高丹丹，郭鵬輝，祁高展，溫海超（西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅蘭州730030）

響應(yīng)面法優(yōu)化薄荷全草總黃酮的提取工藝

高丹丹，郭鵬輝，祁高展，溫海超
（西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅蘭州730030）

以薄荷為材料，采用超聲波輔助法提取薄荷全草總黃酮，研究乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲波處理時(shí)長(zhǎng)、料液比、水浴溫度對(duì)提取率的影響，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法優(yōu)化薄荷全草總黃酮的提取工藝條件，得最佳提取工藝，即：乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、料液比1∶20、水浴溫度50℃、超聲波提取時(shí)間30min，在此工藝下總黃酮提取率為3.11%± 0.06%。

薄荷，總黃酮，超聲波，響應(yīng)面法

薄荷（Mentha haplocalyx）為被子植物門、雙子葉植物綱、唇形目、唇形科、薄荷屬多年生宿根性草本植物，主要生長(zhǎng)于水旁、潮濕地，對(duì)環(huán)境適應(yīng)性較強(qiáng)。薄荷是一味傳統(tǒng)中藥，可治療感冒發(fā)熱、喉痛、頭痛、目赤痛、皮膚風(fēng)疹搔癢、麻疹不透等癥，此外對(duì)癰、疽、疥、癬、漆瘡亦有效［1］。薄荷可制作菜肴，做涼拌菜和烤肉的調(diào)味料，可作食品添加劑，用于糖果、清涼食品飲料、牙膏、漱口水、噴霧香精等制品［2］。研究表明薄荷的水提物對(duì)酪氨酸酶有較好的激活作用，能促進(jìn)毛發(fā)中黑色素的生成，有烏發(fā)作用，可用于化妝品［3］。薄荷提取物成分還有防曬［4］、抗衰老、去臭以及清涼作用，并能對(duì)某些細(xì)菌抑制其繁殖和殺死部分細(xì)菌及霉菌，故對(duì)于頭癢和頭屑過(guò)多的癥狀有一定的治療作用［7］。薄荷中黃酮類化合物具有抗氧化［5］、抗腫瘤及抑菌作用［6］。由于薄荷黃酮有多種生物活性，成為研究和開(kāi)發(fā)利用的熱點(diǎn)。目前國(guó)內(nèi)對(duì)薄荷黃酮提取的研究報(bào)道的不多，有研究采用正交的方法優(yōu)化了薄荷總黃酮的提取工藝［7-9］，侯學(xué)敏等［10］采用響應(yīng)面法優(yōu)化薄荷葉總黃酮提取工藝，并研究其抗氧化活性。他們的研究獲得較高的黃酮提取率，但是他們采用四因素三水平的響應(yīng)面分析，最終模型的R2為0.8327，擬合度不是很好。在實(shí)際的生產(chǎn)和開(kāi)發(fā)中，人們大多采用機(jī)器收割的方式獲得薄荷全草，獲得薄荷葉的成本較高，本研究在單因素的基礎(chǔ)上采用響應(yīng)面法對(duì)薄荷全草總黃酮提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，去掉對(duì)實(shí)驗(yàn)影響不顯著的因素，使得模型的擬合度更好，獲得更加可信的工藝條件，為薄荷進(jìn)一步研究及開(kāi)發(fā)利用，提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

野生薄荷全草采自江西吉安井岡山；硝酸鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、乙醇均為國(guó)產(chǎn)分析純；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自阿拉丁公司。

微型植物試樣粉碎機(jī)北京科偉永興儀器有限公司；FAZ204B型電子天平上海精密科學(xué)儀器有限公司；酒精計(jì)河北省河間市黎民居標(biāo)準(zhǔn)儀表廠；HWS28型電熱恒溫水浴鍋上海一恒科學(xué)儀器有限公司；超聲波清洗機(jī)上海聲彥超聲波儀器有限公司；水流抽氣機(jī)上海愛(ài)朗儀器有限公司；722E型可見(jiàn)分光光度計(jì)上海光譜儀器有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1樣品預(yù)處理將薄荷全草（水分含量4.72%）用微型植物試樣粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩備用。

