4種梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用及評(píng)價(jià)

王佳 王媛

【摘要】 目的 探究4種梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用效果。 方法 2013年12月-2014年12月我院所有送檢的1000例標(biāo)本用TP - ELISA法篩查，其中47例陽(yáng)性標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行 TPPA 、RPR，TP-AD的檢測(cè)。 結(jié)果 1000例標(biāo)本首先用TP - ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，檢出陽(yáng)性標(biāo)本47例，檢出率為4.7%。 以TPPA檢測(cè)的結(jié)果與RPR法和TP-AD進(jìn)行比較，TP-AD與TPPA比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），TPPA法與RPR法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。 結(jié)論 建議4種方法的檢測(cè)順序?yàn)?，ELISA試驗(yàn)進(jìn)行初篩，陽(yáng)性標(biāo)本用TP-AD比對(duì)，根據(jù)需要再進(jìn)一步做TPPA與RPR進(jìn)行確診和病程監(jiān)測(cè)。

【關(guān)鍵詞】梅毒血清學(xué)；檢測(cè)方法；臨床應(yīng)用；評(píng)價(jià)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R759.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2015）03-0596-02

梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種性傳播疾病，具有高度的傳染性和致病性。所以選擇簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法對(duì)該病的早期診斷及疾病控制有著重要意義[1]。本研究對(duì)臨床常用的梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP - ELISA）、 TPPA 、RPR和梅毒螺旋體抗體檢測(cè)-乳膠法（TP -AD）4種方法進(jìn)行比較，現(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源：標(biāo)本均來(lái)自于2013年12月-2014年12月我院1000例門(mén)診與住院患者，包括了行體檢的健康孕、產(chǎn)婦的人群。

1.2 儀器：DNM960Z-G酶標(biāo)儀，DEM-3自動(dòng)洗板機(jī)。

1.3 試劑：TP - ELISA試劑盒由廈門(mén)英科新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)，TPPA試劑盒由日本富士瑞必歐株式會(huì)社生產(chǎn)，RPR試劑盒由上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，TP -AD試劑盒由杭州艾博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)。

1.4 檢驗(yàn)方法：所有送檢的1000例標(biāo)本用TP - ELISA法篩查，其中47例陽(yáng)性標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行 TPPA 、RPR、TP-AD的檢測(cè)。（1）TP - ELISA：為雙抗原夾心一步法用DNM960Z -G酶標(biāo)儀檢測(cè)， 標(biāo)本A 值≥cut off值為陽(yáng)性。（2）TPPA：取待測(cè)血清 25ul加入標(biāo)本稀釋液100ul，混勻備用，使用特定的微孔板，先在選定孔中每孔加入25ul稀釋液，加入標(biāo)本混合液行倍比稀釋?zhuān)?：2 、1：4、1：8、1：16 、1：32稀釋?zhuān)?，另設(shè)一孔作為對(duì)照孔僅加入50ul稀釋液，再在每孔包括對(duì)照中加入TPPA試劑 25ul，充分混勻后于室溫15℃-15℃封閉靜置2h后觀察結(jié)果。每批標(biāo)本操作時(shí)應(yīng)同時(shí)取陰陽(yáng)性質(zhì)控按同樣方法同時(shí)檢測(cè)以保證結(jié)果可靠。（3）RPR：在卡片規(guī)定的圓圈內(nèi)加入50ul待測(cè)血清，用專(zhuān)用針頭和滴管加抗原懸液1滴，轉(zhuǎn)動(dòng)卡片8min。出現(xiàn)黑色凝集為陽(yáng)性。可按需以樣本稀釋液或無(wú)菌生理鹽水作樣本1：2 、1：4、1：8、1：16 、1：32稀釋后再行檢測(cè)以作半定量報(bào)告。（4）TP -AD：將試劑置于平坦的臺(tái)面上，垂直滴加2滴標(biāo)本置于加樣區(qū)，再加1滴緩沖液，同時(shí)計(jì)時(shí)，等待紅色帶出現(xiàn)，10-30min內(nèi)判斷。具體操作方法嚴(yán)格按照各個(gè)試劑盒的要求進(jìn)行，標(biāo)準(zhǔn)的判斷也依據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：以TPPA的結(jié)果與 RPR和TP-AD的結(jié)果進(jìn)行比較，采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。乳膠法P>0.05為差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，RPR法 P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果 1000例標(biāo)本首先用TP - ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，檢出陽(yáng)性標(biāo)本47例，檢出率為4.7%。 檢出的47例陽(yáng)性標(biāo)本同時(shí)做TPPA和 RPR 、TP-AD的檢測(cè)，結(jié)果TPPA陽(yáng)性46例，符合率97.87% ，RPR檢出陽(yáng)性23例，符合率48.93%。TP-AD出陽(yáng)性45例，符合率95.74%。以TPPA檢測(cè)的結(jié)果與RPR法和TP-AD進(jìn)行比較，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，TP-AD與TPPA比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.168，P>0.05），TPPA法與RPR法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=87.679，P<0.01）。詳見(jiàn)表1。

