王麗琴　韓燕雁

（貴州省晴隆縣農(nóng)業(yè)局動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州晴隆　561400）

羊布魯氏菌病的實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)方法的比較

王麗琴韓燕雁

（貴州省晴隆縣農(nóng)業(yè)局動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州晴隆561400）

目的比較兩種檢測(cè)方法檢測(cè)布魯氏菌病的敏感性和準(zhǔn)確性。方法采用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）和試管凝集試驗(yàn)（SAT）兩種檢測(cè)方法對(duì)動(dòng)物進(jìn)行布魯氏菌病血清學(xué)檢測(cè)。結(jié)果兩種檢測(cè)方法對(duì)布魯氏菌病檢測(cè)沒(méi)有顯著性差異，RBPT的陽(yáng)性率明顯約高于SAT。結(jié)論兩種方法同時(shí)使用可提高布魯氏菌病的檢出率，對(duì)治療和控制布魯氏菌病起到積極作用。結(jié)果表明：兩種試驗(yàn)的符合率在90%以上。布魯氏病影響從事畜牧業(yè)生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)、加工、運(yùn)輸?shù)热巳旱纳眢w健康，也對(duì)畜牧業(yè)健康發(fā)展危害極大。主要是對(duì)陽(yáng)性動(dòng)物進(jìn)行淘汰、凈化，為了減少該病的發(fā)生。對(duì)非疫區(qū)、自繁自養(yǎng)，確需要從外地引種，要隔離2個(gè)月，經(jīng)檢疫確認(rèn)健康者才能混群。對(duì)疫區(qū)進(jìn)行定期多次檢疫，隔離并逐步淘汰陽(yáng)性家畜，培育健康畜群，同時(shí)做好消毒工作。為了確保畜牧業(yè)健康發(fā)展必須做好獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室工作。

布魯氏菌病虎紅平板試驗(yàn)（RBPT） 試管凝集試驗(yàn)（SAT） 比較

布魯氏菌病是一種布魯氏菌引起的急性或慢性的人畜共患病。動(dòng)物感染了布魯氏菌病后，一般不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀，病程發(fā)展緩慢。其主要表現(xiàn)為：懷孕母畜常流產(chǎn)，但并非必然現(xiàn)象，流產(chǎn)后伴隨有胎衣滯留、胎兒死亡、化膿性子宮炎。有的關(guān)節(jié)炎、乳腺炎等。公畜主要表現(xiàn)為睪丸炎或附睪炎。人感染布氏桿菌后，病菌在人體中產(chǎn)生菌血癥和毒血癥，累及各個(gè)器官，慢性期多侵及脊柱和大關(guān)節(jié)。運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)除侵及脊柱外還可侵及骶髂、髖、膝、肩關(guān)節(jié)。影響從事畜牧業(yè)生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)、加工、運(yùn)輸?shù)热巳旱纳眢w健康，也對(duì)畜牧業(yè)健康發(fā)展危害極大。主要是對(duì)陽(yáng)性動(dòng)物進(jìn)行淘汰、凈化，為了減少該病的發(fā)生。對(duì)非疫區(qū)、自繁自養(yǎng)，確需要從外地引種，要隔離2個(gè)月，經(jīng)檢疫確認(rèn)健康者才能混群。對(duì)疫區(qū)進(jìn)行定期多次檢疫，隔離并逐步淘汰陽(yáng)性家畜，培育健康畜群，同時(shí)做好消毒工作。為了確保畜牧業(yè)健康發(fā)展必須做好獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室工作。

1　材料與方法

1.1材料

待檢樣品采集于不同的3個(gè)養(yǎng)羊場(chǎng)，分3個(gè)批次，共計(jì) 2 391份。待檢樣品于-20 ℃放存。

1.2檢測(cè)試劑

虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原及陽(yáng)性血清由青島易邦生物工程有限公司提供，批準(zhǔn)文號(hào)：獸藥生字（2011）150138017；試管凝集試驗(yàn)的抗原及陽(yáng)性血清由青島易邦生物工程有限公司提供，批準(zhǔn)文號(hào)（2011）150138011。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1血清采集及血清制備 將羊保定采頸靜脈血，血樣采好后，用標(biāo)記筆在一次性采血器上注明對(duì)應(yīng)的羊耳標(biāo)號(hào)，除去針頭，整齊的放置在保溫箱內(nèi)，及時(shí)的送回實(shí)驗(yàn)室離心后取上清液進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)后的血清于-20 ℃的冰箱內(nèi)保存?zhèn)浞荨?/p>