1.2.2總黃酮含量的測(cè)定

1.2.2.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制備準(zhǔn)確稱取5.0mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用30%乙醇溶解，定容至50mL，配成0.1mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密移取0.0、1.0、2.0、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10mL比色管中，用30%乙醇溶液定至5.0mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，靜置6min；加入10%硝酸鋁溶液0.3mL，靜置6min；加入1mol/L氫氧化鈉溶液4mL，用30%乙醇定容至10.0mL，靜置15min。在510nm處測(cè)定其吸光度，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2.2樣品測(cè)定準(zhǔn)確移取1mL待測(cè)樣品于10mL比色管中，加30%乙醇溶液定容至5mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，靜置6min；加入10%硝酸鋁溶液0.3mL，靜置6min；加入1mol/L氫氧化鈉溶液4mL，用30%乙醇定至10.0mL，靜置15min，在510nm處測(cè)定其吸光度。根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，按下式計(jì)算樣品中總黃酮的提取率：

式中，C：標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的總黃酮濃度（mg/mL）；V1：待測(cè)液總體積（mL）；V2：測(cè)試液定容體積（mL）；V3：測(cè)試液體積（mL）；M：稱取薄荷樣品的質(zhì)量（g）。

1.2.3單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.3.1料液比對(duì)提取率的影響準(zhǔn)確稱取1.0000g薄荷置于試劑瓶中，分別加入10、20、30、40、50mL的50%乙醇溶液，60℃恒溫水浴1h，超聲處理40min，抽濾，加乙醇溶液定容100mL，按1.2.2方法測(cè)定其提取率，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2.3.2乙醇體積濃度對(duì)提取率的影響準(zhǔn)確稱取1.0000g薄荷置于試劑瓶中，分別加入30%、40%、50%、60%、70%體積濃度的乙醇溶液20mL，在60℃恒溫水浴鍋中水浴1h，放入超聲波清洗機(jī)中超聲處理40min，抽濾，加乙醇溶液定容100mL，按1.2.2方法測(cè)定其提取率，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2.3.3水浴溫度對(duì)提取率的影響準(zhǔn)確稱取1.0000g薄荷置于試劑瓶中，加入50%乙醇溶液20mL，分別在40、50、60、70、80℃恒溫水浴鍋中水浴1h，放入超聲波清洗機(jī)中超聲處理40min，抽濾，加乙醇溶液定容100mL，按1.2.2方法測(cè)定其提取率，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2.3.4超聲時(shí)間對(duì)提取率的影響準(zhǔn)確稱取1.0000g薄荷置于試劑瓶中，加入50%乙醇溶液20mL，60℃恒溫水浴1h，放入超聲波清洗機(jī)中，分別超聲處理20、30、40、50、60min，抽濾，加乙醇溶液定容100mL，按1.2.2方法測(cè)定其提取率，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2.4響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果，采用響應(yīng)面法設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用Box-Behnken的中心組合實(shí)驗(yàn)，選擇對(duì)薄荷總黃酮提取具有顯著影響的三個(gè)因素：乙醇濃度（A）、水浴溫度（B）和超聲時(shí)間（C），采用三因素三水平的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，見(jiàn)表1。

1.2.5數(shù)據(jù)分析采用F檢驗(yàn)對(duì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析以評(píng)價(jià)模型的統(tǒng)計(jì)意義，數(shù)據(jù)分析軟件采用Design Expert 8.0。

2　結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的散點(diǎn)圖，制得如圖1所示，回歸方程為：y=14.401x+0.0066，R2= 0.999。表明蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品在濃度為0.01～0.05mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1　蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1　The standard curve of Rufin

2.2單因素分析

2.2.1料液比對(duì)薄荷總黃酮提取率的影響由圖2可知，薄荷總黃酮提取率在料液比1∶10～1∶20之間，料液比增加，總黃酮提取率隨之增加，這可能是因?yàn)樵黾尤軇?，增加了薄荷粉與溶劑接觸面的濃度差，提高了傳質(zhì)速率［7］。在超聲波提取下，當(dāng)增加溶劑時(shí)，細(xì)胞破碎完全，總黃酮充分溶解。

料液比達(dá)到1∶20以后，薄荷中總黃酮已經(jīng)充分溶解，提取率趨于穩(wěn)定，總黃酮提取率隨料液比增加而趨于穩(wěn)定。當(dāng)料液比達(dá)到1∶50時(shí)，總黃酮提取率稍有減少?？赡苁怯捎谌軇┻^(guò)多時(shí)，有可能使其他物質(zhì)滲出，使溶液黏度增加，影響薄荷黃酮的提取。同時(shí)，溶劑使用量較大，溶劑本身對(duì)超聲波有一定的吸收損耗［11］?？紤]到節(jié)約溶劑和提取效率，選擇料液比為1∶20為最佳提取料液比。

