jié)果

4.1 2組治療前后血常規(guī)指標(biāo)及細(xì)胞凋亡率變化比較 見(jiàn)表1。治療前，2組血常規(guī)及外周淋巴細(xì)胞凋亡率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），治療后，2組WBC、RBC、BPC、細(xì)胞凋亡率與治療前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后觀察組WBC、RBC、BPC、細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 2組治療前后血常規(guī)指標(biāo)及細(xì)胞凋亡率變化比較±s）

表1 2組治療前后血常規(guī)指標(biāo)及細(xì)胞凋亡率變化比較±s）

與治療前比較，①P＜0.05，與對(duì)照組治療后比較，②P＜0.05

指標(biāo)WBC（×109/L）RBC（×1012/L）BPC（×109/L）細(xì)胞凋亡率（%）觀察組（n=30） 對(duì)照組（n=30）治療前3.04±0.32 3.46±0.27 85.25±27.30 11.96±3.07治療后4.51±0.99①②4.13±0.37①②145.17±30.11①②2.25±0.61①②治療前3.11±0.36 3.47±0.92 86.17±28.04 13.10±2.57治療后3.42±0.86①3.90±0.66①119.50±32.75①6.36±1.47①

4.2 2組治療前后免疫學(xué)指標(biāo)變化比較 見(jiàn)表2。治療前，2組患者免疫學(xué)指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），治療后，2組ESR、補(bǔ)體C3、抗核抗體（ANA）、抗ds-DNA與治療前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組IgG治療前后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后2組ESR、補(bǔ)體C3、ANA、抗ds-DNA比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 2組治療前后免疫學(xué)指標(biāo)變化比較±s）

表2 2組治療前后免疫學(xué)指標(biāo)變化比較±s）

與本組治療前比較，①P＜0.05，與對(duì)照組比較，②P＜0.05

觀察組（n=30） 對(duì)照組（n=30）指標(biāo)ESR（mm/h）補(bǔ)體C3（g/L）IgG（g/L）ANA（%）抗ds-DNA治療前57.81±28.30 0.51±0.17 22.59±4.21 1∶（163.23±13.66）80.14±25.31治療后45.34±21.62①②0.94±0.27①②18.38±3.68①1∶（73.71±13.15）①②63.07±19.55①②治療前60.77±35.64 0.45±0.08 20.85±3.37 1∶（145.30±13.51）75.81±23.51治療后53.16±9.60①0.78±0.14①19.23±5.27 1∶（83.17±13.54）①70.96±20.14①

4.3 2組PMBC凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)水平比較 見(jiàn)表3。治療后bcl-2、bax、fas、P53、C-m yc觀察組與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 2組PMBC凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)水平比較±s）

表3 2組PMBC凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)水平比較±s）

與對(duì)照組比較，①P＜0.05

組別觀察組對(duì)照組bcl-2 4.12±0.57①3.81±0.51 bax 3.65±0.12①4.17±0.53 fas 3.65±0.21①3.70±0.06 P53 3.50±0.15①3.36±0.10 C-myc 3.41±0.37①3.53±0.22