表1 陽(yáng)性標(biāo)本的幾種方法檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

在本研究中，1000例標(biāo)本采用用TP - ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，檢出陽(yáng)性標(biāo)本47例，檢出率為4.7%，低于徐曉琴等[2]報(bào)道的6.07%，推測(cè)結(jié)果的差異性在于與浙江等沿海地區(qū)相比，四川瀘州地區(qū)處于內(nèi)陸地區(qū)，其經(jīng)濟(jì)大大落后于浙江，且標(biāo)本中部分是孕、產(chǎn)婦及健康人群的體檢標(biāo)本，因此發(fā)生率偏低。

本研究采用的檢測(cè)方法中，TPPA具有高靈敏度、高特異性、高準(zhǔn)確度的特點(diǎn)，但由于操作較繁雜，試劑較昂貴，結(jié)果判斷不易自動(dòng)化，因而受限于醫(yī)院大規(guī)模的篩查檢測(cè)，適用于作為確診試驗(yàn)。TP-AD用于定性檢測(cè)人全血、血清和血漿樣本中的梅毒螺旋體抗體，是特異性抗體的檢測(cè)。該法采用高特異性抗原抗體反應(yīng)原理及乳膠標(biāo)記免疫層析分析技術(shù)， 操作簡(jiǎn)單、方便，檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)快速、準(zhǔn)確。RPR在梅毒螺旋體感染的不同時(shí)期檢出率差別較大，在梅毒感染的最初4周內(nèi)，由于機(jī)體產(chǎn)生的反應(yīng)素量不足，一般為陰性，不易被RPR法檢出。因此，在本研究中，TP-AD與TPPA比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），TPPA法與RPR法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

綜上可知，結(jié)合上面的分析，4種方法各有所長(zhǎng)[3]。TP - ELISA靈敏度高，特異性好，適用于大批量的篩查工作，TPPA特異性高、準(zhǔn)確性好，被公認(rèn)為確診試驗(yàn)，RPR干擾因素多及病程對(duì)其有影響較大，適用于病程監(jiān)測(cè)及療效觀察。TP-AD操作簡(jiǎn)單，不需特殊儀器，可作為定性試驗(yàn)及方法的比對(duì)。建議4種方法的檢測(cè)順序?yàn)椋篍LISA試驗(yàn)進(jìn)行初篩，陽(yáng)性標(biāo)本用TP-AD比對(duì)，根據(jù)需要再進(jìn)一步做TPPA與RPR進(jìn)行確診和病程監(jiān)測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]顧偉鳴，楊陽(yáng)，吳磊等.梅毒血清學(xué)試劑性能評(píng)估方案的優(yōu)化及應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，（11）：1169-1174.

[2]徐曉琴，傅更鋒，張之等.梅毒血清學(xué)陰性者性行為特征和梅毒血清學(xué)復(fù)核結(jié)果分析[J].中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志，2013，29（10）：669-670.

[3]武強(qiáng)，王妹芳，張群峰等.梅毒血清學(xué)新篩查模式的可行性評(píng)價(jià)[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（17）：3770-3771，379病例報(bào)告2015年第3期2015年第3期