圖2　料液比對(duì)薄荷總黃酮提取的影響Fig.2　The effect of the liquid material rate on total flavonoids yield

2.2.2乙醇體積濃度對(duì)薄荷總黃酮提取率的影響由圖3可知，乙醇體積分?jǐn)?shù)30%～50%之間，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)增加，總黃酮提取率增加。由于薄荷中黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)（苷或苷元、單糖苷、雙糖苷或三糖苷）不同而有很大差異。一般游離的黃酮苷元難溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑及稀堿液中；黃酮類化合物在羥基糖苷化后，水溶性相應(yīng)加大，在有機(jī)溶劑中溶解度則相應(yīng)減少。黃酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇、稀堿液等強(qiáng)極性溶劑中［12］。薄荷中含有大量的黃酮苷類物質(zhì)，使用較大極性的溶劑提取效果較好。50%乙醇體積分?jǐn)?shù)溶劑總黃酮提取率達(dá)到最高，可能是50%乙醇溶劑既有利于以苷類形式存在的大部分黃酮類物質(zhì)浸出，又有利于一些游離的黃酮類物質(zhì)浸出［13］。之后隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)增加，提取率減少，同時(shí)提取液顏色變化明顯。這可能是乙醇體積分?jǐn)?shù)過(guò)高，薄荷中色素、脂溶性物質(zhì)、糖類及黏性物質(zhì)等物質(zhì)大量滲出［14］，影響總黃酮提取，同時(shí)破壞了總黃酮的穩(wěn)定性。故本實(shí)驗(yàn)選擇50%乙醇體積分?jǐn)?shù)，作為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的中心點(diǎn)。

圖3　乙醇濃度對(duì)薄荷總黃酮提取的影響Fig.3　The effect of the ethanol concentration on total flavonoids yield

2.2.3水浴溫度對(duì)薄荷總黃酮提取率的影響由圖4可知，當(dāng)水浴溫度在40～60℃之間，隨著溫度升高，薄荷總黃酮提取率增大，可能是溫度升高加快了分子熱運(yùn)動(dòng)速度和提高了總黃酮滲透擴(kuò)散溶解能力，加快物質(zhì)的溶出，但雜質(zhì)也易被提取出［15］。

水浴溫度達(dá)到60℃以后，總黃酮提取率趨于穩(wěn)定，總黃酮幾乎完全浸出，溶劑達(dá)到飽和。當(dāng)水浴溫度超過(guò)70℃以后，總黃酮提取率逐漸降低，可能溫度過(guò)高，總黃酮組織結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性被破壞，氧化分解，總黃酮含量降低。同時(shí)，溫度過(guò)高，溶劑揮發(fā)，造成溶劑損失，影響薄荷總黃酮提取效果。本實(shí)驗(yàn)選擇60℃水浴溫度作為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的中心點(diǎn)。

圖4　水浴溫度對(duì)薄荷總黃酮提取的影響Fig.4　The effect of bath temperature on total flavonoids yield

2.2.4超聲時(shí)間對(duì)薄荷總黃酮提取率的影響由圖5可知，超聲時(shí)間20～40min之間，隨著時(shí)間增加，總黃酮提取率逐漸增加，主要由于超聲波產(chǎn)生強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、機(jī)械振動(dòng)、乳化、擴(kuò)散、擊碎和攪拌作用，擊破植物細(xì)胞膜，增大物質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而增加了溶劑向細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散，加速薄荷中總黃酮進(jìn)入溶劑。同時(shí)，超聲波的熱效應(yīng)使水溫基本在57℃左右，對(duì)原料起到了水浴加熱的作用［16］。

圖5　超聲時(shí)間對(duì)薄荷總黃酮提取的影響Fig.5　The effect of ultrasonic treatment time on total flavonoids yield

超聲波處理在開(kāi)始段，時(shí)間與有效物質(zhì)的提取率呈正相關(guān)，在達(dá)到一定時(shí)間后提取效果不再明顯，由于隨著時(shí)間增加，超聲波對(duì)細(xì)胞膜破碎作用進(jìn)一步加大，粘液等雜質(zhì)相應(yīng)增加，使浸提液粘度增大，擴(kuò)散速度降低，影響總黃酮提取率［17］。當(dāng)超聲時(shí)間達(dá)到40min以后，總黃酮提取率有所降低，可能超聲波處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，總黃酮被破壞，同時(shí)超聲時(shí)間增加，溫度也隨之升高，總黃酮穩(wěn)定性降低。隨著超聲時(shí)間的增加，一部分黃酮類化合物被超聲波分解［18］，選擇30、40、50min超聲時(shí)間，進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。