1.3.2虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT） 本試驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)按中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 18646—2002）進(jìn)行，用標(biāo)記筆在滅菌干凈的玻璃板上編上號(hào)，用移液器吸取30μl虎紅平板凝集抗原30μl，在分別吸取對(duì)應(yīng)血清30μl與虎紅平板凝集抗原混勻。同時(shí)以陰陽(yáng)性血清作對(duì)照。在室溫下（20 ℃）4～10 min內(nèi)記錄反應(yīng)結(jié)果。被檢血清出現(xiàn)顆?；蛐鯛畹哪F(xiàn)象均為陽(yáng)性，完全不凝集的判為陰性，無(wú)可凝反應(yīng)。

1.3.3試管凝集試驗(yàn)（SAT） 本試驗(yàn)按操作標(biāo)準(zhǔn)按中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 18646—2002）進(jìn)行，將標(biāo)記好的試管，第1管標(biāo)記編號(hào)后加1.15 ml稀釋液；第2～4管各加入0.5 ml稀釋液；然后用液移器在第1管中加入被檢血清0.1 ml，再用液移器連續(xù)吹打5～6次混勻。吸取0.25 ml混合液棄去。再吸取0.5 ml混勻液加入第2管，如前述方法混勻。再吸第3管混勻液0.5 ml到第3管，如此倍比稀釋到第4管，從第4管棄去混勻液0.5 ml。稀釋度從第1管到第4管分別是1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。再將0.5 ml 20倍稀釋的抗原加入已稀釋好的各試管中，并振搖均勻，血清稀釋度為1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。同時(shí)做陰、陽(yáng)、抗原對(duì)照并配制比濁管振搖均勻。最后將全部試管置37℃溫箱中24h，取出檢查并記錄結(jié)果。以比濁管為標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果。按各試管上層液體清亮度判讀：

（1）++++菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；

（2）+++菌體幾乎完全凝集，上層液體100%清亮；

（3）++菌體凝集顯著，液體50%清亮；

（4）+凝集物有沉淀，液體25%清亮；

（5）-凝集物無(wú)沉淀，液體均勻混濁。

2　結(jié)果

通過(guò)用虎紅平板凝集試驗(yàn)對(duì)2391份羊血清進(jìn)行檢測(cè)，其中第1批503份血清用虎紅平板凝集試驗(yàn)檢出23份陽(yáng)性（陽(yáng)性率為4.57%），用試管凝集試驗(yàn)檢出20份陽(yáng)性（陽(yáng)性率為3.98%）；第2批次739份血清用虎紅平板凝集試驗(yàn)檢出130份陽(yáng)性（陽(yáng)性率為18%），用試管凝集試驗(yàn)檢出126份陽(yáng)性（陽(yáng)性率為17.1%）；第3批次1 149份用虎紅平板凝集試驗(yàn)檢出153份陽(yáng)性（陽(yáng)性率為13.3%），用試管凝集試驗(yàn)檢出148份陽(yáng)性（陽(yáng)性率為12.8%），詳見(jiàn)表1。與試管凝集試驗(yàn)的敏感性、特異性和符合率分別是100%，98.06%，96.08%，詳見(jiàn)表2。

表1　虎紅平板凝集試驗(yàn)與試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)羊血清結(jié)果對(duì)照表

表2　虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)的結(jié)果比較

3　討論

從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，用RBPT檢測(cè)羊布魯氏菌病，2391只羊中共檢測(cè)出陽(yáng)性306只，陽(yáng)性率為12%，而用SAT檢出陽(yáng)性為294只，陽(yáng)性率為11.3%，說(shuō)明用RBPT檢測(cè)存在假陽(yáng)性。與SAT相比，RBPT的敏感性為100%、特異性為98.06、符合率為96.08%，說(shuō)明RBPT用于樣品的初篩。因方法操作簡(jiǎn)單、使用時(shí)間短、成本低。所以該方法仍可以用于不魯氏菌的大面積監(jiān)測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查。而SAT特異性高，檢測(cè)準(zhǔn)確，但操作麻煩，費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、不適于作大面積的篩選檢測(cè)。在實(shí)驗(yàn)室操作中把兩種方法結(jié)合起來(lái)用，互補(bǔ)優(yōu)劣。而SAT既可以定性，也可以定量，因而在判定反應(yīng)強(qiáng)度上比RBPT更精確。

［1］ 樊三忠，劉金虎，陳冬毅，等.虎紅平板試驗(yàn)與試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)奶牛布魯菌病的比較［J］.中國(guó)動(dòng)物檢疫，2009，26（9）：52-53.