5 討論

SLE是人體自身免疫性疾病中的一種，通?？衫奂安煌钠鞴?，且目前臨床上對(duì)其致病機(jī)制尚未明確。其疾病特點(diǎn)表現(xiàn)為SLE患者自身反應(yīng)B細(xì)胞激活，釋放大量抗體。有文獻(xiàn)提示，免疫介導(dǎo)是SLE疾病發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)［4］。且其免疫復(fù)合物可沉積于組織中，同樣也可通過(guò)相關(guān)介導(dǎo)炎癥因子釋放，損傷患者血管組織。目前臨床上針對(duì)SLE患者的治療尚無(wú)確定特效治療方案。有研究提示，SLE與患者的淋巴細(xì)胞及其亞類(lèi)細(xì)胞的凋亡、缺陷存在明顯的相關(guān)性［5］，在細(xì)胞凋亡的過(guò)程中生成的核小體可作為SLE患者的自身抗原，對(duì)其有較高的特異性，同時(shí)在過(guò)程中為自身抗原提供了相關(guān)的修飾影響，強(qiáng)化了其免疫原性，因而有研究提示，阻斷患者體內(nèi)核小體的免疫病理反應(yīng)，是糾正其癥狀的關(guān)鍵［6］。但對(duì)SLE患者淋巴細(xì)胞凋亡率的變化，諸多研究者存在一定的爭(zhēng)議，有觀點(diǎn)認(rèn)為SLE患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞的凋亡率與SLE的活動(dòng)度有密切的聯(lián)系，也有觀點(diǎn)認(rèn)為SLE患者其外周淋巴細(xì)胞凋亡率明顯高于正常健康人［7］。同時(shí)也有持反向意見(jiàn)，認(rèn)為SLE患者外周淋巴細(xì)胞凋亡率可能降低。但SLE患者淋巴細(xì)胞凋亡率變化的過(guò)程中，其細(xì)胞凋亡均處于非正常狀態(tài)，因而臨床有相關(guān)學(xué)者對(duì)藥物干預(yù)，促使患者細(xì)胞凋亡率恢復(fù)正常展開(kāi)了研究，提示外周淋巴細(xì)胞凋亡率的變化可作為判定藥物治療有效性的關(guān)鍵指標(biāo)［8］。也有研究認(rèn)為，SLE患者外周單核細(xì)胞中凋亡基因表達(dá)水平與疾病的進(jìn)展存在一定的相關(guān)性，相較正常健康人而言，SLE患者PBMC凋亡基因中bax與bcl-2基因蛋白表達(dá)水平提升，其中bax與fas均有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，而bcl-2則起到抑制細(xì)胞凋亡的作用，凋亡基因平衡失調(diào)是導(dǎo)致凋亡細(xì)胞調(diào)節(jié)紊亂的關(guān)鍵原因。觀察組接受治療后，其凋亡細(xì)胞表達(dá)水平更為接近正常值，提示中藥在SLE患者的臨床干預(yù)中起到重要的作用。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡歸于中醫(yī)學(xué)“痹癥”、“陰陽(yáng)毒”、“日曬瘡”范疇，認(rèn)為肝腎陰虧，稟賦不足，勞倦過(guò)度，七情內(nèi)傷，日光曝曬是其致病因素，六淫侵襲，飲食不節(jié)，導(dǎo)致熱毒內(nèi)聚，血?dú)怵鲎?，津液耗損，初傷血脈筋骨，后累及臟腑。本次研究觀察組患者在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上加用中藥清熱化瘀滋陰方進(jìn)行干預(yù)，方藥中白花蛇舌草與水牛角為君藥，主要發(fā)揮止血涼血，清熱瀉火，化瘀解毒之功效，連翹、金銀花、生地黃、麥冬等則為臣藥，養(yǎng)陰扶正，清熱生津，瀉火解毒，活血化瘀。且方中青風(fēng)藤有明顯通絡(luò)止痛之功效，生白術(shù)則中和脾胃，健脾化濕。諸藥合用，則可發(fā)揮藥物協(xié)同作用，滋陰養(yǎng)氣，補(bǔ)虛瀉實(shí)，活血散瘀，糾正患者的癥狀表現(xiàn)?？傊?，采用中藥清熱化瘀滋陰方干預(yù)，可促使患者血清RBC、BPC、補(bǔ)體C3及WBC水平提升，同時(shí)降低血清IgG、ESR、ANA的表達(dá)，穩(wěn)定患者凋亡基因的表達(dá)。觀察組采用中藥干預(yù)聯(lián)合傳統(tǒng)激素治療，結(jié)果提示，中藥干預(yù)后，患者外周淋巴細(xì)胞凋亡率明顯下降，提示病情有所好轉(zhuǎn)。由此可知，在SLE患者的臨床治療中，應(yīng)用中藥清熱化瘀滋陰方干預(yù)，可降低細(xì)胞凋亡率，糾正患者的免疫調(diào)節(jié)作用，在改善病情方面有一定的效果，值得進(jìn)一步研究。

［1］李冬芹，代永霞，張潔，等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子m RNA表達(dá)水平的研究［J］.臨床皮膚科雜志，2009，38（2）：80-82.

［2］周培媚，路永紅，程曉云，等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及功能變化與病情的相關(guān)性［J］.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2011，25（2）：83-86.

［3］杜臻雁，冷曉梅，唐福林，等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個(gè)核細(xì)胞T細(xì)胞受體重組刪除環(huán)水平［J］.中華內(nèi)科雜志，2010，49（6）：500-503.

［4］趙寶景，黃新芳，沈南，等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個(gè)核細(xì)胞單鏈DNA表達(dá)研究［J］.上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010，30（6）：703-706.

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［6］蔣震，刁慶春.兩種中藥方劑治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的免疫機(jī)制的初步研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（23）：3205-3206，3209.

［7］周臘梅，汪悅.涼血化瘀解毒法對(duì)MRL/lpr鼠相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響［J］.中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2011，5（6）：1792-1796.

［8］梁衛(wèi)，張麗玲，龔林，等.清熱化瘀滋陰方對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡及臨床指標(biāo)的影響［J］.中國(guó)中醫(yī)急癥，2010，19（1）：41-42，86.

（責(zé)任編輯：馬力）

R593.24+1

A

0256-7415（2015）06-0099-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.00.047

2015-01-25

胡曉琳（1970-），女，副主任技師，研究方向：自身免疫性疾病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與診斷。