2.3薄荷總黃酮響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)分析

2.3.1多元二次模型方程的建立與檢驗(yàn)薄荷總黃酮提取的響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)選取3個(gè)對(duì)提取效果影響較顯著的因素：乙醇濃度（A）、水浴溫度（B）和超聲時(shí)間（C），根據(jù)Box-Beknhen中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)三因素三水平的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了17組實(shí)驗(yàn)，其中包括5組中心點(diǎn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，每組實(shí)驗(yàn)平行重復(fù)三次，數(shù)據(jù)結(jié)果如表2所示。

表2　Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果Table 2　Box-Behnken design matrix and the experimental result

利用Design Expert 8.0軟件對(duì)表2中的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，得到薄荷總黃酮提取的回歸方程為：Y=3.102+0.17125A+0.005B-0.08625C-0.18225A2-0.05975B2-0.05725C2+0.065AB+0.0225AC+0.105BC。

對(duì)響應(yīng)面多元二次模型進(jìn)行方差分析，分析結(jié)果如表3所示。從表3數(shù)據(jù)中可知，本實(shí)驗(yàn)所選用的二次多項(xiàng)模型p=0.0002＜0.01，說(shuō)明該模型二次方程極顯著，表明本實(shí)驗(yàn)方法是可靠的，該方程對(duì)模擬真實(shí)的三因素三水平的分析是可行的［19］。模型失擬項(xiàng)在α=0.05水平上不顯著（p=0.8716＞0.05），說(shuō)明未知因素對(duì)本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果干擾小，其R2為0.9703說(shuō)明該二次多項(xiàng)模型93.20%的響應(yīng)值的變化能解釋，有總變異的6.80%不能用該二次多項(xiàng)模型來(lái)解釋，表明該模型的擬合度好，用此模型可以對(duì)薄荷總黃酮提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。

表3　二次多項(xiàng)模型方差分析結(jié)果Table 3　Variance analysis for the fitted quadratic polynomial model

對(duì)該回歸方程的回歸系數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，其結(jié)果如表4所示?？芍淮雾?xiàng)A（p＜0.01）和C（p＜0.01），二次項(xiàng)A2（p＜0.01）和C2（p＜0.01）均在1%的水平內(nèi)顯著（極顯著），二次項(xiàng)B2（p＜0.05）在5%的水平內(nèi)顯著，表明在薄荷總黃酮提取工藝過(guò)程中，乙醇濃度和超聲時(shí)間對(duì)總黃酮提取有極其顯著的影響。交互項(xiàng)BC（p＜0.01）在1%的水平內(nèi)顯著（極顯著），AB（p＜0.05）在5%的水平內(nèi)顯著，表明水浴溫度和超聲時(shí)間的交互作用對(duì)總黃酮的提取有極其顯著的影響，乙醇濃度和水浴溫度的交互作用對(duì)總黃酮的提取也有顯著的影響。

表4　回歸方程系數(shù)顯著性檢驗(yàn)結(jié)果Table 4　Regression coefficients and their significance of the quadratic model

圖6　乙醇濃度與水浴溫度交互作用影響總黃酮提取率的曲面圖Fig.6　Response surface plot for the effects of variables on the total flavonoids yield versus ethanol concentration and bath temperature

2.3.2響應(yīng)面分析和優(yōu)化通過(guò)響應(yīng)面二次多項(xiàng)模型方程的建立，得出響應(yīng)面的曲面圖，如圖6～圖8所示。通過(guò)動(dòng)態(tài)圖可分析和評(píng)價(jià)任意兩種因素的交互作用影響總黃酮提取率的效應(yīng)，還可以從圖中確定最佳因素的水平范圍。等高線的形狀反映出交互作用影響效應(yīng)的強(qiáng)弱與大小，橢圓形表示兩種因素的交互作用影響顯著，而圓形則表示兩種因素的交互作用影響不顯著［20］。

由圖6可以看出乙醇濃度與水浴溫度對(duì)總黃酮提取率的交互作用的影響效應(yīng)。從等高線圖可知，乙醇濃度與水浴溫度的交互作用影響顯著。將超聲時(shí)間固定在0水平時(shí)，總黃酮提取率隨著乙醇濃度的增加而先增加后降低，當(dāng)乙醇濃度達(dá)到55%時(shí)達(dá)最大值后開(kāi)始降低。總黃酮提取率隨著水浴溫度的升高而增加，從圖6中也可以乙醇濃度對(duì)提取率的曲線較為陡峭，說(shuō)明在提取過(guò)程中乙醇濃度的對(duì)提取率的影響大于水浴溫度。

圖7 乙醇濃度與超聲時(shí)間交互作用影響總黃酮提取率的曲面圖Fig.7　Response surface plot for the effects of variables on the total flavonoids yield versus ethanol concentration and ultrasonic treatment time

圖7表示乙醇濃度與超聲時(shí)間對(duì)薄荷總黃酮提取率的交互作用的影響效應(yīng)。其等高線圖表明乙醇濃度與超聲時(shí)間的交互作用影響不顯著。當(dāng)把水浴溫度固定在0水平，隨著超聲時(shí)間的增加，提取率呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)，在40min，總黃酮提取率達(dá)到最大點(diǎn)，隨著時(shí)間增加，而略有降低，可能由于超聲波對(duì)細(xì)胞膜破碎作用進(jìn)一步加大，粘液等雜質(zhì)相應(yīng)增加，使浸提液粘度增大，擴(kuò)散速度降低，影響總黃酮提取率。

圖8　水浴溫度與超聲時(shí)間交互作用影響總黃酮提取率的曲面圖Fig.8　Response surface plot for the effects of variables on the total flavonoids yield versus bath temperature and ultrasonic treatment time

圖8反映了水浴溫度與超聲時(shí)間對(duì)薄荷總黃酮提取率的交互作用的影響效應(yīng)。從圖8中的等高線圖及曲面圖可知，水浴溫度與超聲時(shí)間這兩種因素對(duì)總黃酮提取率的交互作用影響十分顯著。當(dāng)乙醇濃度固定在0水平上，隨著水浴溫度的增大，總黃酮提取率呈增大趨勢(shì)。隨超聲時(shí)間的增加，總黃酮提取率先增加后減小。水浴溫度為60℃，超聲時(shí)間為40min時(shí)，薄荷總黃酮提取率獲得最大值。

2.3.3模型驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)根據(jù)Box-Behnken實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果以及二次多項(xiàng)回歸方程，并利用Design Expert 8.0軟件，獲得本實(shí)驗(yàn)薄荷總黃酮提取率最高時(shí)的各因素的最佳提取條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、水浴溫度50℃、超聲時(shí)間30min。在此條件下，薄荷總黃酮提取率為3.17%。對(duì)此優(yōu)化提取條件進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，重復(fù)進(jìn)行三次，測(cè)得薄荷總黃酮提取率為3.06%、3.18%和3.09%，平均值為3.11%±0.06%，與理論計(jì)算值的誤差在±1%以內(nèi)，該模型能較好地預(yù)測(cè)實(shí)際的薄荷總黃酮提取情況。

3　結(jié)論

通過(guò)乙醇溶劑提取薄荷中總黃酮，輔助超聲波提取，采用可見(jiàn)分光光度計(jì)法測(cè)定總黃酮含量，以乙醇濃度、液料比、水浴溫度和超聲提取時(shí)間為因素，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提取工藝，采用乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、料液比1∶20、水浴溫度50℃和超聲時(shí)間30min的條件，測(cè)得井岡山野生薄荷全草的總黃酮提取率在3.11%±0.06%，優(yōu)化后得到的預(yù)測(cè)結(jié)果與實(shí)驗(yàn)結(jié)果較吻合。與同類研究相比，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的薄荷總黃酮含量有很大的差異，不同采摘期薄荷中黃酮含量也不一樣［21］。本研究為薄荷黃酮類化合物的利用提供理論依據(jù)，為提高薄荷的綜合利用價(jià)值奠定基礎(chǔ)。

［1］吳征鎰，李錫文.中國(guó)植物志［M］.北京：北京科學(xué)出版社，1977，66：260-276.

［2］高賓，郭淑珍，趙丹.薄荷的鑒別與應(yīng)用［J］.首都醫(yī)藥，2012（7）：47-49.

［3］梁呈元，李維林，張涵慶，等.薄荷化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)野生植物資源，2003，22（3）：9-12.

［4］黃景波，馮學(xué)華，彭星元，等.天然薄荷提取物在洗發(fā)香波去頭屑體系中的應(yīng)用研究［J］.林業(yè)建設(shè)，2005（4）：3-5.

［5］梁振益，吳娟.薄荷提取物抗氧化性能的研究［J］.中國(guó)油脂，2008，33（2）：26-28.

［6］徐軍，武毛毛，鄧芬，等.薄荷中黃酮的研究進(jìn)展［J］.內(nèi)江科技，2012（1）：23-24.

［7］陶亮亮，胡瑞，丁雷濤，等.超聲輔助提取薄荷中總黃酮的工藝研究［J］.飲料工業(yè)，2011，14（6）：31-33.

［8］伍曉春.超聲波輔助提取薄荷總黃酮工藝的研究［J］.宜春學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，33（4）：130-132.

［9］邱賀媛，章宋潔.薄荷葉中黃酮類物質(zhì)的提取及其抗氧化活性研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（34）：19335-19337.

［10］侯學(xué)敏，李林霞，張直峰，等.響應(yīng)面法優(yōu)化薄荷葉總黃酮提取工藝及抗氧化活性［J］.食品科學(xué)，2013（6）：124-128.

［11］喬孟，屈曉清，丁之恩.響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助提取湖北海棠葉中總黃酮工藝［J］.食品科學(xué)，2013，34（2）：143-147.

［12］徐懷德.天然產(chǎn)物提取工藝學(xué)［M］.北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，2008：6-12.

［13］張淑蘭，吳燕子，王艷梅，等.響應(yīng)面法優(yōu)化核桃隔膜總黃酮提取工藝［J］.中國(guó)藥房，2010，21（27）：2519-2521.

［14］賀偉強(qiáng)，向天勇，陶昆.響應(yīng)面法優(yōu)化超聲輔助提取桑葉總黃酮的工藝研究［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，28（33）：296-301.

［15］吳現(xiàn)芳，趙成愛(ài)，余梅燕，等.響應(yīng)面法優(yōu)化八寶景天葉總黃酮的超聲提取工藝［D］.長(zhǎng)春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

［16］盧艷花.中醫(yī)有效成分提取及分離技術(shù)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：55-79.

［17］趙熙，粟本文，鄭紅發(fā)，等.響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助提取綠茶總黃酮工藝的研究［J］.茶葉科學(xué)，2010，30（4）：295-301.

［18］王曉陽(yáng)，唐琳，趙壘.響應(yīng)面法優(yōu)化刺槐花多酚的超聲提取工藝［J］.食品科學(xué)，2011，32（02）：66-69.

［19］鄧?yán)?，王曉虹，韓濤，等.響應(yīng)曲面法優(yōu)化蟲(chóng)草素和蟲(chóng)草多糖的綜合提取工藝［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2013，25（10）：1428-1435.

［20］高丹丹，徐紀(jì)平，李貞子.木瓜蛋白酶水解馬鈴薯蛋白水解條件的研究［J］.食品工業(yè)科技，2012，33（8）：267-271.

［21］呂爽，田呈瑞，王虎，等.不同薄荷多酚、總黃酮及體外抗氧化性比較［J］.食品工業(yè)科技，2011，32（8）：160-163.

Optimization of extraction technology of total flavonoids from Mentha haplocalyx by response surface methodology

GAO Dan-dan，GUO Peng-hui，QI Gao-zhan，WEN Hai-chao
（College of Life Science and Engineering，Northwest University for Nationalities，Lanzhou 730030，China）

Ultrasonic-assisted method was used to extract the total flavonoids from Mentha haplocalyx，and the effects of ethanol concentration，ultrasonic treatment time，solid-liquid ratio and bath temperature on the extraction rate of total flavonoids were investigated.On the basis of single factor tests，the extraction technology of total flavonoids from Mentha haplocalyx was optimized by response surface methodology.The optimum conditions obtained were as follows：ethanol concentration was 50%，extraction time was 30min，solid-liquid ratio was 1∶20 and bath temperature was 50℃.Under this conditions，the extraction rate values of total flavonoids was 3.11%±0.06%.

Mentha haplocalyx；total flavonoids；ultrasonic；response surface methodology

TS255.1

B

1002-0306（2015）02-0299-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.02.056

2014－05－21

高丹丹（1983-），女，博士研究生，副教授，研究方向：食品生物技術(shù)。

西北民族大學(xué)中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金（31920130047）。